Name: rapid fibroblast removal from high density human embryonic stem cell cultures
Uploaded: 2012-10-28T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل كلية II جائزة جديدة من معهد كاليفورنيا للطب التجديدي (RN2-00921-1)، والمعاهد الوطنية للصحة التي تمولها جائزة القومي للبحوث (F32-HL104924)

1. إعداد الطاعمون الماوس الجنينية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ينبغي MEFs المستخدمة في الثقافة المشتركة للتعامل hESCs من قبل التشعيع أو ميتوميسين C-لمنع الخلايا من الانقسام تمر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ساعتين قبل البذر MEF، ومعطف كل البلازما 60 مم تع?...

<ol>
	<li>Bongso, A., Fong, C. Y., Ng, S. C., Ratnam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+inner+cell+mass+cells+from+human+blastocysts.">Isolation and culture of inner cell mass cells from human blastocysts.</a> Hum. Reprod. 9, 2110-2117 (1994).</li><li>Reubinoff, B. E., Pera, M. F., Fong, C. Y., Trounson, A., Bongso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+from+human+blastocysts:+somatic+differentiation+in+vitro.">Embryonic stem cell lines from human blastocysts: somatic differentiation in vitro.</a> Nat. Biotechnol. 18, 399-404 (2000).</li><li>Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts.">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li><li>Thomas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated,+scalable+culture+of+human+embryonic+stem+cells+in+feeder-free+conditions.">Automated, scalable culture of human embryonic stem cells in feeder-free conditions.</a> Biotechnol Bioeng. 102, 1636-1644 (2009).</li><li>Kolhar, P., Kotamraju, V. R., Hikita, S. T., Clegg, D. O., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+surfaces+for+human+embryonic+stem+cell+culture.">Synthetic surfaces for human embryonic stem cell culture.</a> J. Biotechnol. 146, 143-146 (2010).</li><li>Hovatta, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+culture+system+using+human+foreskin+fibroblasts+as+feeder+cells+allows+production+of+human+embryonic+stem+cells.">A culture system using human foreskin fibroblasts as feeder cells allows production of human embryonic stem cells.</a> Hum. Reprod. 18, 1404-1409 (2003).</li><li>McKay, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+feeder+cell+line+for+derivation+and+culture+of+hESc/hiPSc.">Human feeder cell line for derivation and culture of hESc/hiPSc.</a> Stem Cell Res. 7, 154-162 (2011).</li><li>Xu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeder-free+growth+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells.">Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 19, 971-974 (2001).</li><li>Stein, G. S., Shi, M. J., Stencel, K., Borowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Thawing, Seeding, and Changing Medium of Human Embryonic Stem Cells. , (2010).</li><li>Schwartz, P. H., Brick, D. J., Nethercott, H. E., Stover, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+human+embryonic+stem+cell+culture.">Traditional human embryonic stem cell culture.</a> Methods Mol. Biol. 767, 107-123 .</li></ol>

الأسلوب الواردة في هذا المخطوط يوفر بديلا سريعا وأقل تكلفة للقضاء على الخلايا الليفية المغذية من مزارع الخلايا الجنينية البشرية. إزالة الخلايا الليفية بنجاح يتوقف على وجود أحادي الطبقة متموجة بإحكام هذه الخلايا التي تطور الثقافات في أطول الخلايا الجذعية. بعد 7-10 أي?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> التعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> DDR2 </td><td> سانتا كروز </td><td> 7555 </td><td> الخلايا الليفية ماركر </td></tr><tr><td> دابي </td><td> Calbiochem </td><td> 268298 </td><td> الخلية نواة ماركر </td></tr><tr><td> SSEA-4 </td><td> ميليبور </td><td> MAB4304 </td><td> الإنسان ESC ماركر </td></tr><tr><td> Oct 3/4 </td><td> سانتا كروز </td><td> 9081 </td><td> الإنسان ESC ماركر </td></tr><tr><td> FLK-1 </td><td> BD فارما </td><td> 555307 </td><td> في وقت مبكر التمايز ماركر </td></tr><tr><td> هيئة تنظيم الاتصالات، 1-81 </td><td> الاحتدادي </td><td> AM20377AF4-S </td><td> الإنسان ESC ماركر </td></tr></tbody></table> الجدول 1. جدول الجرمية المحددةأيها السادة لاستخدام المناعية للhESC.

