Name: engineering a bilayered hydrogel to control asc differentiation
Uploaded: 2012-05-25T13:00:00
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SN wurde von einem Postdoctoral Fellowship Grant von der Pittsburgh Tissue Engineering Initiative unterstützt. DOZ wird durch einen Zuschuss aus der Genfer Stiftung unterstützt.

1. Isolieren von aus Fettgewebe gewonnenen Stammzellen (ASC) 1, 5 Hinweis: Alle Verfahren wurden bei Raumtemperatur durchgeführt, wenn nichts anderes angegeben ist. <ol><li> Isolieren Ratte perirenalen und Nebenhoden Fettgewebe und wäscht mit sterilen gepufferten Salzlösung Hanks-Lösung (HBSS) mit 1% fötalem Rinderserum (FBS), wie zuvor beschrieben 5. Diese Studie wurde in Übereinstimmung mit dem Tierschutzgesetz, die Umsetzung Tierschutzvorschr...

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	<li>Natesan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bilayer+construct+controls+adipose-derived+stem+cell+differentiation+into+endothelial+cells+and+pericytes+without+growth+factor+stimulation.">A bilayer construct controls adipose-derived stem cell differentiation into endothelial cells and pericytes without growth factor stimulation.</a> Tissue Eng. Part A. 17, 941-953 (2011).</li><li>Nuttelman, C. R., Tripodi, M. C., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+hydrogel+niches+that+promote+hMSC+viability.">Synthetic hydrogel niches that promote hMSC viability.</a> Matrix Biol. 24, 208-218 (2005).</li><li>Benoit, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-linked+kinase+production+prevents+anoikis+in+human+mesenchymal+stem+cells.">Integrin-linked kinase production prevents anoikis in human mesenchymal stem cells.</a> J Biomed Mater Res A. 81, 259-268 (2007).</li><li>Willerth, S. M., Sakiyama-Elbert, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+stem+cells+and+biomaterial+scaffolds+for+constructing+tissues+and+cell+delivery.">Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues and cell delivery.</a> , (2008).</li><li>Natesan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cell+delivery+into+collagen+gels+using+chitosan+microspheres.">Adipose-derived stem cell delivery into collagen gels using chitosan microspheres.</a> Tissue Eng. Part A. 16, 1369-1384 (2010).</li><li>Bubnis, W. A., Ofner, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+determination+of+epsilon-amino+groups+in+soluble+and+poorly+soluble+proteinaceous+materials+by+a+spectrophotometric+method+using+trinitrobenzenesulfonic+acid.">The determination of epsilon-amino groups in soluble and poorly soluble proteinaceous materials by a spectrophotometric method using trinitrobenzenesulfonic acid.</a> Anal. Biochem. 207, 129-133 (1992).</li><li>Zhang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+PEGylated+fibrin+patch+for+mesenchymal+stem+cell+delivery.">A PEGylated fibrin patch for mesenchymal stem cell delivery.</a> Tissue Eng. 12, 9-19 (2006).</li><li>Bornstein, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituted+rattail+collagen+used+as+substrate+for+tissue+cultures+on+coverslips+in+Maximow+slides+and+roller+tubes.">Reconstituted rattail collagen used as substrate for tissue cultures on coverslips in Maximow slides and roller tubes.</a> Lab Invest. 7, 134-137 (1958).</li><li>Zhang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+differentiation+of+bone+marrow+stem+cells+is+directed+by+a+tunable+three-dimensional+matrix.">Vascular differentiation of bone marrow stem cells is directed by a tunable three-dimensional matrix.</a> Acta Biomater. 6, 3395-3403 (2010).</li><li>Rochon, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+human+epithelial+cells+regulate+the+size+and+morphology+of+tissue-engineered+capillaries.">Normal human epithelial cells regulate the size and morphology of tissue-engineered capillaries.</a> Tissue Eng. Part A. 16, 1457-1468 (2010).</li><li>Liu, H., Collins, S. F., Suggs, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+for+expansion+and+differentiation+of+mouse+embryonic+stem+cells.">Three-dimensional culture for expansion and differentiation of mouse embryonic stem cells.</a> Biomaterials. 27, 6004-6014 (2006).</li></ol>

