Name: bioluminescence imaging of nadph oxidase activity in different animal models
Uploaded: 2012-10-22T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bioluminescence Imaging of NADPH Oxidase Activity in Different Animal Models at JoVE.com

Este trabajo fue financiado por el NIH RO1 AI079253 y el Departamento de Asuntos de Veteranos.

1. Modelos Animales <ol><li> Ratones: Use p47 phox-/ - ratones y la edad y el sexo combinado-ratones C57BL6/DBA. Obtener la aprobación para los experimentos de Cuidado de Animales institucional y el empleo. </li><li> Anestesia: Utilice un sistema de administración continua para inducir la anestesia con isoflurano. El sistema vaporizador (VetEquip) se llena con isoflurano (2-3%). Confirmar que los ratones son completamente anestesiado mediante la observación de la respiración, el movimiento y re...

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	<li>Segal, B., Han, W., Bushey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NADPH+oxidase+limits+innate+immune+response+in+the+lungs+in+mice.">NADPH oxidase limits innate immune response in the lungs in mice.</a> PLoS ONE. 5, e9631 (2010).</li><li>Jackson, S., Gallin, J., Holland, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p47phox+mouse+knock-out+model+of+chronic+granulomatous+disease.">The p47phox mouse knock-out model of chronic granulomatous disease.</a> J. Exp. Med. 182, 751-758 (1995).</li><li>Gantner, B. N., Simmons, R. M., Underhill, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collaborative+induction+of+inflammatory+responses+by+dectin-1+and+Toll-like+receptor+2.">Collaborative induction of inflammatory responses by dectin-1 and Toll-like receptor 2.</a> J. Exp. Med. 197, 1107-1117 (2003).</li><li>Dejager, L., Pinheiro, I., Libert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture:+the+gold+standard+model+for+polymicrobial+sepsis.">Cecal ligation and puncture: the gold standard model for polymicrobial sepsis.</a> Trends Microbiol. 19, 198-208 (2011).</li><li>Tsiotou, A. G., Sakorafas, G. H., Bramis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Septic+shock;+current+pathogenetic+concepts+from+a+clinical+perspective.">Septic shock; current pathogenetic concepts from a clinical perspective.</a> Med. Sci. Monit. 11, 76-85 (2005).</li><li>Fujii, T., Fuchs, B. C., Tanabe, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+carbon+tetrachloride+induced+liver+fibrosis:+Histopathological+changes+and+expression+of+CD133+and+epidermal+growth+factor.">Mouse model of carbon tetrachloride induced liver fibrosis: Histopathological changes and expression of CD133 and epidermal growth factor.</a> BMC Gastroenterology. 10, 79-90 (2010).</li><li>Kubo, H., Morgensterm, D., Doerschuk, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+complement-induced+lung+injury+in+mice+with+deficiency+of+NADPH+oxidase.">Preservation of complement-induced lung injury in mice with deficiency of NADPH oxidase.</a> J. Clin. Invest. 97, 2680-2684 (1996).</li><li>Segal, B., Sakamoto, N., Bulkley, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xanthine+oxidase+contributes+to+host+defense+against+Burkholderia+cepacia+in+the+p47(phox-/-)+mouse+model+of+chronic+granulomatous+disease.">Xanthine oxidase contributes to host defense against Burkholderia cepacia in the p47(phox-/-) mouse model of chronic granulomatous disease.</a> Infect Immun. 68, 2374-2378 (2000).</li><li>Droge, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+radicals+in+the+physiological+control+of+cell+function.">Free radicals in the physiological control of cell function.</a> Physiological reviews. 82, 47-95 (2002).</li><li>Jones, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radical-free+biology+of+oxidative+stress.+American+journal+of+physiology.">Radical-free biology of oxidative stress. American journal of physiology.</a> Cell physiology. 295, C849-C868 (2008).</li><li>Hubbard, W. J., Choudhry, M., Chaudry, I. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cecal+ligation+and+puncture.">Cecal ligation and puncture.</a> Shock. 24, 52-57 .</li><li>Wardman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+and+luminescent+probes+for+measurement+of+oxidative+and+nitrosative+species+in+cells+and+tissues:+progress,+pitfalls,+and+prospects.">Fluorescent and luminescent probes for measurement of oxidative and nitrosative species in cells and tissues: progress, pitfalls, and prospects.</a> Free Radic. Biol. Med. 43, 995-1022 (2007).</li><li>Pollock, J. D., Williams, D. A., Gifford, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+X-linked+chronic+granulomatous+disease,+an+inherited+defect+in+phagocyte+superoxide+production.">Mouse model of X-linked chronic granulomatous disease, an inherited defect in phagocyte superoxide production.</a> Nat. Genet. 9, 202-209 (1995).</li><li>Aramaki, Y., Y, ., Yoshida, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+sensitive+chemiluminescence+probe,+L-012,+for+measuring+the+production+of+superoxide+anion+by+cells.">A new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 193, 554-559 (1993).</li><li>Daiber, A., Oelze, M., August, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+superoxide+and+peroxynitrite+in+model+systems+and+mitochondria+by+the+luminol+analogue+L-012.">Detection of superoxide and peroxynitrite in model systems and mitochondria by the luminol analogue L-012.</a> Free Radic. Res. 38, 259-269 (2004).</li><li>Kielland, A., Blom, T., Nandakumar, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+reactive+oxygen+and+nitrogen+species+in+inflammation+using+the+luminescent+probe+L-012.">In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012.</a> Free Radic. Biol. Med. 47, 760-766 (2009).</li></ol>

