Name: identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)
Uploaded: 2012-04-29T14:00:00
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Questo lavoro è stato sostenuto dal Centro per la Ricerca Florida Tumore al cervello, il Preston A. Wells Jr. Centro per la Terapia Tumore al cervello e il National Institutes of Health (1R21CA141020-01).

1. Preparazione sospensione singola cella Glioblastoma <ol><li> Cultura Gliomasphere è stabilito e mantenuto con il dosaggio neurosfere (NSA), come descritto in precedenza 2,11,12. </li><li> Al momento opportuno per passaging le gliomaspheres, il terreno contenente le sfere viene rimosso, collocato in un apposito tubo di tessuto sterile cultura dimensioni, e centrifugati a 800 rpm (110 g) per 5 min a temperatura ambiente. </li><li> Il supernatante viene scartato e il pellet di sfere viene risospeso in 1 ml...

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	<li>Tian, T., Olson, S., Whitacre, J. M., Harding, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+of+cancer+robustness+and+evolvability.">The origins of cancer robustness and evolvability.</a> Integr. Biol. (Camb). 3, 17-30 (2011).</li><li>Deleyrolle, L. 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L., Krauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+analysis+of+a+slow+cycling+stem+cell-like+subpopulation+in+pancreas+adenocarcinoma.">Characterization and functional analysis of a slow cycling stem cell-like subpopulation in pancreas adenocarcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 611-623 (2009).</li><li>Graham, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive,+quiescent,+Philadelphia-positive+stem+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+are+insensitive+to+STI571+in+vitro.">Primitive, quiescent, Philadelphia-positive stem cells from patients with chronic myeloid leukemia are insensitive to STI571 in vitro.</a> Blood. 99, 319-325 (2002).</li><li>Holyoake, T. 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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysing+cell+division+in+vivo+and+in+vitro+using+flow+cytometric+measurement+of+CFSE+dye+dilution.">Analysing cell division in vivo and in vitro using flow cytometric measurement of CFSE dye dilution.</a> J. Immunol. Methods. 243, 147-154 (2000).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+Human+Glioblastoma+Multiforme+Tumor+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (56), e3633-e3633 (2011).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393-e2393 (2010).</li></ol>

Un numero crescente di studi hanno dimostrato l&#39;importanza di una lenta separazione sub-compartimento di cellule nel cancro che contribuiscono alla formazione di tumori e di resistenza al trattamento 2-8. Pertanto è fondamentale per descrivere e standardizzare metodi sperimentali che consentano lo studio di questa sottopopolazione di cellule o più in generale per confrontare sottopopolazioni con differenti tassi di crescita. Utilizzando CFSE per identificare e isolare sotto-frazioni di cellule in base a...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Tipo </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC media basale (umano) </td><td> Medio </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 05750 </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC Supplementi proliferazione (umano) </td><td> Supplemento Media </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 05753 </td></tr><tr><td> 0,05% tripsina-EDTA </td><td> Reagente </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td></tr><tr><td> Inibitore della tripsina di soia </td><td> Reagente </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td></tr><tr><td> Penicillina / streptomicina </td><td> Reagente </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> T25 pallone </td><td> Cultura ware </td><td> Nalge Nunc internazionale </td><td> 136196 </td></tr><tr><td> T80 pallone </td><td> Cultura ware </td><td> Nalge Nunc internazionale </td><td> 178905 </td></tr><tr><td> 15 ml provette </td><td> Cultura ware </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td></tr><tr><td> 50 ml provette </td><td> Cultura ware </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> FEG </td><td> Fattore di crescita </td><td> R &amp; S </td><td> 2028-EG </td></tr><tr><td> CellTrace CFSE cellulare Kit proliferazione </td><td> Cell Division fluorescente monitoraggio Dye </td><td> Molecular Probes, Invitrogen </td><td> C34554 </td></tr></tbody></table>

identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)

