Name: isolation of immune cells from primary tumors
Uploaded: 2012-06-16T14:00:00
Description: Read this Scientific Article Protocol about Isolation of Immune Cells from Primary Tumors at JoVE.com

Gli autori desiderano ringraziare il Dr. Scott Durham per la revisione del manoscritto e video. Questo lavoro è supportato in parte dal programma di ricerca intramurale del NIH, NCI.

1. Isolamento di cellule mieloidi da tumori della prostata TRAMP <ol><li> Tutte le procedure sono state eseguite sotto la guida di un comitato di revisione animale. Topi TRAMP sviluppano spontaneamente tumori prostatici autoctoni come risultato di un transgene (SV40) controllata dal promotore probasin 10. Qualsiasi topo maschio può essere utilizzato per questa procedura. Mentre tumori TRAMP può essere raccolto a qualsiasi età, va notato che TRAMP tumori prostatici rimangono generalmente piccolo fino raggiungere i topi età superiore a 20 settimane. Euthanize topi CO 2 asfissia. Rimuovere il tratto urogenitale (UGT), tagliando aperta la cavità peritoneale e tirando indietro il tessuto adiposo. Il tessuto adiposo è spumeggiante, tessuto scintillante cercando. </li><li> Individuare la vescica, si trova direttamente tra le due grandi bianchi, vescicole seminali. Trattenere la vescica con una pinza. Mantenere chiuse le forbici, appianare tessuto adiposo e individuare l&#39;uretra. Ridurre il urethra più vicino possibile al cingolo pelvico possibile e recidere i vasi deferenti. Mentre il taglio verso il basso, contemporaneamente tirare verso l&#39;alto la vescica. Questo rilascerà il UGT intero che può ora essere micro-dissezione per ottenere ciascuno dei lobi della prostata. </li><li> Posizionare la UGT in PBS temperatura ambiente. Utilizzare un microscopio da dissezione per visualizzare la UGT e sgombrare il campo da ogni eccesso di tessuto adiposo. Utilizzando pinze, tenere su l&#39;uretra e raccogliere i lobi ventrali, laterale e anteriore della prostata. Posizionare il tessuto in PBS mentre si raccolgono il resto dei lobi. </li><li> Rimuovere le vescicole seminali e scartare. </li><li> Girare il restante tessuto 180 °. Raccogliere la ghiandola della prostata ampollare e lobi dorsali. </li><li> Utilizzando pinze, prendere in giro a parte il tessuto prostatico e posizionarlo nella digestione (dissociazione) buffer. </li><li> Posto tessuto tumorale in 1 ml di tampone di dissociazione (100 U / ml Collagenasi tipo IV e 100 pg / ml DNasi in RPMI + 10% FBS). Ogni tumore può requira uniche condizioni di dissociazione, per TRAMP tumori prostatici, usare 1 ml e per B16 tumori, utilizzare 5 ml (vedi sotto). Nota: il grado di collagenasi (I-IV) dipenderà dalla popolazione di cellule ad essere isolata; isolamento cellulare mieloide è migliore con tipo IV, mentre la resa è superiore utilizzando linfociti di tipo I. </li><li> Tubo posto in incubatore a 37 ° C per 30 min. </li><li> Pipettare su e giù con una pipetta da 1 ml per ottenere una sospensione che scorre facilmente singola cella. </li><li> Filtrare sospensione filtro 70 micron e lavare 3x con separazione tampone MAC supplementato con 10% FBS per isolamento delle cellule mieloidi. </li><li> Centrifugare sospensione cellulare a 400 xg per 10 min. Risciacquare il pellet con 10 ml di tampone MAC e centrifugare di nuovo con le stesse impostazioni. </li><li> Risospendere il pellet di cellule in 100 microlitri di buffer MAC. Successivamente, aggiungere 1 pg anti-CD16/32 anticorpo (Ab) per 10 8 celle (200 pl 2.4.G2 ibridoma supernatante di coltura) e incubare a temperatura ambiente per 10 min. Nota: tegli quantità di γ-FcR blocco anticorpo (Ab) da aggiungere può variare a seconda della frequenza / numero di FcR-y + cellule del tessuto e il volume della sospensione cellulare, pertanto, questo passo può richiedere di ottimizzazione. </li><li> Aggiungere 100 ml di &quot;Pan-DC&quot; o 10 microlitri di anti-CD11b, anti-CD11c o anti-PDCA-1 microsfere per 10 8 cellule totali, a seconda della popolazione cellulare desiderato. Nota: la quantità di microsfere richieste può variare a seconda della frequenza / numero di cellule della popolazione desiderata nel tessuto, pertanto, questo passo può richiedere di ottimizzazione. </li><li> Mescolare bene con delicatezza sfogliando tubo (Do Not Vortex) e incubare per 15 min a 4-8 ° C, al riparo dalla luce. Non incubare in ghiaccio. </li><li> Lavare le cellule aggiungendo 10 ml di tampone MAC. Centrifugare a 400 xg per 10 min. </li><li> Eliminare completamente il surnatante e risospendere le cellule in 500 microlitri di buffer di MAC. Sospensioni di cellule tumorali fluire meglio attraverso le colonne LC. (Altroscelte: MS, LS, LD). </li><li> Applicare una colonna fresco al separatore magnete. Prime la colonna risciacquando con una quantità appropriata di buffer di MAC per la colonna selezionato: per LC e colonne MS usare 500 microlitri. Per LS o LD colonne utilizzare 1 ml. Dopo innesco della colonna, applicare sospensione cellulare sulla sommità della colonna. Utilizzare una colonna per ogni x 1 10 8 celle. </li><li> Raccogliere cellule non marcate (pass-through) e lavare la colonna