Name: identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)
Uploaded: 2012-04-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE at JoVE.com

Bu eser Beyin Tümörü Araştırma, Beyin Tümörü Tedavi ve Sağlık Ulusal Enstitüsü (1R21CA141020-01) Preston A. Wells Jr Merkezi Florida Merkezi tarafından desteklenmiştir.

1. Glioblastoma Tek Hücre Süspansiyon hazırlanması <ol><li> Gliomasphere kültür kurulmuş ve daha önce anlatıldığı gibi 2,11,12 neurosphere tahlil (NSA) kullanılarak korunur. </li><li> Gliomaspheres pasajlanmasını için uygun bir zamanda, küre içeren orta boy bir uygun steril doku kültür tüpüne yerleştirilir, silinir, ve oda sıcaklığında 5 dakika için 800 rpm (110 g) santrifüj edilir. </li><li> Yüzer madde ayrılır ve topak küreler% 0.05 tripsin-EDTA, 1 ml içinde tekrar süspa...

<ol>
	<li>Tian, T., Olson, S., Whitacre, J. M., Harding, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+of+cancer+robustness+and+evolvability.">The origins of cancer robustness and evolvability.</a> Integr. Biol. (Camb). 3, 17-30 (2011).</li><li>Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+label-retaining+tumour-initiating+cells+in+human+glioblastoma.">Evidence for label-retaining tumour-initiating cells in human glioblastoma.</a> Brain. 134 (Pt. 5), 1331-1343 (2011).</li><li>Krishnamurthy, K., Wang, G., Rokhfeld, D., Bieberich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deoxycholate+promotes+survival+of+breast+cancer+cells+by+reducing+the+level+of+pro-apoptotic+ceramide.">Deoxycholate promotes survival of breast cancer cells by reducing the level of pro-apoptotic ceramide.</a> Breast Cancer Res. 10, 106-106 (2008).</li><li>Pece, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+and+molecular+heterogeneity+of+breast+cancers+correlates+with+their+cancer+stem+cell+content.">Biological and molecular heterogeneity of breast cancers correlates with their cancer stem cell content.</a> Cell. 140, 62-73 (2010).</li><li>Roesch, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+temporarily+distinct+subpopulation+of+slow-cycling+melanoma+cells+is+required+for+continuous+tumor+growth.">A temporarily distinct subpopulation of slow-cycling melanoma cells is required for continuous tumor growth.</a> Cell. 141, 583-594 (2010).</li><li>Dembinski, J. L., Krauss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+analysis+of+a+slow+cycling+stem+cell-like+subpopulation+in+pancreas+adenocarcinoma.">Characterization and functional analysis of a slow cycling stem cell-like subpopulation in pancreas adenocarcinoma.</a> Clin. Exp. Metastasis. 26, 611-623 (2009).</li><li>Graham, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive,+quiescent,+Philadelphia-positive+stem+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+are+insensitive+to+STI571+in+vitro.">Primitive, quiescent, Philadelphia-positive stem cells from patients with chronic myeloid leukemia are insensitive to STI571 in vitro.</a> Blood. 99, 319-325 (2002).</li><li>Holyoake, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+quiescent+leukemic+cells+from+patients+with+chronic+myeloid+leukemia+spontaneously+initiate+factor-independent+growth+in+vitro+in+association+with+up-regulation+of+expression+of+interleukin-3.">Primitive quiescent leukemic cells from patients with chronic myeloid leukemia spontaneously initiate factor-independent growth in vitro in association with up-regulation of expression of interleukin-3.</a> Blood. 97, 720-728 (2001).</li><li>Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+dyes+for+lymphocyte+migration+and+proliferation+studies.">Fluorescent dyes for lymphocyte migration and proliferation studies.</a> Immunol. Cell Biol. 77, 499-508 (1999).</li><li>Lyons, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysing+cell+division+in+vivo+and+in+vitro+using+flow+cytometric+measurement+of+CFSE+dye+dilution.">Analysing cell division in vivo and in vitro using flow cytometric measurement of CFSE dye dilution.</a> J. Immunol. Methods. 243, 147-154 (2000).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+Human+Glioblastoma+Multiforme+Tumor+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of Human Glioblastoma Multiforme Tumor Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (56), e3633-e3633 (2011).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393-e2393 (2010).</li></ol>

