Name: rapid fibroblast removal from high density human embryonic stem cell cultures
Uploaded: 2012-10-28T16:00:00
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이 작품은 재생 의료의 캘리포니아 연구소 (RN2 - 00921-1) 및 NIH 투자 국가 연구 상 (F32-HL104924)에서 새로운 교수 상 II가 추진하는 사업

1. 마우스 배아 공급기의 작성 <ol><li> hESCs의 공동 문화에 사용되는 MEFs는 이전에 다음 부서를 겪고에서 세포를 억제하기 위해 조사 또는 미토 마이신-C에 의해 처리되어야합니다. </li><li> MEF를 심는 이전 두 시간, 코트는 각 60mm 플라즈마는 0.05 % 젤리 2 ML과 문화 요리를 취급. </li><li> 처리 MEFs의 약병과 ~ 20,000 세포 / cm 2에 판을 해동. </li><li> 세포가 밤새 준수 할 수 있도록 허용합니?...

<ol>
	<li>Bongso, A., Fong, C. Y., Ng, S. C., Ratnam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+inner+cell+mass+cells+from+human+blastocysts.">Isolation and culture of inner cell mass cells from human blastocysts.</a> Hum. Reprod. 9, 2110-2117 (1994).</li><li>Reubinoff, B. E., Pera, M. F., Fong, C. Y., Trounson, A., Bongso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+from+human+blastocysts:+somatic+differentiation+in+vitro.">Embryonic stem cell lines from human blastocysts: somatic differentiation in vitro.</a> Nat. Biotechnol. 18, 399-404 (2000).</li><li>Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts.">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li><li>Thomas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated,+scalable+culture+of+human+embryonic+stem+cells+in+feeder-free+conditions.">Automated, scalable culture of human embryonic stem cells in feeder-free conditions.</a> Biotechnol Bioeng. 102, 1636-1644 (2009).</li><li>Kolhar, P., Kotamraju, V. R., Hikita, S. T., Clegg, D. O., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+surfaces+for+human+embryonic+stem+cell+culture.">Synthetic surfaces for human embryonic stem cell culture.</a> J. Biotechnol. 146, 143-146 (2010).</li><li>Hovatta, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+culture+system+using+human+foreskin+fibroblasts+as+feeder+cells+allows+production+of+human+embryonic+stem+cells.">A culture system using human foreskin fibroblasts as feeder cells allows production of human embryonic stem cells.</a> Hum. Reprod. 18, 1404-1409 (2003).</li><li>McKay, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+feeder+cell+line+for+derivation+and+culture+of+hESc/hiPSc.">Human feeder cell line for derivation and culture of hESc/hiPSc.</a> Stem Cell Res. 7, 154-162 (2011).</li><li>Xu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeder-free+growth+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells.">Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 19, 971-974 (2001).</li><li>Stein, G. S., Shi, M. J., Stencel, K., Borowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Thawing, Seeding, and Changing Medium of Human Embryonic Stem Cells. , (2010).</li><li>Schwartz, P. H., Brick, D. J., Nethercott, H. E., Stover, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+human+embryonic+stem+cell+culture.">Traditional human embryonic stem cell culture.</a> Methods Mol. Biol. 767, 107-123 .</li></ol>

이 논문에 제시된 방법은 인간 배아 세포 문화에서 섬유 아세포 피더 세포를 제거에 신속하고 적은 비용이 많이 드는 대안을 제공합니다. 섬유 아세포의 성공적인 제거 더 이상 줄기 세포 문화에 개발이 세포의 단단히 합류 monolayer의 존재에 따라 달라집니다. 7~10일 후, 성장 hESC의 식민지는 식민지 사이에 점점 더 조밀 한 섬유 아세포 monolayer를 생성, 바깥 방향으로 피더 섬유 아세포를 밀어 것입?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> DDR2 </td><td> 산타 크루즈 (Santa Cruz) </td><td> 7555 </td><td> 섬유 아세포 마커 </td></tr><tr><td> Dapi </td><td> Calbiochem </td><td> 268298 </td><td> 세포 핵 마커 </td></tr><tr><td> SSEA-4 </td><td> Millipore </td><td> MAB4304 </td><td> 인간 ESC 마커 </td></tr><tr><td> Oct 4분의 3 </td><td> 산타 크루즈 (Santa Cruz) </td><td> 9081 </td><td> 인간 ESC 마커 </td></tr><tr><td> Flk-1 </td><td> BD 제약 </td><td> 555307 </td><td> 조기 차별화 마커 </td></tr><tr><td> Tra-1-81 </td><td> Acris </td><td> AM20377AF4-S </td><td> 인간 ESC 마커 </td></tr></tbody></table> 표 1. 특정 정말이에요 표신사는 hESC를 immunostaining에 사용됩니다.