di un minimo di tre (fino a cinque) volte con 500 pl di volume per un totale di 1,5-2,5 ml di fluido per il lavaggio. Eseguire la fase di lavaggio 1 con l&#39;aggiunta di tampone MAC alla colonna, è importante mantenere il flusso colonna. Non appena la colonna gocciola l&#39;ultima goccia, aggiungere più tampone. Non lasciate colonna senza flusso o farlo girare a secco (questo non può essere sottovalutata, l&#39;essiccazione della colonna può rovinare la purezza e portare a una significativa perdita di vitalità cellulare.). Per la fase di lavaggio 2, lavare la colonna con mix dissociazione buffer (contenente Collagenasi + DNase come dedescritto al punto 1.7), questo serve come un passo &quot;più dura&quot; wash per scovare i residui appiccicosi dalle cellule tumorali morte o morenti. Eseguire la fase di lavaggio 3 con buffer di MAC, se il flusso attraverso non sembra del tutto chiaro dopo la fase di lavaggio, 3, continuano a lavare per 2 operazioni di lavaggio supplementari con MAC buffer (per un totale di 5 lavaggi). Per grandi tumori sottocutanei (ad esempio, melanoma B16), durante l&#39;ultimo lavaggio, applicare una leggera pressione con un dito guantato alla sommità della colonna, questo rilascia detriti extra per un detergente, purificato popolazione di cellule. Questa fase non è richiesta per tumori dei tessuti solidi come prostata, invece, utilizza operazioni di lavaggio supplementari, lavando un totale di almeno 5-6 volte. </li><li> Rimuovere colonna dal separatore magnetico e posizionarlo su un tubo di raccolta adeguato. Pipettare 2 ml di tampone sulla colonna. Raccogliere le cellule marcate magneticamente saldamente applicando lo stantuffo fornito con la colonna. </li><li> Contare numero di cellulare e confermare la purezza per la popolazione cella selezionatacitometria a flusso. Per l&#39;identificazione delle popolazioni DC, marcatori suggeriti includono CD45, CD11c, PDCA-1, B220 e CD11b. Marcatori macrofagi suggerite includono CD45, CD11b, F4-80, e Ly6C. </li></ol> 2. Isolamento di Adoptively trasferiti da cellule T sottocutaneo B16 melanoma Questo protocollo funziona meglio con i tumori che sono di 250 mm 2 o inferiore (stimata misurando diametri bisettrici del tumore). <ol><li> B16 cellule tumorali sono state iniettate per via sottocutanea in topi C57BL / 6 e misurazioni del tumore sono stati registrati ogni 2 giorni 8. I topi con tumori di circa 250 mm 2 eutanasia sono da CO 2 asfissia. Uso autoclave strumenti chirurgici sciacquati con 70% EtOH, tagliato in piccoli tumori (&lt;3 mm) e incubare pezzi in 5 ml di soluzione di dissociazione (terreno RPMI supplementato con 5% FBS, collagenasi tipo I (200 U / ml) e DNasi I (100 pg / ml)) per 30 min a 37 ° C, Pipettaggio (usando un 1.000 μl punta della pipetta) e vortex ogni 10 minuti durante l&#39;incubazione. Se le cellule mieloidi verrà successivamente isolato, sostituire il 5% FBS e collagenasi di tipo I con 10% FBS e collagenasi di tipo IV (200 U / ml), rispettivamente. </li><li> Dopo l&#39;incubazione, sospensione di cellule passano attraverso un filtro 70 micron delle cellule e lavare due volte con 10 ml MAC buffer (preparata secondo le istruzioni del fabbricante, Miltenyi Biotech). Opzionale - per tumori molto grandi (&gt; 300 mm 2), cellule infiammatorie possono essere pre-arricchito con centrifugazione in gradiente di densità (Percoll o Ficoll). </li><li> Aspirare il surnatante lavaggio e aggiungere 1 mg anti-CD16/32 antibody/10 8 celle (200 microlitri di supernatante clone cultura 2.4.G2) e incubare a temperatura ambiente per 10 min. </li><li> Senza lavare, aggiungere 1 mg Thy1.1 anticorpo anti-PE per 10 a 8 celle, mescolare bene con delicatezza sfogliando il tubo ed incubare per 30 minuti in ghiaccio, al riparo dalla luce. </li><li> Lavare le cellule per rimuovere legato prianticorpo mary aggiungendo 10 ml tampone MAC e centrifugare a 400 xg per 5 minuti. </li><li> Aspirare il surnatante e aggiungere 20 microlitri anti-PE microsfere (Miltenyi Biotech) per 10 7 cellule totali, secondo le istruzioni del produttore. </li><li> Mescolare bene con delicatezza sfogliando tubo (non vortex) e incubare a 4 ° C (non usare il ghiaccio) per 15 minuti, al riparo dalla luce. Attenzione: vortex può diminuire l&#39;integrità delle perline. </li><li> Lavare le cellule aggiungendo 10 ml di tampone MAC e centrifugare a 400 xg per 5 minuti. </li><li> Aspirare cellule surnatante, e risospendere in 500 microlitri di buffer MAC. Per i tumori di maggiori dimensioni (&gt; 300 mm 2), utilizzare 1 ml di tampone. </li><li> Mettere una LC (a grandi cellule) della colonna nel separatore di campo magnetico. Sospensioni di cellule tumorali fluire meglio attraverso queste colonne. Lavare la colonna con 500 microlitri di buffer MAC per innescare la colonna. La maggior parte dei tumori vengono trasmessi attraverso la LS e colonne LD, ma richiedono un ulteriore digestione e meccanica disruption per raggiungere il livello adeguato di sospensione di singola cellula. Lavare la colonna con 1 ml di tampone MAC per innescare la colonna. </li><li> Applicare sospensione cellulare sulla colonna e