Name: bioluminescence imaging of nadph oxidase activity in different animal models
Uploaded: 2012-10-22T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bioluminescence Imaging of NADPH Oxidase Activity in Different Animal Models at JoVE.com

Diese Arbeit wurde vom NIH RO1 AI079253 und Department of Veterans Affairs finanziert.

Ein. Tiermodelle <ol><li> Mäuse: Verwenden p47 phox-/ - Mäusen und Alter und Geschlecht abgestimmt C57BL6/DBA Mäusen. Holen Sie die Genehmigung für die Experimente von Institutional Animal Care und Use Committee. </li><li> Anästhesie: Verwenden Sie eine kontinuierliche Isofluran Verwaltungssystem der Narkose zu induzieren. Der Verdampfer System (VetEquip) mit Isofluran (2-3%) gefüllt. Bestätigen Sie, dass Mäuse vollständig betäubt durch die Beobachtung der Atmung, Bewegung und Cornealrefl...

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	<li>Segal, B., Han, W., Bushey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+limits+innate+immune+response+in+the+lungs+in+mice.">NADPH oxidase limits innate immune response in the lungs in mice.</a> PLoS ONE. 5, e9631 (2010).</li><li>Jackson, S., Gallin, J., Holland, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p47phox+mouse+knock-out+model+of+chronic+granulomatous+disease.">The p47phox mouse knock-out model of chronic granulomatous disease.</a> J. Exp. Med. 182, 751-758 (1995).</li><li>Gantner, B. N., Simmons, R. M., Underhill, D. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+complement-induced+lung+injury+in+mice+with+deficiency+of+NADPH+oxidase.">Preservation of complement-induced lung injury in mice with deficiency of NADPH oxidase.</a> J. Clin. Invest. 97, 2680-2684 (1996).</li><li>Segal, B., Sakamoto, N., Bulkley, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xanthine+oxidase+contributes+to+host+defense+against+Burkholderia+cepacia+in+the+p47(phox-/-)+mouse+model+of+chronic+granulomatous+disease.">Xanthine oxidase contributes to host defense against Burkholderia cepacia in the p47(phox-/-) mouse model of chronic granulomatous disease.</a> Infect Immun. 68, 2374-2378 (2000).</li><li>Droge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+radicals+in+the+physiological+control+of+cell+function.">Free radicals in the physiological control of cell function.</a> Physiological reviews. 82, 47-95 (2002).</li><li>Jones, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radical-free+biology+of+oxidative+stress.+American+journal+of+physiology.">Radical-free biology of oxidative stress. American journal of physiology.</a> Cell physiology. 295, C849-C868 (2008).</li><li>Hubbard, W. J., Choudhry, M., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture.">Cecal ligation and puncture.</a> Shock. 24, 52-57 .</li><li>Wardman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+and+luminescent+probes+for+measurement+of+oxidative+and+nitrosative+species+in+cells+and+tissues:+progress,+pitfalls,+and+prospects.">Fluorescent and luminescent probes for measurement of oxidative and nitrosative species in cells and tissues: progress, pitfalls, and prospects.</a> Free Radic. Biol. Med. 43, 995-1022 (2007).</li><li>Pollock, J. D., Williams, D. A., Gifford, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+X-linked+chronic+granulomatous+disease,+an+inherited+defect+in+phagocyte+superoxide+production.">Mouse model of X-linked chronic granulomatous disease, an inherited defect in phagocyte superoxide production.</a> Nat. Genet. 9, 202-209 (1995).</li><li>Aramaki, Y., Y, ., Yoshida, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+sensitive+chemiluminescence+probe,+L-012,+for+measuring+the+production+of+superoxide+anion+by+cells.">A new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 193, 554-559 (1993).</li><li>Daiber, A., Oelze, M., August, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+superoxide+and+peroxynitrite+in+model+systems+and+mitochondria+by+the+luminol+analogue+L-012.">Detection of superoxide and peroxynitrite in model systems and mitochondria by the luminol analogue L-012.</a> Free Radic. Res. 38, 259-269 (2004).</li><li>Kielland, A., Blom, T., Nandakumar, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+inflammation+using+the+luminescent+probe+L-012.">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012.</a> Free Radic. Biol. Med. 47, 760-766 (2009).</li></ol>

