Name: identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)
Uploaded: 2012-04-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE at JoVE.com

この作品は脳腫瘍研究のためのフロリダセンター、脳腫瘍治療と米国立衛生研究所（NIH）のためにプレストンA.ウェルズ·ジュニア·センター（1R21CA141020-01）によってサポートされていました。

1。膠芽腫単一の細胞懸濁液を準備する<ol><li> Gliomasphere文化は前述の2,11,12のようにニューロスフィアアッセイ（NSA）を使用して確立され、維持されます。 </li><li> gliomaspheresを継代するための適切な時期に、球を含む培地を除去し、適切なサイズの滅菌組織培養チューブに入れ、室温で5分間800回転（110 g）で遠心分離した。 </li><li>上清を廃棄し、球のペレットを、0.05％トリプシン-EDT...

<ol>
	<li>Tian, T., Olson, S., Whitacre, J. M., Harding, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+of+cancer+robustness+and+evolvability.">The origins of cancer robustness and evolvability.</a> Integr. Biol. (Camb). 3, 17-30 (2011).</li><li>Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+label-retaining+tumour-initiating+cells+in+human+glioblastoma.">Evidence for label-retaining tumour-initiating cells in human glioblastoma.</a> Brain. 134 (Pt. 5), 1331-1343 (2011).</li><li>Krishnamurthy, K., Wang, G., Rokhfeld, D., Bieberich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deoxycholate+promotes+survival+of+breast+cancer+cells+by+reducing+the+level+of+pro-apoptotic+ceramide.">Deoxycholate promotes survival of breast cancer cells by reducing the level of pro-apoptotic ceramide.</a> Breast Cancer Res. 10, 106-106 (2008).</li><li>Pece, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+and+molecular+heterogeneity+of+breast+cancers+correlates+with+their+cancer+stem+cell+content.">Biological and molecular heterogeneity of breast cancers correlates with their cancer stem cell content.</a> Cell. 140, 62-73 (2010).</li><li>Roesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+temporarily+distinct+subpopulation+of+slow-cycling+melanoma+cells+is+required+for+continuous+tumor+growth.">A temporarily distinct subpopulation of slow-cycling melanoma cells is required for continuous tumor growth.</a> Cell. 141, 583-594 (2010).</li><li>Dembinski, J. L., Krauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+analysis+of+a+slow+cycling+stem+cell-like+subpopulation+in+pancreas+adenocarcinoma.">Characterization and functional analysis of a slow cycling stem cell-like subpopulation in pancreas adenocarcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 611-623 (2009).</li><li>Graham, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive,+quiescent,+Philadelphia-positive+stem+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+are+insensitive+to+STI571+in+vitro.">Primitive, quiescent, Philadelphia-positive stem cells from patients with chronic myeloid leukemia are insensitive to STI571 in vitro.</a> Blood. 99, 319-325 (2002).</li><li>Holyoake, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+quiescent+leukemic+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+spontaneously+initiate+factor-independent+growth+in+vitro+in+association+with+up-regulation+of+expression+of+interleukin-3.">Primitive quiescent leukemic cells from patients with chronic myeloid leukemia spontaneously initiate factor-independent growth in vitro in association with up-regulation of expression of interleukin-3.</a> Blood. 97, 720-728 (2001).</li><li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+dyes+for+lymphocyte+migration+and+proliferation+studies.">Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies.</a> Immunol. Cell Biol. 77, 499-508 (1999).</li><li>Lyons, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysing+cell+division+in+vivo+and+in+vitro+using+flow+cytometric+measurement+of+CFSE+dye+dilution.">Analysing cell division in vivo and in vitro using flow cytometric measurement of CFSE dye dilution.</a> J. Immunol. Methods. 243, 147-154 (2000).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+Human+Glioblastoma+Multiforme+Tumor+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (56), e3633-e3633 (2011).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393-e2393 (2010).</li></ol>