Çalışmalar artan bir sayıda tümör oluşumunu ve tedavi direnç 2-8 katkı kanser hücrelerinin bir yavaş alt bölme bölümünün önemini ortaya koymuştur. Bu nedenle, farklı büyüme oranları ile subpopülasyonunun karşılaştırmak için daha genel olarak hücre ya da bu belirli alt populasyonun çalışma deneysel sağlayan yöntemleri açıklanmaktadır ve standartlaştırmak için çok önemlidir. Hücre bölünmesi onların oranı esas alınarak hücre alt fraksiyonlarının belirlemek ve ya...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Tip </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> NeuroCult MGK Bazal Orta (İnsan) </td><td> Orta </td><td> Hücre Teknolojileri Stem </td><td> 05750 </td></tr><tr><td> NeuroCult MGK Proliferasyon Takviyeler (İnsan) </td><td> Orta takviyesi </td><td> Hücre Teknolojileri Stem </td><td> 05753 </td></tr><tr><td> % 0.05 tripsin-EDTA </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td></tr><tr><td> Soya tripsin inhibitörü </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td></tr><tr><td> Penisilin / Streptomisin </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> T25 şişesi </td><td> Kültür gereçleri </td><td> Nalge Nunc uluslararası </td><td> 136196 </td></tr><tr><td> T80 şişesi </td><td> Kültür gereçleri </td><td> Nalge Nunc uluslararası </td><td> 178905 </td></tr><tr><td> 15 ml tüp </td><td> Kültür gereçleri </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td></tr><tr><td> 50 ml tüp </td><td> Kültür gereçleri </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td></tr><tr><td> EGF </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Ar-Ge </td><td> 2028-EG </td></tr><tr><td> CellTrace KAKE Hücre Çoğalması Takımı </td><td> Floresan Hücre Bölünmesi Takip Boya </td><td> Moleküler Probları, Invitrogen </td><td> C34554 </td></tr></tbody></table>

identification and isolation of slow-dividing cells in human glioblastoma using carboxy fluorescein succinimidyl ester (cfse)

Tümör heterojenite tümör sağlamlığı destekleyen temel bir özelliği temsil eder ve tedavi stratejilerinin 1 gelişiminde merkezi bir engel koymaktadır. Tümör heterojenliğin sorunu aşmak için, belirli bir hastalığın patolojiler sürücü ve klinik hedefleri temsil tümörün alt popülasyonlarının fenotipik, (epi) genetik ve fonksiyonel belirlenmesi ve tanımlanması sağlayan deneyleri ve araçlar geliştirmek esastır. Bu, şimdi de tümörleri yavaş bisiklet olma fonksiyonel kriterleri pozitif tümör oluşumu beyin, göğüs, cilt de dahil olmak üzere çeşitli kanser yeteneği ile ilişkili olduğu hücre bölünmesi, farklı frekanslarda bulunan hücrelerin alt fraksiyonlar ayrı göstermektedir ve olduğunun tespit edilmesi pankreas yanı sıra lösemi 2-8. Floresan boya carboxyfluorescein süksinimidil ester (CFSE) kan yoluyla in vitro olarak T hücrelerinin bölünmesini frekans izlemek için ve in vivo olarak kullanılmıştırumors ve bu glioblastoma 2,7,8 gibi solid tümörler. CFSE, hücre-geçirgenler floresan olmayan pro-ilaç kararlı amid bağı oluşturmak üzere hücre içi 9 amin grupları ile süksinimidil kısmının reaksiyon yoluyla proteinlere kovalent olarak bağlanarak hücre içinde tutulan bir floresan bileşik, içine hücre içi esterazlar ile dönüştürülür. Floresan boya eşit her hücre bölünmesi ile floresans şiddetinin ikiye bölme neden bölünmeler üzerine kızı hücreleri arasında dağıtılır. Bu bölünme 10 sekiz ila on mermi kadar hücre döngüsü frekans izleme sağlar. KAKE tutma kapasitesi kanseri kök hücre aktivitesi 2 zenginleşmektedir gösterdi yavaş bisiklet subpopülasyonu (üst% 5 boya tutucu hücreleri) belirlemek ve yalıtmak için beyin tümör hücreleri ile birlikte kullanılmıştır. Bu protokol, insan glio kültürü içinde KAKE ile boyanan hücrelerin tekniği ve bireysel nüfus izolasyonu açıklarblastom (GBM)-türetilen akım sitometri 2 kullanarak farklı bölünme fiyatla sahip hücreler. Tekniği tanımlamak ve KAKE etiketleme korumak için onların yeteneği sayesinde hücrelerin beyin tümörü yavaş bisiklet nüfusu izole etmeye hizmet etmiştir.