Eterogeneità tumorale rappresenta una caratteristica fondamentale di supporto robustezza tumore e presenta un ostacolo centrale per lo sviluppo di strategie terapeutiche 1. Per superare il problema della eterogeneità tumorale, è essenziale sviluppare saggi e strumenti che consentono fenotipica, (epi) identificazione genetica e funzionale e caratterizzazione di sottopopolazioni tumorali che guidano patologie malattie specifiche e rappresentano obiettivi clinicamente rilevanti. È ormai noto che i tumori esporre distinti sotto-frazioni di cellule con differenti frequenze di divisione cellulare, e che i criteri funzionali essendo ciclo lento è correlata positivamente con capacità di formazione di tumori in diversi tumori inclusi quelli del cervello, la mammella, della pelle e pancreas così come la leucemia 2-8. Il colorante fluorescente carbossifluoresceina succinimmidil estere (CFSE) è stato utilizzato per il monitoraggio della frequenza di divisione delle cellule in vitro e in vivo in ematica tumors e tumori solidi come il glioblastoma 2,7,8. La cellula-permeant non fluorescente pro-farmaco di CFSE viene convertito da esterasi intracellulari in un composto fluorescente, che è trattenuta all&#39;interno delle cellule da covalentemente legame alle proteine ​​per reazione della sua porzione succinimidil con gruppi amminici intracellulari di formare legami ammidici stabili 9. Il colorante fluorescente è equamente distribuito tra cellule figlie upon divisioni, portando alla dimezzamento dell&#39;intensità di fluorescenza con ogni divisione cellulare. Ciò consente il monitoraggio della frequenza del ciclo cellulare fino a otto-dieci giri di divisione 10. Capacità di ritenzione CFSE è stato utilizzato con le cellule tumorali del cervello per identificare e isolare una sottopopolazione lento in bicicletta (top 5% dye-fissaggio celle) ha dimostrato di essere arricchito in attività delle cellule staminali del cancro 2. Questo protocollo descrive la tecnica di colorazione delle cellule con CFSE e l&#39;isolamento di singole popolazioni in una cultura umana glioblastoma (GBM) derivati ​​da cellule che posseggono differenti tassi di divisione in citometria a flusso 2. La tecnica è servito per identificare e isolare un tumore lento ciclismo popolazione di cellule cerebrali in virtù della loro capacità di trattenere l&#39;etichettatura CFSE.

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Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

Questo protocollo video dimostra l&#39;applicazione del colorante fluorescente carbossifluoresceina succinimmidil estere (CFSE) per l&#39;identificazione e la separazione di differenti sottopopolazioni di cellule di glioblastoma umano basati sulla frequenza di divisione cellulare.

Identificazione e isolamento di Slow-divisione delle cellule nel glioblastoma umano per mezzo di Carboxy fluoresceina succinimidile Ester (CFSE)

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Differenziazione Isolamento, caratterizzazione e comparata delle cellule umane Dental Pulp staminali derivate da denti permanenti mediante due diversi metodi

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Ricerca

Medicina

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Isolamento di cancro cellule staminali da campioni umani di cancro alla prostata

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Isolamento, Crioconservazione e Cultura umani Cellule epiteliali Amnion per le applicazioni cliniche

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

Isolamento di cellule umane endoteliali linfatico da Multi-parametro fluorescenza-attivato cell sorting

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Studiare cancro del pancreas staminali caratteristiche cellulari per lo sviluppo di nuove strategie di trattamento

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Generazione di Microtumors Uso 3D Biogel Umano Sistema Cultura e cellule di glioblastoma paziente-derivato per Kinomic Profiling and Drug Testing risposta

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

L&#39;esaurimento delle cellule di topo da xenotrapianti tumorali umani migliora in modo significativo Analisi A valle delle cellule bersaglio

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Intranasal Delivery of Therapeutic Stem Cells to Glioblastoma in a Mouse Model

Intranasale consegna delle cellule staminali terapeutiche a Glioblastoma in un modello di mouse

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Caratterizzazione di cellule immunitarie nel tessuto adiposo umano mediante citometria a flusso

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

Isolamento di cellule deciduali umane primarie dalle membrane fetali del termine intempestivo della placenta

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...