rapid fibroblast removal from high density human embryonic stem cell cultures

마우스 배아 섬유 아세포의 (MEFs)는 blastocyst 절연 1 일 이후 인간 배아 줄기 세포 (hESCs) 문화를 확립하는 데 사용되었습니다. 이 피더 시스템은 셀 확장하는 동안 자연스럽게 차별화를 겪고에서 hESCs을 유지합니다. 그러나이 공동 문화에있어서, 집중적 인 노동이 고도로 숙련 된 인력을 필요로하고, 수율 낮은 hESC의 순도 4. 많은 실험실 hESC 문화의 피더 세포의 수를 (즉, 매트릭스 코팅 요리 또는 기타 피더 세포 유형 5-8을 포함) 최소화하기 위해 시도했습니다. 이러한 수정 문화 시스템은 몇 가지 약속을 표시했지만, 미토 마이신 C-처리 마우스 embyronic의 섬유 아세포로 배양의 hESCs hESC 문화의 원치 않는 자연 차별화를 병신하기 위해에 대한 표준 방법을 supplanted 없습니다. 따라서, hESC 확장에 사용되는 피더 세포는 분화 실험을하는 동안 제거해야합니다. 여러 기술 hESC의 공동 정화에 사용할 수 있지만피더에서 lonies은 (FACS, 맥, 또는 약물 내성 벡터의 사용), 이러한 기술은 노동 집약적 인 비용 및 / 또는 hESC에 파괴됩니다. 이 프로젝트의 목적은 hESCs의 순수한 인구의 수확을 가능하게 정화하는 방법을 발명하는 것이 었습니다. 우리는 합류 hESC 문화에서, MEF 인구는 MEF 시트의 간단하고 빠른 흡인을 사용하여 제거 할 수 관찰했다. 이 제거 &quot;측면 휴대 전화의 스티렌 배양 접시에 낮은 바인딩 친화력을 가지고 MEFs의 결합, 그리고 자신의 세대 동안 바깥쪽으로 섬유 아세포를 누르는 줄기 세포 콜로니의 능력 등 여러 가지 요인에 따라 달라집니다 틈새 &quot;. hESC 그런 다음 pluripotency의 유지 보수를 보장하기 위해 MEF 제거 후 10 일 SSEA-4, Oct3 / 4, Tra 1-81 표현에 조사되었다. 또한, hESC의 식민지는 hESC 확장의 추가 레벨을 제공 MEF 제거 후 큰 형태로의 성장을 계속 할 수있었습니다.

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Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

전환 문화에 피더 - 무료 조건에 지속적인 노력에도 불구하고, 인간 배아 줄기 세포 (hESC)의 유도와 문화 마우스 배아 피더 (MEFs)와 공동 문화에 달려 남아 있습니다. 여기, 우리는 신속하게 이전 실험에 hESC 문화에서 피더를 제거 소설 방법을 보여줍니다.

고밀도의 인간 배아 줄기 세포 문화의 급속한 섬유 아세포 제거

Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were used to establish human embryonic stem cells (hESCs) cultures after blastocyst isolation1. This feeder system ...

Research

JoVE Journal

Biology

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

트립신과 Passaging 색채 인간의 배아 줄기 세포 - 라인

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

연구

생물학

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murine 배아 줄기 세포로부터 조혈 줄기 세포의 유도

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Immunosurgery에 의해 인간 배아 줄기 세포의 유도

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

마우스 표피 신경 크레스트 줄기 세포 (에피 NCSC) 문화

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

인간 배아 줄기 세포에서 염색질의 Immunoprecipitation

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

동물 세럼 - 무료 인간 줄기 세포 배양을위한 효율적인 보충으로 풀링 인간 혈소판 Lysate (pHPL)의 준비

Platelet derived growth factors have been shown to stimulate cell proliferation efficiently in vivo1,2 and in vitro. This effect has been reported for ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

비디오 생물 정보학 인간의 배아 줄기 세포 콜로니 성장 분석

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Oligodendrocyte 엽 성의 전구 물질로 배아 줄기 세포의 분화

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

설치류에서 기본 성인 Fibroblast 문화를 구축

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

기형 종의 형성에 의해 인간 배아 줄기 세포의 운명 매핑

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...