permettono di scorrere completamente attraverso (senza lasciare la corsa colonna a secco). Successivamente, lavare con 500 microlitri di buffer MAC, e ripetere il lavaggio 3x. Solo aggiungere nuovo buffer quando il serbatoio colonna è vuota, ma non lasciare che la colonna di stare in piedi senza flusso. Questo farà sì che l&#39;intasamento e la purezza diminuita. </li><li> Questo è un passo fondamentale per i grandi tumori sottocutanei: Dopo l&#39;ultimo lavaggio, con una punta di dito guantato, applicare una leggera pressione nella parte superiore della colonna, mentre ancora il separatore magnetico. Questo rilascia detriti in più per una popolazione più puramente arricchito. Successivamente, lavare la colonna 1 volta di più con 500 microlitri di buffer MAC. </li><li> Rimuovere colonna dal separatore e collocarlo in una provetta pulita da 15 ml, aggiungere 2 ml di buffer di MAC sulla colonna. Lavare il magneticamente marcato cells di spingendo lo stantuffo nella colonna. </li><li> Centrifugare la frazione eluita a 400 xg per 5 min. Purezza in questa fase è in genere tra 75-80%. Per ottenere la purezza&gt; 90%, ripetere la procedura di separazione magnetica come descritto nel passaggio 1,10-1,12 con una nuova colonna MS. La colonna MS è più piccolo e più compatto, la sospensione verrà eseguito più lentamente attraverso la colonna, ma darà i numeri più alti e la purezza della cellula di interesse. </li><li> Contare il numero di cellule per ulteriori esperimenti e verificare la purezza attraverso l&#39;analisi di citometria di flusso. Per l&#39;isolamento di cellule T adoptively trasferiti come quelli descritti in questo protocollo, i marcatori alleliche per l&#39;identificazione sono CD45 e Thy1.1 (cellule trasferiti) e Thy1.2 (host cellule T). </li></ol> 3. Risultati rappresentativi La resa di una particolare popolazione di cellule (cioè, macrofagi, cellule T DC, ecc) varia a seconda delle dimensioni del tumore e trattamenti che erano amministratoremente registrato durante la crescita del tumore. Una prostata da un trattato del mouse 14-16 settimane di età TRAMP dovrebbe produrre tra i 5 8x10-1x10 6 CD11c + / PDCA-1 + (DC), le cellule al 90-95% di purezza o 1x10 6-1.5x10 6 F4/80 + / CD11b + (macrofagi) a 80-90% di purezza da 300 mg di tessuto seguendo il protocollo di isolamento sopra, come mostrato nella Figura 1. Il numero di ciascuna di queste cellule aumenta leggermente al momento del trasferimento adottivo di antigene tumore-cellule T specifiche. Scarsa purezza è solitamente un risultato di lavaggio insufficiente, consentendo la colonna asciugare (che può provocare la ritenzione detriti tumore nella colonna), o insufficiente recettore Fc blocco. Analogamente, le cellule totali isolate da B16 tumori anche variare a seconda delle dimensioni del tumore al momento della raccolta del tessuto e trasferimento adottivo di cellule T (trasferimento di 5x10 6) con o senza vaccino DC (trasferimento di 1x10 5). Pochissimi antigene-spespecifici cellule T infiltrarsi meno un antigene tumore-pulsato vaccino DC è dato un giorno dopo il trasferimento delle cellule T. Se un vaccino DC viene somministrato a un topo recante un piccolo, palpabile (&lt;50 mm 2) tumorale, una resa di circa 3x10 5 Thy1.1 + cellule T, con una purezza del 80-85%, sarebbe considerato un &quot;buon &quot;raccolto, come mostrato in Figura 2A. Tuttavia, se i tumori più grandi sono raccolte, resa totale e la purezza sarà ridotto. I macrofagi (F4/80 + / CD11b +) sono di solito una piccola percentuale delle cellule totali in B16 tumori. Figura 2B mostra che utilizzando CD11b, da un tumore che è di 250 mm 2, rese circa 1x10 6 macrofagi a 90-95% di purezza . Ulteriormente, figura 2B mostra che la popolazione DC in B16 tumori sono eterogenei. A differenza dei tumori della prostata, due sottopopolazioni: CD11c + / PDCA-1 + (plasmacitoidi DC) e CD11c+ / PDCA-1 - (convenzionale DC) può essere ottenuto da B16 melanoma. Si stima che circa 6 pDC 2x10 e 4x10 6 CDC sono attesi da 250 mm 2 B16 tumori a 80-90% di purezza. Purezza Ridotto è di solito un risultato di non cancellare le cellule tumorali dalla colonna. Fase 2,12 è un punto critico per rimuovere il piccolo ciuffo di cellule di melanoma che persiste alla base della colonna. Dopo questo passaggio migliora l&#39;efficacia delle fasi di lavaggio e si traduce in una migliore purezza. <img src="/files/ftp_upload/3952/3952fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. DC (CD11c + / PDCA-1 +) e macrofagi (F4/80 + / CD11b +) sono stati isolati da un tumore alla prostata TRAMP. Valori di dot plot rappresentano la percentuale di cellule di interesse pre-o post-purificazione. <img src="/files/ftp_upload/3952/3952fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. (A) Adoptively trasferito Thy1.1 + / CD8 + e cellule T (B) tra le cellule mieloidi CD11c + / PDCA-1 + plasmacitoidi DC, CD11c + / PDCA-1 - DC convenzionali e F4/80 + CD11b + / macrofagi sono stati isolati da via sottocutanea B16 del tumore da melanoma Thy1.2 topi +. Valori di dot plot rappresentano la percentuale di cellule di interesse pre-o post-purificazione.

