Name: rapid fibroblast removal from high density human embryonic stem cell cultures
Uploaded: 2012-10-28T16:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures at JoVE.com

Bu çalışma Rejeneratif Tıp California Institute (RN2-00921-1) ve bir NIH tarafından finanse edilen Ulusal Araştırma Ödülü (F32-HL104924) bir Yeni Fakülte Ödülü II tarafından finanse edildi

1. Fare Embriyonik Besleyiciler hazırlanması <ol><li> HESC eş-kültür kullanılan MEFS önceden uygulanan bölünme gelen hücreleri inhibe etmek için ışınlama veya mitomisin-C tedavi edilmelidir. </li><li> MEF ekim öncesi iki saat, mont, her 60 mm plazma% 0.05 Jelatin 2 ml kültür çanak tedavi. </li><li> Bir tedavi MEFS bir flakon ve ~ 20.000 hücre / cm 2 plaka çözülme. </li><li> Hücreleri gecede uymak için izin ver. </li></ol> 2. MEFS üzerine Co-tohumlama...

<ol>
	<li>Bongso, A., Fong, C. Y., Ng, S. C., Ratnam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+inner+cell+mass+cells+from+human+blastocysts.">Isolation and culture of inner cell mass cells from human blastocysts.</a> Hum. Reprod. 9, 2110-2117 (1994).</li><li>Reubinoff, B. E., Pera, M. F., Fong, C. Y., Trounson, A., Bongso, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+from+human+blastocysts:+somatic+differentiation+in+vitro.">Embryonic stem cell lines from human blastocysts: somatic differentiation in vitro.</a> Nat. Biotechnol. 18, 399-404 (2000).</li><li>Thomson, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+lines+derived+from+human+blastocysts.">Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts.</a> Science. 282, 1145-1147 (1998).</li><li>Thomas, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated,+scalable+culture+of+human+embryonic+stem+cells+in+feeder-free+conditions.">Automated, scalable culture of human embryonic stem cells in feeder-free conditions.</a> Biotechnol Bioeng. 102, 1636-1644 (2009).</li><li>Kolhar, P., Kotamraju, V. R., Hikita, S. T., Clegg, D. O., Ruoslahti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+surfaces+for+human+embryonic+stem+cell+culture.">Synthetic surfaces for human embryonic stem cell culture.</a> J. Biotechnol. 146, 143-146 (2010).</li><li>Hovatta, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+culture+system+using+human+foreskin+fibroblasts+as+feeder+cells+allows+production+of+human+embryonic+stem+cells.">A culture system using human foreskin fibroblasts as feeder cells allows production of human embryonic stem cells.</a> Hum. Reprod. 18, 1404-1409 (2003).</li><li>McKay, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+feeder+cell+line+for+derivation+and+culture+of+hESc/hiPSc.">Human feeder cell line for derivation and culture of hESc/hiPSc.</a> Stem Cell Res. 7, 154-162 (2011).</li><li>Xu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Feeder-free+growth+of+undifferentiated+human+embryonic+stem+cells.">Feeder-free growth of undifferentiated human embryonic stem cells.</a> Nat. Biotechnol. 19, 971-974 (2001).</li><li>Stein, G. S., Shi, M. J., Stencel, K., Borowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Thawing, Seeding, and Changing Medium of Human Embryonic Stem Cells. , (2010).</li><li>Schwartz, P. H., Brick, D. J., Nethercott, H. E., Stover, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Traditional+human+embryonic+stem+cell+culture.">Traditional human embryonic stem cell culture.</a> Methods Mol. Biol. 767, 107-123 .</li></ol>

Bu yazıda sunulan yöntem, insan embriyonik hücre kültürlerinden fibroblast besleyici hücreler ortadan kaldırmak için hızlı ve az masraflı bir alternatif sunuyor. Fibroblastların başarılı kaldırılması artık kök hücre kültürlerinde gelişen bu hücrelerin sıkıca konfluent Monolayer varlığına bağlıdır. 7-10 gün sonra büyüyen hESC koloniler koloniler arasında giderek yoğun fibroblast monolayer üreten, dışa doğru besleyici fibroblastlar itecektir. Fibroblast monolayer içindeki güçl?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> DDR2 </td><td> Santa Cruz </td><td> 7555 </td><td> Fibroblast Marker </td></tr><tr><td> Dapi </td><td> Calbiochem </td><td> 268298 </td><td> Hücre Çekirdeği Marker </td></tr><tr><td> SSEA-4 </td><td> Millipore </td><td> MAB4304 </td><td> İnsan ESC Marker </td></tr><tr><td> Oct 3/4 </td><td> Santa Cruz </td><td> 9081 </td><td> İnsan ESC Marker </td></tr><tr><td> FLK-1 </td><td> BD Pharma </td><td> 555307 </td><td> Erken Farklılaşma Marker </td></tr><tr><td> Tra-1-81 </td><td> Acris </td><td> AM20377AF4-S </td><td> İnsan ESC Marker </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Özgü nedenlerden TabloGent hESC immünboyama için kullanılır.

