Name: identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)
Uploaded: 2012-04-29T14:00:00
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Este trabajo fue apoyado por el Centro de la Florida para la Investigación del tumor cerebral, el Preston A. Wells Jr. Centro de Terapia del tumor cerebral y los Institutos Nacionales de Salud (1R21CA141020-01).

1. Preparación de la suspensión Glioblastoma Single Cell <ol><li> Cultura Gliomasphere se establece y mantiene usando el ensayo de neurosphere (NSA) como se ha descrito previamente 2,11,12. </li><li> En el momento apropiado para pasar las gliomaspheres, el medio que contiene las esferas se retira, se colocaron en un tubo estéril de tamaño apropiado de cultivo de tejidos, y se centrifugaron a 800 rpm (110 g) durante 5 min a temperatura ambiente. </li><li> El sobrenadante se desechó y el sedimento de esf...

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	<li>Tian, T., Olson, S., Whitacre, J. M., Harding, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+of+cancer+robustness+and+evolvability.">The origins of cancer robustness and evolvability.</a> Integr. Biol. (Camb). 3, 17-30 (2011).</li><li>Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+label-retaining+tumour-initiating+cells+in+human+glioblastoma.">Evidence for label-retaining tumour-initiating cells in human glioblastoma.</a> Brain. 134 (Pt. 5), 1331-1343 (2011).</li><li>Krishnamurthy, K., Wang, G., Rokhfeld, D., Bieberich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deoxycholate+promotes+survival+of+breast+cancer+cells+by+reducing+the+level+of+pro-apoptotic+ceramide.">Deoxycholate promotes survival of breast cancer cells by reducing the level of pro-apoptotic ceramide.</a> Breast Cancer Res. 10, 106-106 (2008).</li><li>Pece, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+and+molecular+heterogeneity+of+breast+cancers+correlates+with+their+cancer+stem+cell+content.">Biological and molecular heterogeneity of breast cancers correlates with their cancer stem cell content.</a> Cell. 140, 62-73 (2010).</li><li>Roesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+temporarily+distinct+subpopulation+of+slow-cycling+melanoma+cells+is+required+for+continuous+tumor+growth.">A temporarily distinct subpopulation of slow-cycling melanoma cells is required for continuous tumor growth.</a> Cell. 141, 583-594 (2010).</li><li>Dembinski, J. L., Krauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+analysis+of+a+slow+cycling+stem+cell-like+subpopulation+in+pancreas+adenocarcinoma.">Characterization and functional analysis of a slow cycling stem cell-like subpopulation in pancreas adenocarcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 611-623 (2009).</li><li>Graham, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive,+quiescent,+Philadelphia-positive+stem+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+are+insensitive+to+STI571+in+vitro.">Primitive, quiescent, Philadelphia-positive stem cells from patients with chronic myeloid leukemia are insensitive to STI571 in vitro.</a> Blood. 99, 319-325 (2002).</li><li>Holyoake, T. 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(56), e3633-e3633 (2011).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393-e2393 (2010).</li></ol>

Un creciente número de estudios han demostrado la importancia de una lenta dividiendo sub-compartimiento de células en el cáncer que contribuyen a la formación de tumores y la resistencia al tratamiento 2-8. Por lo tanto es crítico para describir y estandarizar los métodos experimentales que permiten el estudio de esta subpoblación específica de células o de manera más general para comparar las subpoblaciones con diferentes tasas de crecimiento. Usando CFSE para identificar y aislar sub-fracciones d...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Tipo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC Basal Medium (Humana) </td><td> Medio </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 05750 </td></tr><tr><td> NeuroCult NSC proliferación Suplementos (Humana) </td><td> Suplemento Media </td><td> Stem Cell Technologies </td><td> 05753 </td></tr><tr><td> 0,05% de tripsina-EDTA </td><td> Reactivo </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td></tr><tr><td> Inhibidor de tripsina de soja </td><td> Reactivo </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td></tr><tr><td> Penicilina / Estreptomicina </td><td> Reactivo </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> Matraz T25 </td><td> Cultura cerámica </td><td> Nalge Nunc internacional </td><td> 136196 </td></tr><tr><td> T80 frasco </td><td> Cultura cerámica </td><td> Nalge Nunc internacional </td><td> 178905 </td></tr><tr><td> 15 ml tubos </td><td> Cultura cerámica </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td></tr><tr><td> 50 ml tubos </td><td> Cultura cerámica </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> FEAG </td><td> Factor de crecimiento </td><td> De I + D </td><td> 2028-EG </td></tr><tr><td> CFSE CellTrace Proliferación Celular Kit </td><td> División Celular fluorescente seguimiento Dye </td><td> Molecular Probes, Invitrogen </td><td> C34554 </td></tr></tbody></table>

identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)

