Name: identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)
Uploaded: 2012-04-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מרכז פלורידה לחקר סרטן המוח, פרסטון א ולס ג&#39;וניור המרכז לריפוי סרטן המוח והמכונים הלאומיים לבריאות (1R21CA141020-01).

1. הכנת השעית תא בודדה Glioblastoma <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תרבות Gliomasphere הוא הוקם ומתוחזק באמצעות assay neurosphere (NSA) כ2,11,12 תוארו קודם לכן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בזמן המתאים לpassaging את gliomaspheres, מדיום המכיל את תחומי מוסר, הונח בצינור מתאים גודל רק?...

<ol>
	<li>Tian, T., Olson, S., Whitacre, J. M., Harding, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+of+cancer+robustness+and+evolvability.">The origins of cancer robustness and evolvability.</a> Integr. Biol. (Camb). 3, 17-30 (2011).</li><li>Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+label-retaining+tumour-initiating+cells+in+human+glioblastoma.">Evidence for label-retaining tumour-initiating cells in human glioblastoma.</a> Brain. 134 (Pt. 5), 1331-1343 (2011).</li><li>Krishnamurthy, K., Wang, G., Rokhfeld, D., Bieberich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deoxycholate+promotes+survival+of+breast+cancer+cells+by+reducing+the+level+of+pro-apoptotic+ceramide.">Deoxycholate promotes survival of breast cancer cells by reducing the level of pro-apoptotic ceramide.</a> Breast Cancer Res. 10, 106-106 (2008).</li><li>Pece, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+and+molecular+heterogeneity+of+breast+cancers+correlates+with+their+cancer+stem+cell+content.">Biological and molecular heterogeneity of breast cancers correlates with their cancer stem cell content.</a> Cell. 140, 62-73 (2010).</li><li>Roesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+temporarily+distinct+subpopulation+of+slow-cycling+melanoma+cells+is+required+for+continuous+tumor+growth.">A temporarily distinct subpopulation of slow-cycling melanoma cells is required for continuous tumor growth.</a> Cell. 141, 583-594 (2010).</li><li>Dembinski, J. L., Krauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+analysis+of+a+slow+cycling+stem+cell-like+subpopulation+in+pancreas+adenocarcinoma.">Characterization and functional analysis of a slow cycling stem cell-like subpopulation in pancreas adenocarcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 611-623 (2009).</li><li>Graham, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive,+quiescent,+Philadelphia-positive+stem+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+are+insensitive+to+STI571+in+vitro.">Primitive, quiescent, Philadelphia-positive stem cells from patients with chronic myeloid leukemia are insensitive to STI571 in vitro.</a> Blood. 99, 319-325 (2002).</li><li>Holyoake, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+quiescent+leukemic+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+spontaneously+initiate+factor-independent+growth+in+vitro+in+association+with+up-regulation+of+expression+of+interleukin-3.">Primitive quiescent leukemic cells from patients with chronic myeloid leukemia spontaneously initiate factor-independent growth in vitro in association with up-regulation of expression of interleukin-3.</a> Blood. 97, 720-728 (2001).</li><li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+dyes+for+lymphocyte+migration+and+proliferation+studies.">Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies.</a> Immunol. Cell Biol. 77, 499-508 (1999).</li><li>Lyons, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysing+cell+division+in+vivo+and+in+vitro+using+flow+cytometric+measurement+of+CFSE+dye+dilution.">Analysing cell division in vivo and in vitro using flow cytometric measurement of CFSE dye dilution.</a> J. Immunol. Methods. 243, 147-154 (2000).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+Human+Glioblastoma+Multiforme+Tumor+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (56), e3633-e3633 (2011).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393-e2393 (2010).</li></ol>

מספר גדל והולך של מחקרים הוכיח את החשיבות של-תא תת איטי חלוקה-תאים בסרטן אשר תורמים להיווצרות גידול ועמידות לטיפול 2-8. לכן זה קריטי לתיאור ולתקנן שיטות ניסיוניות המאפשרות מחקר של תת אוכלוסיות ספציפיות זה של תאים או באופן כללי יותר להשוואת אוכלוסיות עם שיעורי צמ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם המגיב </td><td> סוג </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td></tr><tr><td> בינוני אסאל המל&quot;ל NeuroCult (אדם) </td><td> בינוני </td><td> טכנולוגיות תאי גזע </td><td> 05750 </td></tr><tr><td> תוספי הפצת נשק מל&quot;ל NeuroCult (אדם) </td><td> תוסף בינוני </td><td> טכנולוגיות תאי גזע </td><td> 05753 </td></tr><tr><td> 0.05% טריפסין-EDTA </td><td> מגיב </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td></tr><tr><td> מעכב טריפסין סויה </td><td> מגיב </td><td> סיגמא </td><td> T6522 </td></tr><tr><td> פניצילין / סטרפטומיצין </td><td> מגיב </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> T25 בקבוק </td><td> תרבות כלי </td><td> Nalge Nunc בינלאומי </td><td> 136196 </td></tr><tr><td> T80 בקבוק </td><td> תרבות כלי </td><td> Nalge Nunc בינלאומי </td><td> 178905 </td></tr><tr><td> 15 צינורות מ&quot;ל </td><td> תרבות כלי </td><td> BD פלקון </td><td> 352096 </td></tr><tr><td> 50 צינורות מ&quot;ל </td><td> תרבות כלי </td><td> BD פלקון </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> EGF </td><td> גורם גדילה </td><td> מו&quot;פ </td><td> 2028-EG </td></tr><tr><td> קיט התפשטות תאי CFSE CellTrace </td><td> חלוקת תאי פלורסנט מעקב דיי </td><td> בדיקות מולקולריות, Invitrogen </td><td> C34554 </td></tr></tbody></table>

identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)