rapid fibroblast removal from high density human embryonic stem cell cultures

Fare embriyonik fibroblastlar (MEFS) blastosist izolasyonu 1 sonra insan embriyonik kök hücreleri (hESC) kültürler kurmak için kullanıldı. Bu besleyici sistem hücre genişleme sırasında spontan farklılaşma geçiren gelen hESC korur. Ancak, bu ko-kültür yöntemi, emek yoğun bir yüksek eğitimli personel gerektirir ve verimleri düşük hESC saflık 4. Birçok laboratuar hESC kültürlerinde besleyici hücrelerin sayısının (yani matriks kaplı yemekleri veya diğer besleyici hücre tipleri 5-8 birleşmeyle) en aza indirmek için çalışmışlardır. Bu modifiye edilmiş kültür sistemlerinin bazı söz göstermiştir, ancak mitomisin C ile tedavi edilen fare embyronic fibroblast ile kültür hESC hESC kültürlerin istenmeyen spontan farklılaşma geciktirmek amacıyla için standart yöntem üstlenilmekle değil. Bu nedenle, hESC genişleme kullanılan besleyici hücrelerin farklılaşması deneyler sırasında kaldırılması gerekir. Çeşitli teknikler HESC eş saflaştırılması için kullanılabilir olmasına rağmenserme lonies (FACS, MACS veya ilaca dirençli vektörlerin kullanımı), bu teknikler emek, yoğun masraflı ve / veya hESC için zararlıdır. Bu proje hedefi hESC daha saf bir nüfusun Hasat sağlayan saflaştırılması için bir yöntem bulmak olmuştur. Biz birleşik hESC kültür, MEF nüfus MEF levha basit ve hızlı bir aspirasyon kullanılarak temizlenebilir olduğunu gözlemledim. Bu kaldırma &quot;yanal hücre-hücre stiren kültür çanak için daha düşük bir afiniteye sahip MEFS bağlayıcı ve kendi üretimi sırasında dışa fibroblastlar itmek için kök hücre kolonilerinin yeteneği dahil olmak üzere çeşitli faktörlere bağlıdır niş &quot;. HESC sonra pluripotency devamını sağlamak için MEF uzaklaştırıldıktan sonra 10 gün için SSEA-4, Oct3 / 4 ve Tra 1-81 ifade için incelendi. Ayrıca, hESC koloniler hESC genişleme ek bir düzeyde sağlayan, MEF çıkarıldıktan sonra daha büyük oluşumların içine büyüyen devam başardık.

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures at JoVE.com

Rapid Fibroblast Removal from High Density Human Embryonic Stem Cell Cultures

Geçiş kültürlere besleyici-özgür koşullarda devam eden çabalarına rağmen, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) ve türetme ve kültürü fare embriyonik besleyiciler (MEFS) ile işbirliği kültürler büyük oranda bağımlı kalır. Burada, biz hızla öncesi deneylere hESC kültürlerden besleyiciler kaldırmak için yeni bir metodoloji göstermektedir.

Yüksek Yoğunluklu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kültürleri gelen Rapid Fibroblast Kaldırma

Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) were used to establish human embryonic stem cells (hESCs) cultures after blastocyst isolation1. This feeder system ...

Research

JoVE Journal

Biology

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

Tripsin ile Pasajlanması tonlar İnsan Embriyonik Kök Hücre hatları

In this video we demonstrate how our lab routinely passages HuES human embryonic stem cell lines with trypsin.  Human embryonic stem cells are artifacts ...

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murin Embriyonik Kök Hücre Hematopoetik Kök Hücre türetilmesi

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Immunosurgery İnsan Embriyonik Kök Hücreleri türetilmesi

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell (EPI-NCSC) Cultures

Mouse Epidermal Neural Crest Stem Cell EPI-NCSC Cultures

Fare Epidermal Sinir Crest Kök Hücre (EPI-NCSC) Kültürler

EPI-NCSC are remnants of the embryonic neural crest in an adult location, the bulge of hair follicles. They are multipotent stem cells that have the ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

İnsan Embriyonik Kök Hücre Kromatin Immunoprecipitation

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate (pHPL) as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Preparation of Pooled Human Platelet Lysate pHPL as an Efficient Supplement for Animal Serum-Free Human Stem Cell Cultures

Hayvan Serum Ücretsiz İnsan Kök Hücre Kültürleri Verimli Ek olarak Pooled İnsan Trombosit Lizat (pHPL) hazırlanması

Platelet derived growth factors have been shown to stimulate cell proliferation efficiently in vivo1,2 and in vitro. This effect has been reported for ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

Video Biyoinformatik İnsan Embriyonik Kök Hücre Colony Büyüme Analizi

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Embriyonik Kök Hücreler farklılaşma oligodendrosit Öncüleri

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

Kemirgenler itibaren İlköğretim Yetişkin Fibroblast Kültürleri kurulması

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

Fate Mapping of Human Embryonic Stem Cells by Teratoma Formation

Teratom Oluşumu İnsan Embriyonik Kök Hücre Kader Haritalama

Human embryonic stem cells (hESCs) have an unlimited capacity for self-renewal, and the ability to differentiate into cells derived from all three ...