&quot;Real-time&quot;-Messung von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) in lebenden Tieren kann durch Fluoreszenz-und Chemilumineszenz-Sonden erreicht werden. Während fluoreszierenden Sonden aus mit schwacher Signal-zu-Rausch-Verhältnisse 12 leiden, ist die beschriebene Aufnahmetechnik empfindlicher für die Detektion der Lichtemission im Anschluss an eine chemische Reaktion mit dem ROS Luminol-basierten Substrat L-012. Wie alle Biolumineszenz Bildgebung, wird diese Methodik durch wellenlängenabhängige Licht ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> L-012 </td><td> Wako Chemicals USA, Inc. </td><td> 120-04891 </td><td></td></tr><tr><td> Zymosan </td><td> Sigma, St. Louis, MO </td><td> Z4250 </td><td></td></tr><tr><td> Tetrachlorkohlenstoff </td><td> Sigma, St. Louis, MO </td><td> 289116 </td><td></td></tr></tbody></table>

bioluminescence imaging of nadph oxidase activity in different animal models

NADPH-Oxidase ist ein kritischer Enzym, das antibakterielle und antimykotische Wirts vermittelt. Zusätzlich zu seiner Rolle in der antimikrobiellen Abwehrmechanismen hat NADPH-Oxidase kritischen Meldefunktionen, die die Entzündungsreaktion 1 modulieren. Somit ist die Entwicklung einer Methode, um in &quot;real-time&quot; die Kinetik der NADPH-Oxidase-derived ROS-Generation messen erwartet ein wertvolles Forschungsinstrument Mechanismen relevant Verteidigung, Entzündungen und Verletzungen Gastgeber verstehen. Chronische Granulomatose (CGD) ist eine erbliche Erkrankung des NADPH-Oxidase durch schwere Infektionen und übermäßiger Entzündung aus. Aktivierung der Phagozyten NADPH-Oxidase erfordert Translokation seiner cytosolischen Untereinheiten (p47 phox, p67 phox und p40 phox) und Rac an einen membrangebundenen Flavocytochrom (bestehend aus einer gp91 phox und p22 phox Heterodimer). VerlustFunktionsverlust-Mutationen in einem dieser NADPH-Oxidase Komponenten ergeben CGD. Ähnlich wie bei Patienten mit CGD haben gp91 phox-defizienten Mäusen und p47 phox-defizienten Mäusen defekte Phagozyt NADPH-Oxidase-Aktivität und beeinträchtigter Wirtsabwehr 13, 14. Neben Phagozyten, die die NADPH-Oxidase oben beschriebenen Komponenten enthalten, exprimieren eine Vielzahl von anderen Zelltypen unterschiedliche Isoformen von NADPH-Oxidase. Hier beschreiben wir eine Methode zur ROS-Produktion in lebenden Mäusen zu quantifizieren und den Beitrag der NADPH-Oxidase zu ROS-Generation in den Modellen von Entzündungen und Verletzungen abzugrenzen. Dieses Verfahren basiert auf ROS Umsetzung mit L-012 (ein Analogon von Luminol) zur Lumineszenz, die durch eine Charge-Coupled Device (CCD) aufgezeichnet wird basierend emittieren. In der ursprünglichen Beschreibung der L-012-Sonde wurde L-012-abhängigen Chemolumineszenz vollständig von Superoxiddismutase aufgehoben, was anzeigt, dass der Haupt-ROS in dieser Reaktion nachgewiesen war superOxidanion 15. Spätere Studien haben gezeigt, dass L-012 können andere freie Radikale, einschließlich reaktiven Stickstoffspezies 16, 17 zu detektieren. Kielland et al. 17 zeigte, dass die topische Anwendung von Phorbolmyristatacetat, ein potenter Aktivator der NADPH-Oxidase, führte zu Oxidase-abhängigen ROS Generation, die in Mäusen unter Verwendung des lumineszierenden Sonde L-012 detektiert werden könnte NADPH. In diesem Modell zeigten sie, dass L-012-abhängigen Lumineszenz in p47 phox-defizienten Mäusen wurde aufgehoben. Wir verglichen ROS-Generation in Wildtyp-Mäusen und NADPH-Oxidase-Mangel p47 phox-/ - Mäusen 2 in den folgenden drei Modelle: 1) intratracheale Verabreichung von Zymosan, eine pro-inflammatorische Pilzzellwand abgeleiteten Produkt, das NADPH-Oxidase aktivieren kann, 2) cecal Ligatur und Punktion (CLP), ein Modell des intra-abdominalen Sepsis mit sekundärer akuter Lungenentzündung und Verletzungen, und 3) mündliche Tetrachlorkohlenstoff(CCl 4), ein Modell der ROS-abhängige Leberschädigung. Diese Modelle wurden speziell ausgewählt, um NADPH-Oxidase-abhängigen ROS-Generation im Rahmen der nicht-infektiösen Entzündungen, polymikrobiellen Sepsis und toxininduzierte Organverletzung auszuwerten sind. Vergleicht man Biolumineszenz in Wildtyp-Mäusen p47 phox-/ - Mäusen ermöglicht es uns, den spezifischen Beitrag von ROS durch p47 phox-haltigen NADPH-Oxidase der Biolumineszenz-Signal in diesen Modellen generiert abzugrenzen. Biolumineszenz-Bildgebung Ergebnisse, die eine erhöhte ROS Ebenen in Wildtyp-Mäusen im Vergleich zu p47 nachgewiesen phox-/ - Mäusen zeigten, dass NADPH-Oxidase die Hauptquelle der ROS-Generation ist in Reaktion auf entzündliche Reize. Diese Methode bietet eine minimal-invasive Ansatz für &quot;real-time&quot; Überwachung der ROS-Generation während der Entzündung in vivo.