Watch this Scientific Journal Video about Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE at JoVE.com

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

Bu video protokol hücre bölünmesi sıklığına göre insan glioblastoma hücreleri farklı alt-popülasyonlarının belirlenmesi ve ayrılması için floresan boya carboxyfluorescein sukkinimidil ester (KAKE) uygulamasını gösterir.

Karboksi Flöresein sukkinimidil ester (KAKE) Kullanarak İnsan Glioblastoma Yavaş-bölme Hücreleri Tanımlama ve İzolasyonu

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

İnsan Diş Pulp Kök Hücre İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Karşılaştırmalı Farklılaşma İki Farklı Yöntemler Kullanılarak Daimi Dişler türetilen

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Isolation of Cancer Stem Cells From Human Prostate Cancer Samples

İnsan Prostat Kanseri Örneklerinden Kanser Kök Hücreleri İzolasyon

The cancer stem cell (CSC) model has been considerably revisited over the last two decades. During this time CSCs have been identified and directly ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

İzolasyon, Kriyoprezervasyon ve Kültür Klinik Uygulamaları İnsan Amniyon Epitel Hücreleri

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

Çoklu-parametre floresans ile aktive edilen hücre sınıflandırma İnsan lenfatik endotel hücreleri İzolasyonu

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Pankreas Kanseri Yeni Tedavi Stratejileri Geliştirme Hücre Özellikleri Kök incelenmesi

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Generation of Microtumors Using 3D Human Biogel Culture System and Patient-derived Glioblastoma Cells for Kinomic Profiling and Drug Response Testing

Kinomic Profil Yöntemi ve İlaç Tepki Testi için 3D İnsan BIOGEL Kültür Sisteminin Kullanılması Microtumors ve Hasta kaynaklı Glioblastom Hücreleri Üretimi

The use of patient-derived xenografts for modeling cancers has provided important insight into cancer biology and drug responsiveness. However, they are ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Intranasal Delivery of Therapeutic Stem Cells to Glioblastoma in a Mouse Model

Bir Fare Modelinde Tedavi Edici Kök Hücrelerin Glioblastomaya İntranazal Dağıtımı

The intrinsic tropism towards brain malignancies renders stem cells as promising carriers of therapeutic agents against malignant tumors. The delivery of ...

Characterization of Immune Cells in Human Adipose Tissue by Using Flow Cytometry

Akış Sitometresi kullanarak insan yağ dokusu içinde bağışıklık hücreleri karakterizasyonu

Infiltration of immune cells in the subcutaneous and visceral adipose tissue (AT) deposits leads to a low-grade inflammation contributing to the ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

Dönem Placentae Fetal membranlar birincil insan Decidual hücre izolasyon

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...