Heterogeneidad tumoral representa una característica fundamental de apoyo robustez tumor y presenta un obstáculo fundamental para el desarrollo de estrategias terapéuticas 1. Para superar el problema de la heterogeneidad del tumor, es esencial para desarrollar ensayos y herramientas que permiten fenotípica, (epi) la identificación genética y funcional y la caracterización de las subpoblaciones tumorales que conducen a enfermedades y patologías específicas representan objetivos clínicamente relevantes. Actualmente está bien establecido que los tumores presentan distintas sub-fracciones de células con diferentes frecuencias de la división celular, y que los criterios funcionales de ser lento bicicleta está positivamente asociado con la capacidad de formación de tumores en varios tipos de cáncer, incluidos los del cerebro, mama, piel y páncreas, así como leucemia 2-8. El colorante fluorescente carboxifluoresceína succinimidil éster (CFSE) se ha utilizado para el seguimiento de la frecuencia de división de las células in vitro e in vivo en transmisión sanguínea tumors y tumores sólidos tales como el glioblastoma 2,7,8. La célula-permeante no fluorescente pro-fármaco de la CFSE se convierte mediante esterasas intracelulares a un compuesto fluorescente, la cual es retenida dentro de las células por unión covalente a las proteínas mediante la reacción de su radical succinimidilo con grupos amina intracelulares para formar enlaces amídicos estables 9. El tinte fluorescente se distribuye por igual entre las células hijas a divisiones, llevando a la reducción a la mitad de la intensidad de la fluorescencia con cada división celular. Esto permite realizar un seguimiento de la frecuencia del ciclo celular hasta ocho a diez rondas de división 10. Capacidad de retención de CFSE se utilizó con las células tumorales del cerebro para identificar y aislar una subpoblación bicicleta lenta (parte superior 5% de retención de colorante células) demostraron ser enriquecido en actividad de células madre de cáncer 2. Este protocolo describe la técnica de tinción de las células con CFSE y el aislamiento de las poblaciones individuales dentro de una cultura de humano glioblastoma (GBM)-derivados de células que poseen diferentes tipos de división usando citometría de flujo 2. La técnica ha servido para identificar y aislar un tumor cerebral lento bicicleta población de células en virtud de su capacidad para retener la CFSE etiquetado.

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Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

Este protocolo de video demuestra la aplicación de el colorante fluorescente carboxifluoresceína succinimidil éster (CFSE) para la identificación y separación de los diferentes sub-poblaciones de células de glioblastoma humano en base de la frecuencia de la división celular.

La identificación y aislamiento de Slow división de las células de glioblastoma humano utilizando carboxi fluoresceína Succinimidyl Ester (CFSE)

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

Diferenciación de aislamiento, caracterización y comparativo de las células madre derivadas de la Pulpa Dental de los dientes permanentes mediante dos métodos diferentes

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Investigación

Medicina

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

El aislamiento de las células madre del cáncer de muestras de cáncer de próstata humano

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

El aislamiento, la criopreservación y cultivo de células epiteliales Amnion Humanos para Aplicaciones clínicas

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

Aislamiento de células endoteliales linfático humano por Multi-parámetro de clasificación de células activadas por fluorescencia

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

El estudio de cáncer de páncreas Tallo Características de las células para el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Generación de microtumores Uso Humano 3D Biogel sistema de cultivo y las células de glioblastoma derivados de los pacientes para Kinomic de perfiles y pruebas de respuesta a los fármacos

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

El agotamiento de las células de ratón a partir de xenoinjertos de tumores humanos mejora significativamente análisis de aguas abajo de las células diana

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Intranasal Delivery of Therapeutic Stem Cells to Glioblastoma in a Mouse Model

Entrega intranasal de células madre terapéuticas a glioblastoma en un modelo de ratón

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Caracterización de células inmunes en el tejido adiposo humano mediante el uso de citometría de flujo

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

Aislamiento de células Decidual humanas primarias de las membranas fetales de la placenta de término

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...