&quot;Tiempo real&quot; medición de las especies reactivas de oxígeno (ROS) en los animales vivos se puede lograr mediante el uso de sondas fluorescentes y quimioluminiscentes. Mientras que las sondas fluorescentes sufren de tener débiles señal-a-ruido 12, se describe la técnica de imagen es más sensible para la detección de la emisión de luz después de una reacción química de ROS con el sustrato luminol basado en L-012. Como todas las técnicas de formación de imágenes bioluminiscentes, esta met...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> El número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> L-012 </td><td> Wako Chemicals EE.UU., Inc. </td><td> 120-04891 </td><td></td></tr><tr><td> Zymosan </td><td> Sigma, St. Louis, MO </td><td> Z4250 </td><td></td></tr><tr><td> tetracloruro de carbono </td><td> Sigma, St. Louis, MO </td><td> 289116 </td><td></td></tr></tbody></table>

bioluminescence imaging of nadph oxidase activity in different animal models

La NADPH oxidasa es una enzima crítica que media la defensa del huésped antibacteriana y antifúngica. Además de su papel en la defensa del huésped antimicrobiana, la NADPH oxidasa tiene funciones críticas de señalización que modulan la respuesta inflamatoria 1. Por lo tanto, el desarrollo de un método para medir en &quot;tiempo real&quot; la cinética de la NADPH oxidasa derivada de la generación de ROS se espera que sea una valiosa herramienta de investigación para comprender los mecanismos pertinentes para la defensa del huésped, la inflamación y lesiones. La enfermedad granulomatosa crónica (EGC) es un trastorno hereditario de la NADPH oxidasa se caracteriza por infecciones graves y la inflamación excesiva. La activación de la NADPH oxidasa de los fagocitos requiere la translocación de sus subunidades citosólicas (p47 phox, p67 phox y p40 phox) y RAC a un flavocitocromo unida a la membrana (compuesto de una gp91 phox y p22 phox heterodímero). Pérdidade mutaciones de función en cualquiera de estos componentes de la NADPH oxidasa resultado en la EGC. Similar a los pacientes con EGC, gp91 phox los ratones deficientes en p47 y los ratones deficientes tienen phox-defectuoso actividad de la NADPH oxidasa de los fagocitos y deterioro de la defensa de acogida 13, 14. Además de los fagocitos, que contienen los componentes de la NADPH oxidasa descritos anteriormente, una variedad de otros tipos de células expresan diferentes isoformas de la NADPH oxidasa. Aquí se describe un método para cuantificar la producción de ROS en ratones vivos y para delinear la contribución de NADPH oxidasa para la generación de ROS en modelos de inflamación y lesiones. Este método se basa en el ROS reaccionar con L-012 (un análogo de luminol) para emitir luminiscencia que se registra mediante un dispositivo de carga acoplada (CCD). En la descripción original de la sonda L-012, L-012-dependiente quimioluminiscencia fue completamente abolida por la superóxido dismutasa, que indica que el principal ROS detectado en esta reacción fue superóxido de anión 15. Estudios posteriores han demostrado que la L-012 puede detectar otros radicales libres, incluyendo especies reactivas de nitrógeno 16, 17. Kielland et al. 17 mostraron que la aplicación tópica de acetato de forbol miristato, un potente activador de la NADPH oxidasa, llevado a NADPH oxidasa dependiente de la generación de ROS que podría ser detectado en ratones utilizando la sonda luminiscente L-012. En este modelo, se mostró que la luminiscencia L-012-dependiente fue abolida en p47 phox de ratones deficientes. Hemos comparado la generación de ROS en ratones de tipo salvaje y NADPH oxidasa deficiente en p47 phox-/ - ratones 2 en los tres modelos siguientes: 1) la administración intratraqueal de zymosan, una célula fúngica pro-inflamatoria pared producto derivado que puede