Name: identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)
Uploaded: 2012-04-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل مركز فلوريدا لأبحاث استئصال ورم من الدماغ، وA. بريستون ويلز الابن مركز للعلاج استئصال ورم من الدماغ والمعاهد الوطنية للصحة (1R21CA141020-01).

1. إعداد تعليق خلية واحدة ورم أرومي دبقي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تم تأسيس Gliomasphere الثقافة والمحافظة باستخدام مقايسة neurosphere (NSA) والتي سبق وصفها 2،11،12. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في الوقت المناسب لالركض وgliomaspheres، تتم إزالة المتوسطة التي تح...

<ol>
	<li>Tian, T., Olson, S., Whitacre, J. M., Harding, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+of+cancer+robustness+and+evolvability.">The origins of cancer robustness and evolvability.</a> Integr. Biol. (Camb). 3, 17-30 (2011).</li><li>Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+label-retaining+tumour-initiating+cells+in+human+glioblastoma.">Evidence for label-retaining tumour-initiating cells in human glioblastoma.</a> Brain. 134 (Pt. 5), 1331-1343 (2011).</li><li>Krishnamurthy, K., Wang, G., Rokhfeld, D., Bieberich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deoxycholate+promotes+survival+of+breast+cancer+cells+by+reducing+the+level+of+pro-apoptotic+ceramide.">Deoxycholate promotes survival of breast cancer cells by reducing the level of pro-apoptotic ceramide.</a> Breast Cancer Res. 10, 106-106 (2008).</li><li>Pece, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+and+molecular+heterogeneity+of+breast+cancers+correlates+with+their+cancer+stem+cell+content.">Biological and molecular heterogeneity of breast cancers correlates with their cancer stem cell content.</a> Cell. 140, 62-73 (2010).</li><li>Roesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+temporarily+distinct+subpopulation+of+slow-cycling+melanoma+cells+is+required+for+continuous+tumor+growth.">A temporarily distinct subpopulation of slow-cycling melanoma cells is required for continuous tumor growth.</a> Cell. 141, 583-594 (2010).</li><li>Dembinski, J. L., Krauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+analysis+of+a+slow+cycling+stem+cell-like+subpopulation+in+pancreas+adenocarcinoma.">Characterization and functional analysis of a slow cycling stem cell-like subpopulation in pancreas adenocarcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 611-623 (2009).</li><li>Graham, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive,+quiescent,+Philadelphia-positive+stem+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+are+insensitive+to+STI571+in+vitro.">Primitive, quiescent, Philadelphia-positive stem cells from patients with chronic myeloid leukemia are insensitive to STI571 in vitro.</a> Blood. 99, 319-325 (2002).</li><li>Holyoake, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+quiescent+leukemic+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+spontaneously+initiate+factor-independent+growth+in+vitro+in+association+with+up-regulation+of+expression+of+interleukin-3.">Primitive quiescent leukemic cells from patients with chronic myeloid leukemia spontaneously initiate factor-independent growth in vitro in association with up-regulation of expression of interleukin-3.</a> Blood. 97, 720-728 (2001).</li><li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+dyes+for+lymphocyte+migration+and+proliferation+studies.">Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies.</a> Immunol. Cell Biol. 77, 499-508 (1999).</li><li>Lyons, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysing+cell+division+in+vivo+and+in+vitro+using+flow+cytometric+measurement+of+CFSE+dye+dilution.">Analysing cell division in vivo and in vitro using flow cytometric measurement of CFSE dye dilution.</a> J. Immunol. Methods. 243, 147-154 (2000).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+Human+Glioblastoma+Multiforme+Tumor+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (56), e3633-e3633 (2011).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393-e2393 (2010).</li></ol>

وقد أظهرت عددا متزايدا من الدراسات على أهمية وجود حجرة الفرعية بطيئة تقسيم الخلايا في سرطان التي تسهم في تشكيل الورم والعلاج المقاومة 2-8. ولذلك فمن الأهمية بمكان لوصف وتوحيد الطرق التجريبية تمكن دراسة هذه حيوانية معينة من الخلايا أو أكثر لمقارنة مجموعات سكاني?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> نوع </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC متوسطة بصل (الإنسان) </td><td> متوسط </td><td> وقف تقنيات الخليوي </td><td> 05750 </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC المكملات انتشار (الإنسان) </td><td> الملحق المتوسطة </td><td> وقف تقنيات الخليوي </td><td> 05753 </td></tr><tr><td> 0.05٪ التربسين EDTA- </td><td> كاشف </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td></tr><tr><td> فول الصويا التربسين المانع </td><td> كاشف </td><td> سيجما </td><td> T6522 </td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتوميسين </td><td> كاشف </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> T25 قارورة </td><td> ثقافة وير </td><td> Nalge نونك الدولية </td><td> 136196 </td></tr><tr><td> T80 قارورة </td><td> ثقافة وير </td><td> Nalge نونك الدولية </td><td> 178905 </td></tr><tr><td> 15 مل أنابيب </td><td> ثقافة وير </td><td> BD الصقر </td><td> 352096 </td></tr><tr><td> 50 مل أنابيب </td><td> ثقافة وير </td><td> BD الصقر </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> EGF </td><td> عامل النمو </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td></tr><tr><td> CellTrace انتشار الخليوي CFSE كيت </td><td> الفلورسنت انقسام الخلية تتبع صبغ </td><td> الجزيئية مجسات، إينفيتروجن </td><td> C34554 </td></tr></tbody></table>

identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)

