Name: bioluminescence imaging of nadph oxidase activity in different animal models
Uploaded: 2012-10-22T12:00:00
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Questo lavoro è stato finanziato dal NIH RO1 AI079253 e Department of Veterans Affairs.

1. Modelli animali <ol><li> Mouse: utilizzare p47 phox-/ - topi e per età e sesso-abbinato topi C57BL6/DBA. Ottenere l&#39;approvazione per gli esperimenti di cura degli animali e del Comitato Istituzionale uso. </li><li> Anestesia: Utilizzare un sistema continuo di amministrazione isoflurano per indurre l&#39;anestesia. Il sistema vaporizzatore (VetEquip) è riempito con isoflurano (2-3%). Verificare che i topi sono completamente anestetizzati osservando la respirazione, il movimento, e riflesso ...

<ol>
	<li>Segal, B., Han, W., Bushey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+limits+innate+immune+response+in+the+lungs+in+mice.">NADPH oxidase limits innate immune response in the lungs in mice.</a> PLoS ONE. 5, e9631 (2010).</li><li>Jackson, S., Gallin, J., Holland, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p47phox+mouse+knock-out+model+of+chronic+granulomatous+disease.">The p47phox mouse knock-out model of chronic granulomatous disease.</a> J. Exp. Med. 182, 751-758 (1995).</li><li>Gantner, B. N., Simmons, R. M., Underhill, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collaborative+induction+of+inflammatory+responses+by+dectin-1+and+Toll-like+receptor+2.">Collaborative induction of inflammatory responses by dectin-1 and Toll-like receptor 2.</a> J. Exp. Med. 197, 1107-1117 (2003).</li><li>Dejager, L., Pinheiro, I., Libert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture:+the+gold+standard+model+for+polymicrobial+sepsis.">Cecal ligation and puncture: the gold standard model for polymicrobial sepsis.</a> Trends Microbiol. 19, 198-208 (2011).</li><li>Tsiotou, A. G., Sakorafas, G. H., Bramis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Septic+shock;+current+pathogenetic+concepts+from+a+clinical+perspective.">Septic shock; current pathogenetic concepts from a clinical perspective.</a> Med. Sci. Monit. 11, 76-85 (2005).</li><li>Fujii, T., Fuchs, B. C., Tanabe, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+carbon+tetrachloride+induced+liver+fibrosis:+Histopathological+changes+and+expression+of+CD133+and+epidermal+growth+factor.">Mouse model of carbon tetrachloride induced liver fibrosis: Histopathological changes and expression of CD133 and epidermal growth factor.</a> BMC Gastroenterology. 10, 79-90 (2010).</li><li>Kubo, H., Morgensterm, D., Doerschuk, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+complement-induced+lung+injury+in+mice+with+deficiency+of+NADPH+oxidase.">Preservation of complement-induced lung injury in mice with deficiency of NADPH oxidase.</a> J. Clin. Invest. 97, 2680-2684 (1996).</li><li>Segal, B., Sakamoto, N., Bulkley, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xanthine+oxidase+contributes+to+host+defense+against+Burkholderia+cepacia+in+the+p47(phox-/-)+mouse+model+of+chronic+granulomatous+disease.">Xanthine oxidase contributes to host defense against Burkholderia cepacia in the p47(phox-/-) mouse model of chronic granulomatous disease.</a> Infect Immun. 68, 2374-2378 (2000).</li><li>Droge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+radicals+in+the+physiological+control+of+cell+function.">Free radicals in the physiological control of cell function.</a> Physiological reviews. 82, 47-95 (2002).</li><li>Jones, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radical-free+biology+of+oxidative+stress.+American+journal+of+physiology.">Radical-free biology of oxidative stress. American journal of physiology.</a> Cell physiology. 295, C849-C868 (2008).</li><li>Hubbard, W. J., Choudhry, M., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture.">Cecal ligation and puncture.</a> Shock. 24, 52-57 .</li><li>Wardman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+and+luminescent+probes+for+measurement+of+oxidative+and+nitrosative+species+in+cells+and+tissues:+progress,+pitfalls,+and+prospects.">Fluorescent and luminescent probes for measurement of oxidative and nitrosative species in cells and tissues: progress, pitfalls, and prospects.</a> Free Radic. Biol. Med. 43, 995-1022 (2007).</li><li>Pollock, J. D., Williams, D. A., Gifford, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+X-linked+chronic+granulomatous+disease,+an+inherited+defect+in+phagocyte+superoxide+production.">Mouse model of X-linked chronic granulomatous disease, an inherited defect in phagocyte superoxide production.</a> Nat. Genet. 9, 202-209 (1995).</li><li>Aramaki, Y., Y, ., Yoshida, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+sensitive+chemiluminescence+probe,+L-012,+for+measuring+the+production+of+superoxide+anion+by+cells.">A new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 193, 554-559 (1993).</li><li>Daiber, A., Oelze, M., August, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+superoxide+and+peroxynitrite+in+model+systems+and+mitochondria+by+the+luminol+analogue+L-012.">Detection of superoxide and peroxynitrite in model systems and mitochondria by the luminol analogue L-012.</a> Free Radic. Res. 38, 259-269 (2004).</li><li>Kielland, A., Blom, T., Nandakumar, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+inflammation+using+the+luminescent+probe+L-012.">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012.</a> Free Radic. Biol. Med. 47, 760-766 (2009).</li></ol>

