Name: isolation of immune cells from primary tumors
Uploaded: 2012-06-16T14:00:00
Description: Read this Scientific Article Protocol about Isolation of Immune Cells from Primary Tumors at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر الدكتور سكوت دورهام لإعادة النظر في مخطوطة والفيديو. ويدعم هذا العمل في جزء من برنامج البحوث جماعية من المعاهد الوطنية للصحة، NCI.

<ol>
	<li>Shurin, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratumoral+cytokines/chemokines/growth+factors+and+tumor+infiltrating+dendritic+cells:+friends+or+enemies.">Intratumoral cytokines/chemokines/growth factors and tumor infiltrating dendritic cells: friends or enemies.</a> Cancer Metastasis Rev. 25, 333-356 (2006).</li><li>Lewis, C. E., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+role+of+macrophages+in+different+tumor+microenvironments.">Distinct role of macrophages in different tumor microenvironments.</a> Cancer Res. 66, 605-612 (2006).</li><li>Anderson, M. J., Shafer-Weaver, K., Greenberg, N. M., Hurwitz, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerization+of+tumor-specific+T+cells+despite+efficient+initial+priming+in+a+primary+murine+model+of+prostate+cancer.">Tolerization of tumor-specific T cells despite efficient initial priming in a primary murine model of prostate cancer.</a> J. Immunol. 178, 1268-1276 (2007).</li><li>Ganss, R., Hanahan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+microenvironment+can+restrict+the+effectiveness+of+activated+antitumor+lymphocytes.">Tumor microenvironment can restrict the effectiveness of activated antitumor lymphocytes.</a> Cancer Res. 58, 4673-4681 (1998).</li><li>Shafer-Weaver, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunity+to+murine+prostatic+tumors:+continuous+provision+of+T-cell+help+prevents+CD8+T-cell+tolerance+and+activates+tumor-infiltrating+dendritic+cells.">Immunity to murine prostatic tumors: continuous provision of T-cell help prevents CD8 T-cell tolerance and activates tumor-infiltrating dendritic cells.</a> Cancer Research. 69, 6256-6264 (2009).</li><li>Watkins, S. K., Zhu, Z., Riboldi, E., Shafer-Weaver, K. A., Stagliano, K. E. R., Sklavos, M. M., Ambs, S., Yagita, H., Hurwitz, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxo3a+programs+tumor+associated+dendritic+cells+to+become+tolerogenic+in+Human+and+Murine+Prostate+Cancer.">Foxo3a programs tumor associated dendritic cells to become tolerogenic in Human and Murine Prostate Cancer.</a> Journal of Clinical Investigation. 121, (2011).</li><li>Shafer-Weaver, K. A., Hurwitz, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-Specific+CD8++T+Cells+Infiltrating+Prostatic+Tumors+are+Induced+to+Become+Suppressor+Cells.">Tumor-Specific CD8+ T Cells Infiltrating Prostatic Tumors are Induced to Become Suppressor Cells.</a> , (2009).</li><li>Singh, V., Ji, Q., Feigenbaum, L., Leighty, R. M., Hurwitz, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanoma+progression+despite+infiltration+by+in+vivo-primed+TRP-2-specific+T+cells.">Melanoma progression despite infiltration by in vivo-primed TRP-2-specific T cells.</a> J. Immunother. 32, 129-139 (2009).</li><li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+CD4++T+cells+from+Mouse+Lymph+Nodes+Using+Miltenyi+MACS+Purification.">Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification.</a> J. Vis. Exp. (9), e409 (2007).</li><li>Hurwitz, A. A., Foster, B. A., Allison, J. P., Greenberg, N. M., Kwon, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TRAMP+mouse+as+a+model+for+prostate+cancer.">The TRAMP mouse as a model for prostate cancer.</a> Curr. Protoc. Immunol. Chapter 20, (2001).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم الإفصاحات ذات الصلة.