activar la NADPH oxidasa; 2) ligadura cecal y punción (CLP), un modelo de sepsis intraabdominal con la inflamación pulmonar aguda secundaria y lesiones, y 3) el tetracloruro de carbono orales(CCl 4), un modelo de lesión hepática dependiente de ROS. Estos modelos se seleccionaron específicamente para evaluar la NADPH oxidasa dependiente de la generación de ROS en el contexto de la inflamación no infecciosa, sepsis polimicrobiana y lesión inducida por la toxina del órgano, respectivamente. Comparación de bioluminiscencia en los ratones de tipo salvaje p47 phox a-/ - ratones nos permite delinear la contribución específica de ROS generados por p47 phox de la NADPH oxidasa que contiene a la señal bioluminiscente en estos modelos. Resultados de bioluminiscencia de formación de imágenes que demostraron el aumento de los niveles de ROS en ratones de tipo salvaje en comparación con p47 phox-/ - ratones indicó que la NADPH oxidasa es la fuente principal de la generación de ROS en respuesta a estímulos inflamatorios. Este método proporciona un método mínimamente invasivo para el &quot;tiempo real&quot; monitoreo de la generación de ROS durante la inflamación in vivo.

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Bioluminescence Imaging of NADPH Oxidase Activity in Different Animal Models

La NADPH oxidasa es la mayor fuente de especies reactivas de oxígeno (ROS) en los fagocitos. Debido a la naturaleza efímera de ROS, es difícil de medir y controlar los niveles de ROS en los animales vivos. Un procedimiento mínimamente invasivo para la cuantificación de serie de ROS en ratones vivos se describe.

Bioluminiscencia de imágenes de la actividad NADPH oxidasa en diferentes modelos animales

NADPH oxidase is a critical enzyme that mediates antibacterial and antifungal host defense. In addition to its role in antimicrobial host defense, NADPH ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Diagnosis of Ecto- and Endoparasites in Laboratory Rats and Mice

El diagnóstico de ecto y endoparásitos en ratas y ratones de laboratorio

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Investigación

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Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

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Largo Plazo intravital Multifotónica de imágenes de microscopía de células inmunitarias en sanos y enfermos de hígado utilizando ratones CXCR6.Gfp Reporter

Liver inflammation as a response to injury is a highly dynamic process involving the infiltration of distinct subtypes of leukocytes including monocytes, ...

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The mechanisms that regulate the efficacy of thymic selection remain ill-defined. The method presented here allows in vivo analyses of the development and ...

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Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

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No invasiva<em&gt; En Vivo</emHome Idiomas Ingresar a Epistemonikos Búsqueda avanzada Fluorescencia de imágenes ópticas de la actividad MMP inflamatoria utilizando un agente de imagen fluorescente activable

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

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Imágenes en vivo de la actividad antifúngica por los neutrófilos humanos primarios y los monocitos en respuesta a las<em&gt; A. fumigatus</em

Aspergillus fumigatus is an opportunistic fungal pathogen causing invasive infections in immunocompromised hosts with a high case-fatality rate. Research ...

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Implantación y monitorización por PET/CT de un modelo ortotópico de mesotelioma pleural humano en ratones atímicos

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...