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Gli autori non hanno i dati pertinenti.

Questo protocollo può essere modificato, in base alle dimensioni e sorgente del tumore (sottocutanea, tumore spontanea, o tumori ortotopici). Per tumori più grandi, si raccomanda di aumentare la quantità di tampone di dissociazione, tampone MAC, e il numero di lavaggi. La cordialità delle cellule isolate possono dipendere dalla TME dal quale vengono arricchiti. Per esempio, nella nostra esperienza, le cellule isolate da tumore della prostata richiedono spontanei dolce dissociazione rispetto alle cellule isolate da melanoma sottocutaneo B16. Durante dissezione del tumore, eliminare il più adiposo, pelle, o altri residui che possono impedire efficace dissociazione enzimatica. È fondamentale digerire completamente masse tumorali e ottenere una sospensione di cellule singole per assicurare una corretta etichettatura Ab e per impedire colonne di intasamento. Per l&#39;isolamento delle cellule mieloidi, la quantità di siero fetale bovino raccomandato nel buffer di isolamento MAC è stato aumentato dal 2% al 10% per migliorare la vitalità cellulare. È inoltre Essential per mantenere tutti i buffer e le celle frigorifere in tutto il protocollo per prevenire le non-specifici Ab legare e di intasamento della colonna. In conclusione, per ottenere popolazioni altamente arricchito di cellule che presentano antigeni tumorali e antigene-specifici linfociti T citotossici, abbiamo modificato e ottimizzato basata su anticorpo procedura di isolamento utilizzando la tecnologia Miltenyi Biotech. Utilizzando questo protocollo, entrambe le popolazioni adoptively trasferiti e endogena dei leucociti può essere arricchito con Abs nei confronti di cellule di tipo-specifici marcatori di superficie. Un vantaggio dei procedimenti descritti è la riduzione dei detriti tumore riporto dopo lavaggio estensivo e rigoroso. Ciò include l&#39;uso di collagenasi nel tampone di lavaggio e la identificazione di un punto in cui la pressione aggiunto alla colonna può eliminare zoccoli colonna dalle cellule tumorali. Ottenere un numero sufficiente di cellule immunitarie da tessuti, in particolare a una purezza che è adatto per l&#39;analisi funzionale, può essere un compito difficile.Tuttavia, nella nostra esperienza, il protocollo produce qui il maggior numero di cellule, a maggior purezza, con la maggior coerenza.