rapid fibroblast removal from high density human embryonic stem cell cultures

واستخدمت الخلايا الليفية الماوس الجنينية (MEFs) لتأسيس الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) بعد عزل الثقافات الكيسة 1. هذا النظام يحافظ على وحدة التغذية من hESCs تمر التمايز عفوية خلال توسيع الخلية. ومع ذلك، هذا الأسلوب المشارك الثقافة هي كثيفة العمالة، يتطلب موظفين مدربين تدريبا عاليا، وعوائد منخفضة النقاء hESC 4. وقد حاول العديد من المختبرات لتقليل عدد الخلايا المغذية في الثقافات hESC (أي مصفوفة تتضمن الأطباق المغلفة أو غيرها من أنواع الخلايا المغذية 5-8). وقد أظهرت هذه الأنظمة ثقافة تعديل بعض الأمل، ولكن لم محل الطريقة المعيارية لزراعة hESCs مع C المعالجة الخلايا الليفية الماوس ميتوميسين embyronic من أجل إعاقة التمايز عفوية غير المرغوب فيها من الثقافات hESC. ولذلك، يجب إزالة الخلايا المغذية المستخدمة في التوسع خلال التجارب hESC التمايز. على الرغم من أن العديد من التقنيات المتوفرة لتنقية شارك hESClonies (FACS، MACS، أو استخدام ناقلات المقاوم للأدوية) من مغذيات، هذه التقنيات هي كثيفة العمالة ومكلفة و / أو المدمرة إلى hESC. كان الهدف من هذا المشروع هو ابتكار وسيلة لتنقية تمكن حصاد يبلغ عدد سكانها أكثر نقاء من hESCs. وقد لاحظنا أنه في ثقافة hESC متموجة، يمكن إزالة السكان MEF باستخدام تطلع بسيطة وسريعة من ورقة MEF. هذا يعتمد على إزالة عدة عوامل، بما في ذلك ملزم الخلية الى خلية الوحشي للMEFs التي لديها أقل تقارب ملزمة إلى الطبق الثقافة الستايرين، وقدرة المستعمرات الخلايا الجذعية لدفع الخلايا الليفية إلى الخارج خلال جيل من تلقاء نفسها &quot; المتخصصة &quot;. تم فحص ثم hESC لOct3، SSEA-4/4 وترا التعبير 1-81 تصل إلى 10 أيام بعد إزالة MEF لضمان الحفاظ على تعدد القدرات. وعلاوة على ذلك، كانت مستعمرات hESC قادرة على مواصلة النمو في أكبر تشكيلات من بعد إزالة MEF، وتوفير مستوى إضافي من التوسع hESC.

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures at JoVE.com

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures (Video) | JoVE

على الرغم من الجهود الجارية لثقافات الانتقال إلى شروط التغذية الحرة، والاشتقاق وثقافة الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) لا تزال تعتمد إلى حد كبير على الثقافات بالتعاون مع مغذيات الماوس الجنينية (MEFs). هنا، وتبين لنا منهجية جديدة لإزالة بسرعة من مغذيات الثقافات hESC قبل التجريب.

إزالة الخلايا الليفية السريع من الكثافة البشرية العالية الجنينية الخلايا الجذعية الثقافات

Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were used to establish human embryonic stem cells (hESCs) cultures after blastocyst isolation1. This feeder system ...

Research

JoVE Journal

Biology

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin. (Video) | JoVE

الأشكال الركض الجذعية الجنينية البشرية خلية خطوط مع التربسين

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells (Video) | JoVE

اشتقاق خلايا الجذعية المكونة للدم من الفئران خلايا الجذعية الجنينية

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery (Video) | JoVE

اشتقاق الخلايا الجذعية الجنينية البشرية التي Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures (Video) | JoVE

الماوس البشرة الجذعية العصبية خلية كريست (EPI - NCSC) الثقافات

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells (Video) | JoVE

مناعي لونين من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures (Video) | JoVE

إعداد Lysate مجمع صفائح الدم البشرية (pHPL) باعتبارها الملحق لمصل فعال خالية من الإنسان الحيوان الثقافات الخلايا الجذعية

Platelet derived growth factors have been shown to stimulate cell proliferation efficiently in vivo1,2 and in vitro. This effect has been reported for ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth (Video) | JoVE

الفيديو المعلوماتية الحيوية تحليل النمو البشري الخلية الجذعية الجنينية كولوني

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors (Video) | JoVE

تمايز الخلايا الجذعية الجنينية في السلائف Oligodendrocyte

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents (Video) | JoVE

إنشاء الابتدائية الثقافات الليفية الكبار من القوارض

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation 

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation (Video) | JoVE

رسم مصير الخلايا الجذعية الجنينية البشرية من خلال تكوين ورم مسخي

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...