عدم التجانس الورم يمثل سمة أساسية دعم متانة الورم ويشكل عائقا أساسيا في وضع استراتيجيات علاجية 1. للتغلب على مسألة عدم التجانس الورم، فمن الضروري لتطوير المقايسات وأدوات تمكينية المظهري، (EPI) تحديد الوراثية والوظيفية وتوصيف المجموعات السكانية الفرعية التي تدفع الأمراض السرطانية مرض محدد، وتمثل الأهداف ذات الصلة سريريا. والآن راسخة أن الأورام تظهر متميزة الفرعية كسور الخلايا مع ترددات مختلفة من انقسام الخلايا، والذي يرتبط بشكل إيجابي على معايير وظيفية يجري الدراجات بطيئة مع القدرة تشكيل الورم في سرطان عدة بما في ذلك الدماغ والجلد والثدي و البنكرياس وكذلك سرطان الدم 2-8. تم استخدام صبغة الفلورسنت carboxyfluorescein succinimidyl استر (CFSE) لتتبع وتيرة انقسام الخلايا في المختبر والمجراة في الدم المنقولة رumors والأورام الصلبة مثل ورم أرومي دبقي 2،7،8. يتم تحويل الخلايا نفيذ غير الفلورسنت المؤيدة لتعاطي المخدرات من قبل CFSE الاسترات داخل الخلايا إلى مجمع الفلورسنت، والتي يتم الاحتفاظ داخل الخلايا بواسطة ملزمة تساهميا إلى البروتينات من خلال رد فعل شاردة في succinimidyl مع مجموعات أمين الخلايا لتشكيل السندات مستقرة أميد 9. موزعة بالتساوي بين صبغة الفلورسنت الخلايا الوليدة على الانقسامات، مما أدى إلى بمقدار النصف من شدة التألق مع كل انقسام الخلية. وهذا يتيح تتبع دورة الخلية تردد تصل إلى 8-10 جولات من تقسيم 10. وقد استخدم CFSE القدرة على الاحتفاظ بخلايا ورم في المخ لتحديد وعزل جزء من السكان الدراجات بطيئة (أعلى 5٪ صبغ الاحتفاظ الخلايا) أظهرت لتخصيبه في نشاط الخلايا الجذعية السرطانية 2. يصف هذا البروتوكول أسلوب تلطيخ الخلايا مع CFSE وعزل السكان الفردية ضمن ثقافة الإنسان الدبقأرومي (GBM) الخلايا المشتقة امتلاك معدلات مختلفة باستخدام تقسيم التدفق الخلوي 2. وقد خدم هذه التقنية لتحديد وعزل ورم دماغي بطيء الدراجات السكان من الخلايا بحكم قدرتها على الإبقاء على وضع العلامات CFSE.

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE at JoVE.com

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

هذا الفيديو يشرح بروتوكول تطبيق صبغة الفلورسنت استر succinimidyl carboxyfluorescein (CFSE) لتحديد وفصل السكان الفرعية المختلفة من الخلايا في ورم أرومي دبقي الإنسان على أساس تواتر انقسام الخلايا.

تحديد وعزل بطيئة تقسيم الخلايا في الإنسان عن طريق ورم أرومي دبقي كربوكسي فلوريسئين Succinimidyl استر (CFSE)

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

العزلة، وتوصيف المقارن التمييز بين الخلايا الجذعية البشرية الأسنان اللب المستمدة من الأسنان الدائمة باستخدام طريقتين مختلفتين

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

عزل الخلايا الجذعية للسرطان من العينات البشرية سرطان البروستاتا

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

العزلة، والحفظ بالتبريد والثقافة من الخلايا الظهارية البشرية السلى للتطبيقات السريرية

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

عزل خلايا الإنسان اللمفاوي البطانية التي كتبها متعدد المعلمة تنشيط الإسفار الفرز خلية

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

دراسة سرطان البنكرياس الجذعية خصائص الخلايا لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

جيل من Microtumors عن طريق نظام الثقافة 3D Biogel الإنسان وخلايا ورم أرومي دبقي المستمدة من المريض لKinomic التنميط والدواء استجابة اختبار

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

نضوب خلايا الفأر من Xenografts ورم الإنسان يحسن بشكل ملحوظ تحليل المصب من الخلايا المستهدفة

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Intranasal Delivery of Therapeutic Stem Cells to Glioblastoma in a Mouse Model

داخل الأنف تسليم الخلايا الجذعية العلاجية إلى الورم الدبقي في نموذج الفأر

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

تحديد خصائص الخلايا المناعية في الأنسجة الدهنية البشرية باستخدام التدفق الخلوي

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

عزل خلايا Decidual البشرية الأولية من الأغشية الجنينية لمصطلح مترافق

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...