يمكن تعديل هذا البروتوكول، على أساس حجم ومصدر للورم (تحت الجلد، ورم عفوية، أو الأورام مثلي). للحصول على أكبر الأورام، فمن المستحسن أن زيادة كمية العازلة التفكك، عازلة أجهزة ماكينتوش، وعدد من يغسل. يمكن للالود للخلايا معزولة تعتمد على TME التي يجري المخصب فيها. على سبيل المثال، في تجربتنا، وخلايا معزولة عن أورام البروستاتا عفوية تتطلب ألطف تفارق من الخلايا المعزولة من الأورام تحت الجلد القتامي B16. خلال تشريح الورم، والقضاء على الكثير كما الدهنية، والجلد، أو غيرها من الحطام التي يمكن أن تمنع تفكك الأنزيمية فعالة. فمن الأهمية بمكان لهضم تماما الورم الجماهير والحصول على تعليق خلية واحدة لضمان حسن أب وضع العلامات ومنع أعمدة من انسداد. لعزل الخلايا النخاعي، تمت زيادة كمية المصل البقري الجنين الموصى بها في المخزن المؤقت بالاعمال العزلة من 2٪ إلى 10٪ لتحسين بقاء الخلية. بل هو أيضا ESSEntial للحفاظ على جميع مخازن والخلايا الباردة في جميع أنحاء بروتوكول لمنع غير محددة ملزمة أب وانسداد العمود. في الختام، للحصول على السكان عالي التخصيب من الخلايا مستضد تقديم المستضد وورم الخلايا الليمفاوية T محددة السامة للخلايا، وقمنا بتعديل الأمثل إجراء العزلة الأجسام المضادة القائمة على الاستفادة من التكنولوجيا الحيوية Miltenyi. استخدام هذا البروتوكول، يمكن نقل السكان على حد سواء المخصب adoptively والكريات البيض الذاتية باستخدام القيمة المطلقة الموجهة ضد علامات سطح الخلية نوع على حدة. ميزة واحدة من الإجراءات المذكورة هو الحد من الحطام الورم المرحل بعد غسل واسعة وصارمة. وهذا يشمل استخدام كولاجيناز في المخزن المؤقت غسل وكذلك تحديد النقطة التي واضاف الضغط على العمود يمكن القضاء على قباقيب عمود من الخلايا السرطانية. يمكن الحصول على عدد كاف من الخلايا المناعية الأنسجة من، وخاصة في نقاء التي هي مناسبة لتحليل وظيفي، يمكن أن يكون مهمة صعبة.ومع ذلك، في تجربتنا، وبروتوكول ينتج هنا أكبر عدد من الخلايا، في أكبر النقاء، مع معظم الاتساق.

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; الكاشف</strong</td&gt;<td<strong&gt; شركة</strong</td&gt;<td<strong&gt; CATALOUGE عدد</strong</td&gt;<td<strong&gt; التعليقات</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; I كولاجيناز</td&gt;<td&gt; Gibco</td&gt;<td&gt; 17100-017</td&gt;<td&gt; استخدم عند اختيار لخلايا T</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; كولاجيناز IV</td&gt;<td&gt; Gibco</td&gt;<td&gt; 17104-019</td&gt;<td&gt; استخدم لاختيار النخاعي</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; الدناز</td&gt;<td&gt; Calbiochem</td&gt;<td&gt; 260913</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; RPMI</td&gt;<td&gt; Gibco</td&gt;<td&gt; 21870</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Dulbecco في PBS</td&gt;<td&gt; Lonza</td&gt;<td&gt; 17-5158</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; مصل بقري جنيني</td&gt;<td&gt; Lonza</td&gt;<td&gt; 14-501F</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; بالاعمال العازلة</td&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt; 2٪ FBS للخلايا T<br /&gt; 10٪ FBS لخلايا الدم النخاعي</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Thy1.1 PE</td&gt;<tdebioscience&gt;</td&gt;<td&gt; 551401</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; مكافحة PE microbeads</td&gt;<td&gt; Miltenyi التكنولوجيا الحيوية</td&gt;<td&gt; 120-000-294</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; مكافحة عموم DC microbeads</td&gt;<td&gt; Miltenyi التكنولوجيا الحيوية</td&gt;<td&gt; 120-003-183</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; مكافحة CD11b microbeads</td&gt;<td&gt; Miltenyi التكنولوجيا الحيوية</td&gt;<td&gt; 120-000-300</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; LC العمود</td&gt;<td&gt; Miltenyi التكنولوجيا الحيوية</td&gt;<td&gt; 130-042-202</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; MS العمود</td&gt;<td&gt; Miltenyi التكنولوجيا الحيوية</td&gt;<td&gt; 130-042-201</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