Misurazione &quot;tempo reale&quot; di specie reattive dell&#39;ossigeno (ROS) in animali viventi può essere ottenuto utilizzando sonde fluorescenti e chemiluminescenza. Mentre sonde fluorescenti soffrono avente deboli segnale-rumore 12 rapporti, la tecnica di imaging descritta è più sensibile per la rilevazione di emissione di luce dopo una reazione chimica di ROS con il luminol substrato a base di L-012. Come tutte le tecniche di imaging bioluminescenti, questa metodologia è limitata dalla lunghezza d&#...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> L-012 </td><td> Wako Chemicals USA, Inc. </td><td> 120-04891 </td><td></td></tr><tr><td> Zymosan </td><td> Sigma, St. Louis, MO </td><td> Z4250 </td><td></td></tr><tr><td> tetracloruro di carbonio </td><td> Sigma, St. Louis, MO </td><td> 289116 </td><td></td></tr></tbody></table>

bioluminescence imaging of nadph oxidase activity in different animal models

NADPH ossidasi è un enzima critico che media difesa dell&#39;ospite antibatterica e antimicotica. Oltre al suo ruolo nella difesa dell&#39;ospite antimicrobica, NADPH ossidasi ha funzioni critiche di segnalazione che modulano la risposta infiammatoria 1. Pertanto, lo sviluppo di un metodo per misurare in &quot;tempo reale&quot; la cinetica di NADPH ossidasi derivata generazione di ROS dovrebbe essere un valido strumento di ricerca per comprendere i meccanismi pertinenti per ospitare difesa, infiammazione e lesioni. Malattia granulomatosa cronica (CGD) è una malattia ereditaria del NADPH ossidasi caratterizzato da gravi infezioni e infiammazioni eccessivo. L&#39;attivazione della NADPH ossidasi dei fagociti richiede traslocazione delle sue subunità citosoliche (p47 phox, p67 phox e p40 phox) e Rac ad una membrana legato flavocytochrome (composto da un phox gp91 e p22 phox eterodimero). Perditadi funzione mutazioni in uno qualsiasi di questi risultati NADPH ossidasi componenti in CGD. Come per i pazienti con CGD, gp91 phox-carente topo e p47 phox-carenza topi hanno difettoso fagocita attività della NADPH ossidasi e di accoglienza alterata difesa 13, 14. Oltre a fagociti, che contengono i componenti sopra descritti NADPH ossidasi, una varietà di altri tipi di cellule esprimono diverse isoforme di ossidasi NADPH. Qui, descriviamo un metodo per quantificare la produzione di ROS nei topi di vita e di delineare il contributo della NADPH ossidasi di generazione di ROS in modelli di infiammazione e lesioni. Questo metodo si basa su ROS reagire con L-012 (un analogo del luminol) per emettere luminescenza che è registrato da un dispositivo ad accoppiamento di carica (CCD). Nella descrizione originale della L-012 probe, L-012-dipendente chemiluminescenza è stata completamente abolita dal superossido dismutasi, indicando che il principale ROS rilevato in questa reazione era superossido di anione 15. Studi successivi hanno dimostrato che la L-012 in grado di rilevare altri radicali liberi, comprese le specie reattive dell&#39;azoto 16, 17. Kielland et al. 17 hanno dimostrato che l&#39;applicazione topica del forbolo miristato acetato, un potente attivatore di NADPH ossidasi, portato in NADPH ossidasi-dipendente generazione di ROS che potrebbe essere rilevata nel topo, utilizzando la sonda luminescente L-012. In questo modello, hanno mostrato che la luminescenza L-012-dipendente è stata abolita nel p47 phox-carente topo. Abbiamo confrontato generazione di ROS nei topi di tipo selvatico e NADPH ossidasi-carente p47 phox-/ - mice 2 nei seguenti tre modelli: 1) somministrazione intratracheale di zymosan, un pro-infiammatoria della parete cellulare fungina prodotto derivato che può attivare NADPH ossidasi; 2) legatura del cieco e la puntura (CLP), un modello di sepsi intra-addominale secondaria infiammazione polmonare acuta e del pregiudizio, e 3) tetracloruro di carbonio per via orale(CCl 4), un modello di ROS-dipendente danno epatico. Questi modelli sono stati specificamente selezionati per valutare ossidasi NADPH-dipendente generazione di ROS nel contesto di infiammazione non infettiva, sepsi polimicrobica e tossina danno indotto organo, rispettivamente. Confrontando bioluminescenza nei topi di tipo selvatico di p47 phox-/ - mice ci permette di delineare il contributo specifico di ROS generato da p47 phox contenente NADPH ossidasi al segnale bioluminescente in questi modelli. Risultati di imaging bioluminescenza che hanno dimostrato un aumento dei livelli di ROS nei topi di tipo selvatico rispetto al p47 phox-/ - topi ha indicato che NADPH ossidasi è la principale fonte di generazione di ROS in risposta a stimoli infiammatori. Questo metodo fornisce un approccio minimamente invasivo per il monitoraggio &quot;in tempo reale&quot; di generazione di ROS durante l&#39;infiammazione in vivo.

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Bioluminescence Imaging of NADPH Oxidase Activity in Different Animal Models

NADPH ossidasi è la principale fonte di specie reattive dell&#39;ossigeno (ROS) in fagociti. A causa della natura effimera dei ROS, è difficile misurare e monitorare i livelli di ROS negli animali viventi. Un metodo minimamente invasivo per la quantificazione seriale di ROS in topi viventi è descritto.

Imaging bioluminescenza di attività NADPH ossidasi in diversi modelli animali

NADPH oxidase is a critical enzyme that mediates antibacterial and antifungal host defense. In addition to its role in antimicrobial host defense, NADPH ...

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