Name: identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)
Uploaded: 2012-04-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE at JoVE.com

Эта работа была поддержана Центром Флориде опухоли головного мозга Исследование, Престон А. Wells младший Центр лечения опухолей мозга и Национального института здоровья (1R21CA141020-01).

1. Подготовка глиобластомы суспензии отдельных клеток <ol><li> Gliomasphere культура создается и поддерживается с помощью нейросфер анализа (NSA), как описано ранее 2,11,12. </li><li> В соответствующее время для пассирования gliomaspheres, среда, содержащая сферы удаляют, помещают в соответствующий разм...

<ol>
	<li>Tian, T., Olson, S., Whitacre, J. M., Harding, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+of+cancer+robustness+and+evolvability.">The origins of cancer robustness and evolvability.</a> Integr. Biol. (Camb). 3, 17-30 (2011).</li><li>Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+label-retaining+tumour-initiating+cells+in+human+glioblastoma.">Evidence for label-retaining tumour-initiating cells in human glioblastoma.</a> Brain. 134 (Pt. 5), 1331-1343 (2011).</li><li>Krishnamurthy, K., Wang, G., Rokhfeld, D., Bieberich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deoxycholate+promotes+survival+of+breast+cancer+cells+by+reducing+the+level+of+pro-apoptotic+ceramide.">Deoxycholate promotes survival of breast cancer cells by reducing the level of pro-apoptotic ceramide.</a> Breast Cancer Res. 10, 106-106 (2008).</li><li>Pece, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+and+molecular+heterogeneity+of+breast+cancers+correlates+with+their+cancer+stem+cell+content.">Biological and molecular heterogeneity of breast cancers correlates with their cancer stem cell content.</a> Cell. 140, 62-73 (2010).</li><li>Roesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+temporarily+distinct+subpopulation+of+slow-cycling+melanoma+cells+is+required+for+continuous+tumor+growth.">A temporarily distinct subpopulation of slow-cycling melanoma cells is required for continuous tumor growth.</a> Cell. 141, 583-594 (2010).</li><li>Dembinski, J. L., Krauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+analysis+of+a+slow+cycling+stem+cell-like+subpopulation+in+pancreas+adenocarcinoma.">Characterization and functional analysis of a slow cycling stem cell-like subpopulation in pancreas adenocarcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 611-623 (2009).</li><li>Graham, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive,+quiescent,+Philadelphia-positive+stem+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+are+insensitive+to+STI571+in+vitro.">Primitive, quiescent, Philadelphia-positive stem cells from patients with chronic myeloid leukemia are insensitive to STI571 in vitro.</a> Blood. 99, 319-325 (2002).</li><li>Holyoake, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+quiescent+leukemic+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+spontaneously+initiate+factor-independent+growth+in+vitro+in+association+with+up-regulation+of+expression+of+interleukin-3.">Primitive quiescent leukemic cells from patients with chronic myeloid leukemia spontaneously initiate factor-independent growth in vitro in association with up-regulation of expression of interleukin-3.</a> Blood. 97, 720-728 (2001).</li><li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+dyes+for+lymphocyte+migration+and+proliferation+studies.">Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies.</a> Immunol. Cell Biol. 77, 499-508 (1999).</li><li>Lyons, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysing+cell+division+in+vivo+and+in+vitro+using+flow+cytometric+measurement+of+CFSE+dye+dilution.">Analysing cell division in vivo and in vitro using flow cytometric measurement of CFSE dye dilution.</a> J. Immunol. Methods. 243, 147-154 (2000).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+Human+Glioblastoma+Multiforme+Tumor+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (56), e3633-e3633 (2011).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393-e2393 (2010).</li></ol>

Все большее число исследований показали важность медленного деления полуквартал клеток в раке, которые способствуют образованию опухолей и лечение сопротивлением 2-8. Поэтому очень важно, чтобы описать и стандартизировать экспериментальных методов, позволяющих изучение этой к?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Тип </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td></tr><tr><td> NeuroCult НСК базальной среднего (человека) </td><td> Среда </td><td> Стволовые клетки технологий </td><td> 05750 </td></tr><tr><td> NeuroCult НСК распространения добавки (человека) </td><td> Средний добавки </td><td> Стволовые клетки технологий </td><td> 05753 </td></tr><tr><td> % 0,05 трипсина-EDTA </td><td> Реагент </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td></tr><tr><td> Ингибитор трипсина сои </td><td> Реагент </td><td> Сигма </td><td> T6522 </td></tr><tr><td> Пенициллина / стрептомицина </td><td> Реагент </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> T25 колбу </td><td> Культура посуды </td><td> Nalge Nunc международных </td><td> 136196 </td></tr><tr><td> T80 колбу </td><td> Культура посуды </td><td> Nalge Nunc международных </td><td> 178905 </td></tr><tr><td> 15 мл труб </td><td> Культура посуды </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td></tr><tr><td> 50 мл пробирки </td><td> Культура посуды </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> EGF </td><td> Фактор роста </td><td> R &amp; D </td><td> 2028-EG </td></tr><tr><td> CellTrace CFSE пролиферации клеток Kit </td><td> Флуоресцентные деление клеток отслеживания краска </td><td> Молекулярные зонды, Invitrogen </td><td> C34554 </td></tr></tbody></table>

identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)

Опухоль неоднородность представляет собой фундаментальную функцию поддержки устойчивости опухолей и представляет собой центральное препятствие для развития терапевтических стратегий 1. Для преодоления проблемы гетерогенности опухоли, она имеет важное значение для разработки тестов и инструментов, позволяющих фенотипические (EPI) генетическая и функциональная идентификация и характеристика опухоли субпопуляции, которые приводят конкретных патологий, болезней и представляют собой клинически значимых целей. В настоящее время хорошо известно, что опухоли проявляют различные суб-фракции клеток с разными частотами деления клеток, и что функциональные критерии быть медленным езда на велосипеде положительно связаны с опухолью возможность формирования нескольких видов рака, включая тех, головного мозга, молочной железы, кожи и поджелудочной железы, а также лейкоза 2-8. Флуоресцентного красителя карбоксифлуоресцеина сукцинимидил эфира (CFSE) была использована для отслеживания частотным разделением клеток в пробирке и в естественных условиях в кровь тumors и твердые опухоли, такие как глиобластома 2,7,8. Клеточной проникающих нефлуоресцентного про-препарат CFSE преобразуется внутриклеточных эстераз в флуоресцентным соединением, которое сохраняется внутри клеток путем ковалентного связывания с белками через реакцию его сукцинимидил фрагмент с внутриклеточными аминогруппы с образованием стабильных амидных связей 9. Флуоресцентный краситель равномерно распределяется между дочерними клетками при подразделений, ведущих к сокращению вдвое интенсивности флуоресценции с каждым делением клетки. Это позволяет отслеживать клетки тактовую частоту до восьми-десяти раундов деления 10. Мощность удержания CFSE был использован с клетками опухоли головного мозга для выявления и локализации медленно субпопуляции велосипеде (5% лучших красителей сохранив клетки) продемонстрировал быть обогащен в раковых стволовых клеток деятельность 2. Этот протокол описывает технику окрашивания клеток с CFSE и изоляции отдельных популяций в культуре человеческих глиобластома (GBM)-клеток, полученных из обладающих различной разделение цены с помощью проточной цитометрии 2. Техника служит для выявления и локализации опухоли головного мозга медленно велосипедных популяцию клеток в силу своей способности удерживать CFSE маркировки.

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE at JoVE.com

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

Это видео демонстрирует протокол применение флуоресцентного красителя карбоксифлуоресцеина сукцинимидил эфира (CFSE) для идентификации и разделения различных субпопуляций клеток глиобластомы человека основана на частоте деления клеток.

Выявление и изоляция Медленно делящихся клеток глиобластомы человека в использовании Carboxy Fluorescein сукцинимидил Эстер (CFSE)

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Выделение, характеристика и сравнительный Дифференциация по правам зубных стволовых клеток, полученных из целлюлозы постоянных зубов с помощью двух различных методов

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

Выделение стволовых клеток рака из образцов предстательной железы человека

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

Изоляция, криоконсервации и культура клеток человека Амнион Эпителиальные для клинического применения

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

Выделение человека эндотелиальных клеток лимфатической от нескольких параметров флуоресценции активирован сортировки клеток

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Изучение рака поджелудочной железы стволовых клеток Характеристики для разработки новых стратегий лечения

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Генерация Microtumors Использование 3D человека биогель системы культуры и терпеливый происхождения клеток глиобластомы для Kinomic профилирование и тестирования реагирования на наркотики

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

Истощение мышиных клеток из ксенотрансплантатов опухолей человека значительно улучшает Downstream Анализ клеток-мишеней

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Intranasal Delivery of Therapeutic Stem Cells to Glioblastoma in a Mouse Model

Интраназальная доставка терапевтических стволовых клеток в глиобластому в модели мыши

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Характеристика иммунных клеток в жировых тканях человека с помощью проточной цитометрии

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

Изоляции первичных клеток человека децидуальной от плода мембраны термин Роль162

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...