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td<strong&gt; Reagente</strong</td&gt;<td<strong&gt; Azienda</strong</td&gt;<td<strong&gt; CATALOGO numero</strong</td&gt;<td<strong&gt; Commenti</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; I Collagenasi</td&gt;<td&gt; Gibco</td&gt;<td&gt; 17100-017</td&gt;<td&gt; Usa al momento della selezione per le cellule T</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Collagenasi IV</td&gt;<td&gt; Gibco</td&gt;<td&gt; 17104-019</td&gt;<td&gt; Per la scelta della leucemia mieloide</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; DNasi</td&gt;<td&gt; Calbiochem</td&gt;<td&gt; 260.913</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; RPMI</td&gt;<td&gt; Gibco</td&gt;<td&gt; 21.870</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Dulbecco PBS</td&gt;<td&gt; Lonza</td&gt;<td&gt; 17-5158</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Siero fetale bovino</td&gt;<td&gt; Lonza</td&gt;<td&gt; 14-501F</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; MAC Buffer</td&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt; 2% FBS per le cellule T<br /&gt; 10% FBS per cellule mieloidi</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Thy1.1 PE</td&gt;<td&gt; EBioscience</td&gt;<td&gt; 551.401</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Anti-PE microsfere</td&gt;<td&gt; Miltenyi Biotech</td&gt;<td&gt; 120-000-294</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Anti-Pan DC microsfere</td&gt;<td&gt; Miltenyi Biotech</td&gt;<td&gt; 120-003-183</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Anti-CD11b microsfere</td&gt;<td&gt; Miltenyi Biotech</td&gt;<td&gt; 120-000-300</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; LC colonna</td&gt;<td&gt; Miltenyi Biotech</td&gt;<td&gt; 130-042-202</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; MS colonna</td&gt;<td&gt; Miltenyi Biotech</td&gt;<td&gt; 130-042-201</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table