isolation of immune cells from primary tumors

الأورام المكروية إنشاء مناعة فريدة من نوعها (المكروية الورم، TME) حيث يتم تجنيد الكريات البيض داخل الورم بواسطة كيموكينات المختلفة والنمو 1،2 العوامل. ومع ذلك، مرة واحدة في TME، هذه الخلايا تفقد القدرة على تعزيز مناعة المضادة للورم والبدء في دعم نمو الورم وأسفل تنظيم المضادة للورم الاستجابات المناعية 3-4. وقد ركزت الدراسات على الورم المرتبطة أساسا على الكريات البيضاء خلايا معزولة عن ورم الغدد الليمفاوية أو استنزاف الطحال بسبب الصعوبات الكامنة في الحصول على ما يكفي من أعداد الخلايا والنقاء من الورم الرئيسي. مع تحديد آليات تنشيط الخلايا والاتجار من خلال الجهاز الليمفاوي من الفئران الحاملة الورم المهم، وربما تعطي نظرة إلى حركية الاستجابات المناعية للسرطان، في تجربتنا، الكريات البيض عديدة، بما في ذلك الخلايا الجذعية (DCS)، ورم في استنزاف الغدد الليمفاوية يكون النمط الظاهري مختلفة عن تلك التي تتسلل الأورام 5،6. وعلاوة على ذلك، لقد أثبتنا سابقا أن adoptively-T نقل خلايا معزولة عن ورم الغدد الليمفاوية استنزاف لا tolerized وتكون قادرة على الاستجابة لتحفيز الثانوية في المختبر على عكس خلايا T معزولة عن TME، والتي هي tolerized وغير قادرة على الانتشار أو خلوى إنتاج 7،8. ومن المثير للاهتمام، وقد أظهرنا أن تغيير المكروية الورم، مثل توفير CD4 + T الخلايا المساعدة عن طريق نقل بالتبني، ويعزز CD8 + T للحفاظ على الخلايا الموالية للالتهابات وظائف المستجيب 5. النتائج من كل دراسة من الدراسات التي سبق ذكرها تدل على أهمية قياس الاستجابات الخلوية من خلايا المناعة TME-التسلل بدلا من الخلايا التي تبقى في الهامش. لدراسة وظيفة الخلايا المناعية التي تسلل الأورام باستخدام التكنولوجيا الحيوية العزلة Miltenyi نظام 9، وقمنا بتعديل هذا الإجراء الأمثل العزلة الأجسام المضادة المستندة إلى غاية الحصول على البريدnriched السكان من الخلايا السرطانية مستضد تقديم المستضد والخلايا الليمفاوية T محددة السامة للخلايا. بروتوكول يتضمن تشريح مفصل للأنسجة البروستاتا الفئران من نموذج البروستاتا الورم عفوية (غدية المعدلة وراثيا للماوس البروستات TRAMP) 10 وتحت الجلد القتامي (B16) نموذج الورم تليها تنقية لاحقة من السكان الكريات البيض المختلفة.

Read this Scientific Article Protocol about Isolation of Immune Cells from Primary Tumors at JoVE.com

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

في هذا التقرير، ونحن تصف بروتوكول لعزل السكان عالي النقاء من الكريات البيض التي تتسلل الأورام. ويتم تكييف هذا البروتوكول من بروتوكول للتكنولوجيا الحيوية لتعزيز الغلة Miltenyi والنقاء لعزل الخلايا من أنسجة الورم المعقدة.

عزل الخلايا المناعية من الأورام الأولية

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Research

JoVE Journal

Biology

Isolation of Primary Mouse Trophoblast Cells and Trophoblast Invasion Assay

عزل خلايا الأرومة الغاذية الابتدائية ماوس والأرومة الغاذية الفحص الغزو

The placenta is responsible for the transport of nutrients, gasses and growth factors to the fetus, as well as the elimination of wastes.  
Thus, defects ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

العزلة والثقافة الأساسي في الخلايا الكبدية الجرذ

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

السذاجة الكبار الخلايا الجذعية عزل من المرحلة الابتدائية الثقافات الخلايا الليفية الإنسان

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

العزلة والثقافة من الماوس الأساسي خلايا البنكرياس عنيبية

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

عزل Myofibroblasts الابتدائية من ماوس والأنسجة البشرية القولون

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

العزلة والثقافة الابتدائية من خلايا الفأر الأورطي غشائي

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation and Culture of Primary Aortic Endothelial Cells from Miniature Pigs

عزل وثقافة الخلايا البطانية الأبهرية الأولية من الخنازير المصغرة

Xenotransplantation is a promising way to resolve the shortage of human organs for patients with end-stage organ failure, and the pig is considered as a ...

Multicellular Human Alveolar Model Composed of Epithelial Cells and Primary Immune Cells for Hazard Assessment

نموذج القُزلة السنخية البشرية متعددة الخلايا يتكون من الخلايا الظهارية والخلايا المناعية الأولية لتقييم المخاطر

A human alveolar cell coculture model is described here for simulation of the alveolar epithelial tissue barrier composed of alveolar epithelial type II ...

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

عزل الخلايا العضلية الأذينية والبطينية عالية الجودة للقياسات المتزامنة لتيار الكالسيوم2+ العابر وتيار الكالسيوم من النوع L

Mouse models play a crucial role in arrhythmia research and allow studying key mechanisms of arrhythmogenesis including altered ion channel function and ...

Isolation of Human Primary Valve Cells for In vitro Disease Modeling

عزل خلايا الصمام الأولي البشري لنمذجة الأمراض في المختبر

Calcific aortic valve disease (CAVD) is present in nearly a third of the elderly population. Thickening, stiffening, and calcification of the aortic valve ...