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Bioluminescence Imaging of NADPH Oxidase Activity in Different Animal Models

NADPH-Oxidase ist die wichtigste Quelle von reaktiven Sauerstoffspezies (ROS) in Phagozyten. Aufgrund der Kurzlebigkeit von ROS, ist es schwierig zu messen und zu überwachen ROS Ebenen in lebenden Tieren. Ein minimal invasives Verfahren zur seriellen Quantifizierung von ROS in lebenden Mäusen beschrieben.

Biolumineszenz Imaging von NADPH-Oxidase-Aktivität in verschiedenen Tiermodellen

NADPH oxidase is a critical enzyme that mediates antibacterial and antifungal host defense. In addition to its role in antimicrobial host defense, NADPH ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

Diagnose von Ekto-und Endoparasiten in Laborratten und Labormäusen

Internal and external parasites remain a significant concern in laboratory rodent facilities, and many research facilities harbor some parasitized ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Speichel, Speicheldrüse, und Hämolymphe Abholung Ixodes scapularis Zecken

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Long Term Intravital Multiphoton Microscopy Imaging of Immune Cells in Healthy and Diseased Liver Using CXCR6.Gfp Reporter Mice

Langzeitintravital Multiphotonen Mikroskopie Imaging von Immunzellen in gesunden und kranken Leber Mit CXCR6.Gfp Reporter Mäuse

Liver inflammation as a response to injury is a highly dynamic process involving the infiltration of distinct subtypes of leukocytes including monocytes, ...

Isolation and Transplantation of Different Aged Murine Thymic Grafts.

Isolation und Transplantation von Different Aged Murine Thymic Grafts.

The mechanisms that regulate the efficacy of thymic selection remain ill-defined. The method presented here allows in vivo analyses of the development and ...

Bioluminescence Imaging to Detect Late Stage Infection of African Trypanosomiasis

Biolumineszenz-Bildgebung zur Erkennung von Late Stage-Infektion der afrikanischen Trypanosomiasis

Human African trypanosomiasis (HAT) is a multi-stage disease that manifests in two stages; an early blood stage and a late stage when the parasite invades ...

Flow Cytometric Analysis of Natural Killer Cell Lytic Activity in Human Whole Blood

Durchflusszytometrische Analyse von natürlichen Killerzellen lytische Aktivität in menschlichem Vollblut

NK cell cytotoxicity is a widely used measure to determine the effect of outside intervention on NK cell function. However, the accuracy and ...

In Vivo Investigation of Antimicrobial Blue Light Therapy for Multidrug-resistant Acinetobacter baumannii Burn Infections Using Bioluminescence Imaging

In Vivo Investigation of Antimicrobial Blue Light Therapy for Multidrug-resistant Acinetobacter baumannii Burn Infections Using Bioluminescence Imaging

In - vivo - Untersuchung von Antimicrobial Blau Lichttherapie für Multiresistente Acinetobacter baumannii Brennen Infektionen Biolumineszenz - Bildgebung

Burn infections continue to be an important cause of morbidity and mortality. The increasing emergence of multidrug-resistant (MDR) bacteria has led to ...

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Nicht-invasiv<em&gt; In vivo</em&gt; Fluoreszenzoptische Bildgebung der entzündlichen MMP-Aktivität unter Verwendung eines aktivierbaren Fluoreszenzbildgebers

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

Live Imaging of Antifungal Activity by Human Primary Neutrophils and Monocytes in Response to A. fumigatus

Live Imaging of Antifungal Activity by Human Primary Neutrophils and Monocytes in Response to A. fumigatus

Live-Imaging von Anti-Pilz-Aktivität von Human Primary Neutrophilen und Monozyten in Reaktion auf<em&gt; A. fumigatus</em

Aspergillus fumigatus is an opportunistic fungal pathogen causing invasive infections in immunocompromised hosts with a high case-fatality rate. Research ...

Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice

Implantation und Überwachung eines orthotopischen Modells des menschlichen Pleuralmesothelioms bei athymischen Mäusen durch PET/CT

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...