isolation of immune cells from primary tumors

I tumori di creare un microambiente unico immunosoppressiva (microambiente tumorale, TME), per cui i leucociti sono reclutati nel tumore da varie chemochine e fattori di crescita 1,2. Tuttavia, una volta in TME, queste cellule perdono la capacità di promuovere l&#39;immunità anti-tumorale e cominciano a sostenere la crescita del tumore e down-regolare le risposte immunitarie anti-tumorali 3-4. Studi sul tumore-associati leucociti sono principalmente focalizzata sulle cellule isolate da tumore-drenante milza o linfonodi a causa delle difficoltà di ottenere il numero di cellule e purezza sufficiente dal tumore primario. Mentre l&#39;identificazione dei meccanismi di attivazione delle cellule e del traffico attraverso il sistema linfatico di topi affetti da tumore è importante e può dare qualche idea per la cinetica della risposta immunitaria al tumore, nella nostra esperienza, leucociti, tra cui le cellule dendritiche (DC), nel tumore drenante linfonodi hanno un fenotipo differente da quelli che si infiltrano tumori 5,6. Inoltre, abbiamo precedentemente dimostrato che adoptively-trasferiti cellule T isolate da tumore-linfonodi drenanti non sono tolleranti e sono in grado di rispondere alla stimolazione in vitro secondario a differenza delle cellule T isolate dalla TME, che sono tolleranti e incapaci di proliferazione o citochina produzione di 7,8. È interessante notare, abbiamo dimostrato che cambiando il microambiente tumorale, come fornire cellule CD4 + T helper tramite trasferimento adottivo, promuove cellule T CD8 + a mantenere le funzioni effettrici pro-infiammatorie 5. I risultati di ciascuno degli studi sopra menzionati dimostrano l&#39;importanza di misurare le risposte cellulari da TME infiltrato da cellule immunitarie rispetto alle cellule che rimangono nella periferia. Per studiare la funzione delle cellule immunitarie che si infiltrano i tumori utilizzando l&#39;isolamento Miltenyi Biotech System 9, abbiamo modificato e ottimizzato questo anticorpo-based procedura di isolamento per ottenere molto enriched popolazioni di cellule che presentano antigeni tumorali e antigene-specifici linfociti T citotossici. Il protocollo include una dettagliata dissezione di tessuto prostatico di un modello murino spontanea del tumore della prostata (adenocarcinoma transgenico del mouse Prostate-TRAMP) 10 e di un melanoma sottocutaneo (B16) modello di tumore seguita da successiva purificazione delle varie popolazioni leucocitarie.

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Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

In questo rapporto, descriviamo un protocollo per isolare popolazioni altamente purificate di leucociti che infiltrano i tumori. Questo protocollo è stato adattato dal Miltenyi Biotech protocollo per migliorare la resa e la purezza per isolare cellule dal tessuto tumorale complessa.

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Biologia

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Isolamento e la coltura primaria di cellule epatiche di ratto

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Na&iuml;ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve Adult Stem Cells Isolation from Primary Human Fibroblast Cultures

Naïve Adult Stem Cells isolamento da colture primarie di fibroblasti umani

Over the last decade, several adult stem cell  populations have been identified in human skin 1-4.  The isolation of multipotent adult dermal precursors ...

Isolation and Culture of Mouse Primary Pancreatic Acinar Cells

Isolamento e Cultura del mouse principale acinose pancreatiche Cellule

This protocol permits rapid isolation (in less than 1 hr) of murine pancreatic acini, making it possible to maintain them in culture for more than one ...

Isolation of Primary Myofibroblasts from Mouse and Human Colon Tissue

Isolamento di primaria miofibroblasti da mouse e Colon Tessuto umano

The myofibroblast is  a stromal cell of the gastrointestinal (GI) tract that has been gaining  considerable attention for its critical role in many GI ...

Isolation and Primary Culture of Mouse Aortic Endothelial Cells

Isolamento e colture primarie di cellule di topo aortica endoteliali

The vascular endothelium is essential to normal vascular homeostasis. Its dysfunction participates in various cardiovascular disorders. The mouse is an ...

Isolation and Culture of Primary Aortic Endothelial Cells from Miniature Pigs

Isolamento e cultura delle cellule endoteliali aortiche primarie dai suini in miniatura

Xenotransplantation is a promising way to resolve the shortage of human organs for patients with end-stage organ failure, and the pig is considered as a ...

Multicellular Human Alveolar Model Composed of Epithelial Cells and Primary Immune Cells for Hazard Assessment

Modello alveolare umano multicellulare composto da cellule epiteliali e cellule immunitarie primarie per la valutazione del pericolo

A human alveolar cell coculture model is described here for simulation of the alveolar epithelial tissue barrier composed of alveolar epithelial type II ...

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolation of High Quality Murine Atrial and Ventricular Myocytes for Simultaneous Measurements of Ca2+ Transients and L-Type Calcium Current

Isolamento di miociti atriali e ventricolari murini di alta qualità per misurazioni simultanee di transitori Ca2+ e corrente di calcio di tipo L

Mouse models play a crucial role in arrhythmia research and allow studying key mechanisms of arrhythmogenesis including altered ion channel function and ...

Isolation of Human Primary Valve Cells for In vitro Disease Modeling

Isolamento di cellule valvolari primarie umane per la modellazione di malattie in vitro

Calcific aortic valve disease (CAVD) is present in nearly a third of the elderly population. Thickening, stiffening, and calcification of the aortic valve ...