ההטרוגניות גידול מייצגת תכונה מהותית תמיכת חוסן גידול ומהווה מכשול מרכזי לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות 1. כדי להתגבר על הבעיה של ההטרוגניות גידול, הוא חיוני לפיתוח מבחנים וכלים המאפשרים זיהוי פנוטיפית, (EPI) גנטי ופונקציונלי ואפיון של אוכלוסיות סרטניות המניעות פתולוגיות מחלות ספציפיות ומייצגים יעדים רלוונטיים קליני. עכשיו זה מבוסס היטב כי גידולי התערוכה ייחודיים משנה שברים של תאים עם תדרים שונים של חלוקת תא, וכי הקריטריונים התפקודיים של רכיבה איטית להיות קשורים באופן חיובי עם יכולת היווצרות גידול במספר סוגי סרטן, כוללים אלה של המוח, שד, העור ו לבלב כמו גם ללוקמיה 2-8. פלורסנט לצבוע carboxyfluorescein succinimidyl אסתר (CFSE) שמשה למעקב אחר חלוקת התדרים של תאים במבחנה ובחי בt דם נישאumors וגידולים מוצקים, כגון גליובלסטומה 2,7,8. פרו תרופת התא permeant הלא הניאון של CFSE מומרת על ידי esterases התאי לתוך מתחם ניאון, שנשמר בתוך תאים על ידי קוולנטית מחייבת לחלבונים באמצעות תגובה של מחצית succinimidyl עם קבוצות אמינות תאיות ליצור קשרים אמידים יציבים 9. הצבע הזרחני מופץ באופן שווה בין תאי בת על חטיבות, שמוביל את halving של עוצמת הקרינה בכל חלוקת תא. הדבר זה מאפשר מעקב של תדר מחזור התא עד 8-10 סיבובים של חטיבה 10. קיבולת אצירת CFSE שמשה עם תאים סרטניים במוח כדי לזהות ולבודד subpopulation רכיבה איטית (5% עליונים תאי צבע התמך-) הוכיח להיות מועשרים בפעילות תאי גזע הסרטן 2. פרוטוקול זה מתאר את הטכניקה של הכתמת תאים עם CFSE והבידוד של אוכלוסיות בודדות בתוך תרבות של glio האנושיblastoma (GBM)-ליטול תאים בעלי שיעורי חלוקה שונה באמצעות cytometry הזרימה 2. הטכניקה משמשת כדי לזהות ולבודד אוכלוסיית רכיבה איטית גידול במוח של תאים בזכות היכולת שלהם לשמור על תיוג CFSE.

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE at JoVE.com

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

פרוטוקול וידאו זה מדגים את היישום של צבע carboxyfluorescein succinimidyl אסתר הניאון (CFSE) לזיהוי וההפרדה של תת אוכלוסיות שונות של תאים בגליובלסטומה האנושית המבוססות על תדר של חלוקת תא.

זיהוי ובידוד של תאים מתחלקים לאט בGlioblastoma האנושי באמצעות Carboxy fluorescein Succinimidyl אסתר (CFSE)

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

בידוד, אפיון והשוואתי התמיינות של תאי גזע אנושיים שיניים זולות נגזרה שיניים קבועות על ידי שימוש בשתי שיטות שונות

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

בידוד של תאי גזע סרטני מדגימות אדם סרטן הערמונית

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

בידוד, Cryopreservation ותרבות של תאי אפיתל amnion אדם ליישומים קליניים

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

בידוד של תאי האנדותל אדם הלימפה על ידי מיון תא הקרינה המופעל Multi-פרמטר

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

לומד סרטן לבלב גזע מאפייני תא לפיתוח טיפול חדש אסטרטגיות

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

דור של Microtumors שימוש 3D אדם Biogel תרבות מערכת תאי Glioblastoma נגזרות חולות להרכבת פרופיל Kinomic ובדיקת תגובה לתרופה

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

חסך בתאי עכבר מן xenografts גידול האנושי משפר משמעותי ניתוח במורד זרם של תאי יעד

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Intranasal Delivery of Therapeutic Stem Cells to Glioblastoma in a Mouse Model

אספקה ​​אינטראנסלית של תאים בתאי גזע כדי גליובלסטומה במודל עכבר

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

אפיון של תאים חיסוניים בתוך רקמת שומן אנושי באמצעות Cytometry זרימה

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

בידוד של ראשי תאים Decidual האנושי בקרום עוברי של המונח Placentae

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...