研究数の増加は、腫瘍形成、治療抵抗2月8日に貢献癌の細胞の遅い分割するサブコンパートメントの重要性を実証している。したがって、それは別の成長率と集団を比較するために、より一般的に細胞またはこの特定の亜集団の研究を可能にする実験方法を記述し、標準化することが重要です。細胞分裂の彼らの率に基づいて、細胞の亜分画を同定および単離するために、CFSEを使用?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> タイプ </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC基礎培地（ヒト） </td><td>培地</td><td>電池技術を食い止める</td><td> 05750 </td></tr><tr><td> NeuroCult NSCの増殖サプリメント（人間） </td><td>培地サプリメント</td><td>電池技術を食い止める</td><td> 05753 </td></tr><tr><td> 0.05％トリプシン-EDTA </td><td>試薬</td><td>ギブコ</td><td> 25300-062 </td></tr><tr><td>ダイズトリプシン阻害因子</td><td>試薬</td><td>シグマ</td><td> T6522 </td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>試薬</td><td>ギブコ</td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> T25フラスコ</td><td>文化ウェア</td><td> Nalgeヌンク国際</td><td> 136196 </td></tr><tr><td> T80フラスコ</td><td>文化ウェア</td><td> Nalgeヌンク国際</td><td> 178905 </td></tr><tr><td> 15 mlチューブ</td><td>文化ウェア</td><td> BDファルコン</td><td> 352096 </td></tr><tr><td> 50mlチューブ</td><td>文化ウェア</td><td> BDファルコン</td><td> 352070 </td></tr><tr><td> EGF </td><td>増殖因子</td><td>研究開発</td><td> 2028-EG </td></tr><tr><td> CellTrace CFSE細胞増殖キット</td><td>蛍光細胞分裂が追跡用色素</td><td> Molecular Probes社、Invitrogen社</td><td> C34554 </td></tr></tbody></table>

identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)

腫瘍の不均一性は、腫瘍の堅牢性を支える基本的な特徴を表しており、治療戦略1の発展に中心的な障害となる。腫瘍の不均一性の問題を克服するためには、特定の疾患の病態を推進し、臨床的に関連するターゲットを表す腫瘍集団の表現型、（エピ）の遺伝的および機能的同定および特徴付けを可能にするアッセイおよびツールを開発することが不可欠である。それは、腫瘍は細胞分裂の周波数の異なる細胞の異なる亜分画を示すこと、および低速サイクリングという機能的な基準を積極的に脳を含めたいくつかの癌における腫瘍形成能力に関連付けられていることを今では十分に確立されている乳房、皮膚、膵臓ならびに白血病2-8。蛍光色素カルボキシスクシンイミジルエステル（CFSE）は、in vitroおよび血液媒介トンを用いたin vivo での細胞の分裂頻度を追跡するために使用されてきたumorsや膠芽腫などの固形腫瘍2,7,8。 CFSEの細胞透過性の非蛍光プロドラッグは、安定したアミド結合9を形成する細胞内のアミン基とのスクシンイミジル部分との反応によってタンパク質と共有結合することにより細胞内に保持される蛍光化合物に細胞内エステラーゼによって変換されます。蛍光染料が均等にすべての細胞分裂による蛍光強度の半減につながる、部門により娘細胞の間で分配される。これは、部門10の8〜10ラウンドまでの細胞周期の周波数のトラッキングが可能です。 CFSE保持能力は、癌幹細胞活性2に濃縮されることが実証遅いサイクリング亜集団（上位5％の色素保持する細胞）を同定し、単離する脳腫瘍細胞で使用されました。 このプロトコルは、人間の文化の中でglio CFSEで細胞を染色する技術と、個々の集団の単離を記載芽腫（GBM）の由来のフローサイトメトリー2を使用して異なる分裂速度 ​​を有する細胞。技術はCFSE標識を保持する能力によって細胞の脳腫瘍スローサイクリング人口を同定および単離するのに役立っています。

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE at JoVE.com

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

このビデオプロトコルは、細胞分裂の頻度に基づいて、ヒト神経膠芽腫の細胞の異なるサブ集団の同定と分離するための蛍光色素カルボキシスクシンイミジルエステル（CFSE）のアプリケーションを示しています。

カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（CFSE）を用いてヒト神経膠芽腫のスロー非分裂細胞の同定および単離

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

単離、特徴付けと二つの異なる方法を使用して永久歯に由来するヒト歯髄幹細胞の分化の比較

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

ヒト前立腺癌サンプルからがん幹細胞の単離

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

臨床応用のためのヒト羊膜上皮細胞の単離、凍結保存と文化

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

マルチパラメータ蛍光活性化細胞選別によるヒトリンパ内皮細胞の単離

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

新しい治療戦略を開発するための膵臓癌幹細胞特性を研究

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Kinomicプロファイリングと薬物反応検査のための3D人間バイオゲル培養システムと患者由来の神経膠芽腫細胞を用いた微小腫瘍の発生

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

ヒト腫瘍異種移植片からマウス細胞の枯渇は大幅に標的細胞の下流分析を向上させます

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Intranasal Delivery of Therapeutic Stem Cells to Glioblastoma in a Mouse Model

マウスモデルにおける膠芽細胞腫に対する治療用幹細胞の鼻腔内送達

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

フローサイトメトリーを用いたひと脂肪組織での免疫細胞のキャラクタリゼーション

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

用語胎盤の胎児膜から主のひと脱落膜細胞の分離

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...