ASC werden aufgrund ihrer einfachen der Isolierung und die Fähigkeit, gegenüber verschiedenen Zelltypen differenzieren bekannt. Mit den Techniken, die in diesem Manuskript beschrieben, sind wir in der Lage, die Plastizität der ASC, indem diese Zellen auf mehrere Biomatrices gleichzeitig zu nutzen. Wie Zellen wandern weg von ihren CSM Basis und geben sie umgebenden extrazellulären Umgebung, nehmen die Zellen Cue vom Gerüst und kann entweder zu halten &quot;Stammzell-Seins&quot; (Kollagen) oder induziert in Richtung ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenz / Ausrüstung </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) </td><td> Gibco </td><td> 14175 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Fötalem Rinderserum </td><td> Hyclone </td><td> SH30071.03 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Kollagenase vom Typ II </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C6685 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> 70-um Nylonmaschenfilter </td><td> BD Biosciences </td><td> 352350 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> 100-um Nylon-Mesh-Filter </td><td> BD Biosciences </td><td> 352360 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> MesenPRO Growth Medium-System </td><td> Invitrogen </td><td> 12746-012 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> L-Glutamin </td&gt; <td> Gibco </td><td> 25030 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> CaCl 2 · 2H 2 O </td><td> Sigma </td><td> C8106 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> T75 Zellkulturflasche </td><td> BD Biosciences </td><td> 137787 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Chitosan </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 448869 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Essigsäure </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 320099 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> N-Octanol </td><td> Acros Organics </td><td> 150630025 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Sorbitan-Mono-Oleat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S6760 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Kaliumhydroxid </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1767 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Aceton </td><td> Fisher Scientific </td><td> L-4859 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Ethanol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 270741 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Trinitro Benzolsulfonsäure </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P2297 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Salzsäure </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 320331 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Ethyl Ether </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 472-484 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> 8-um Gewebekulturplatte Einsätze </td><td> BD Biosciences </td><td> 353097 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> 1,5-ml Reaktionsgefäße </td><td> Fischer </td><td> 05-408-129 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> MTT-Reagenz </td><td> Invitrogen </td><td> M6494 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Dimethylsulfoxid </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D8779 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Qtracker Zelle Labeling Kit (QTracker 655) </td><td> Molecular Probes </td><td> Q2502PMP </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Typ 1-Kollagen </td><td> Travigen </td><td> 3447-020-01 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Natriumhydroxid </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S8045 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> 12-well-Zellkulturplatten </td><td> BD Biosciences </td><td> 353043 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Fibrinogen </td><td> Sigma </td><td> F3879 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Thrombin </td><td> Sigma </td><td> T6884 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Benztriazol Derivative von Polyethylen </td><td> Sunbio </td><td> DE-034GS </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Tris-Puffer Tablet (pH 7,6) </td><td> Sigma </td><td> T5030 </td><td> Verbrauchsmaterial </td></tr><tr><td> Zentrifugieren </td><td> Eppendorf </td><td> 5417R </td><td> Equiicklung </td></tr><tr><td> Orbitalschüttler </td><td> New Brunswick einem wissenschaftlichen </td><td> C24 </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Befeuchteten Inkubator mit Air-5% CO 2 </td><td> Thermo Scientific </td><td> Modell 370 </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Kopfrührer </td><td> IKA </td><td> Visc6000 </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Magnetrührer </td><td> Corning </td><td> PC-210 </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Vakuumexsikkator </td><td> - </td><td> - </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Particle Size Analyzer </td><td> Malvern </td><td> STP2000 Spraytec </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Wasserbad </td><td> Fisher Scientific </td><td> Isotemp210 </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Spektrophotometer </td><td> Beckman </td><td> Beckman Coulter DU 800UV/Visible Spektralphotometer </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Wirbel </td><td> Diagger </td><td> 3030A </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Mikroplatten-Reader </td><td> Molecular Devices </td><td> SpectraMax M2 </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Licht / Fluoreszenz-Mikroskop </td><td> Olymp </td><td> IX71 </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Konfokalmikroskop </td><td> Olymp </td><td> FV-500 Laser-konfokalen </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Rasterelektronenmikroskop </td><td> Carl Zeiss MicroImaging </td><td> Leo 435 VP </td><td> Ausrüstung </td></tr><tr><td> Transmissions-Elektronenmikroskop </td><td> JEOL </td><td> JEOL 1230 </td><td> Ausrüstung </td></tr></tbody></table>

engineering a bilayered hydrogel to control asc differentiation

Natürliche Polymere im Laufe der Jahre haben mehr Bedeutung wegen ihrer Biokompatibilität und Host-Fähigkeit, mit Zellen in vitro und in vivo interagieren gewonnen. Ein Forschungsgebiet, das Versprechen hält in der regenerativen Medizin ist die kombinatorische Verwendung von neuartigen Biomaterialien und Stammzellen. Eine grundlegende Strategie im Bereich des Tissue Engineering ist die Verwendung von dreidimensionalen Gerüst (zB dezellularisiert extrazellulären Matrix, Hydrogele, Mikro / Nanopartikel) zum Richten Zellfunktion. Diese Technologie wurde von der Entdeckung, dass die Zellen entwickelt ein Substrat, auf dem sie anhaften können müssen, proliferieren und drücken ihre differenzierten zelluläre Phänotyp und Funktion 2-3. In jüngerer Zeit wurde auch festgestellt, dass Zellen nicht nur diese Substrate für die Einhaltung, sondern auch interagieren und unter dem Einfluss dieser Matrixsubstrat (zB extrazelluläre Matrix, ECM) 4. Daher müssen die Zellen und Gerüsten eine gegenseitige Verbindung,dient dazu, Gewebe-Entwicklung, Organisation und ultimative Funktion zu kontrollieren. Fettgewebe gewonnene Stammzellen (ASC) sind mesenchymale, präsentieren nicht-hämatopoetischen Stammzellen im Fettgewebe, die Multi-Linie Differenzierung aufweisen können und dienen als leicht verfügbare Quelle von Zellen (dh vor der vaskulären Endothelzellen und Perizyten). Unsere Hypothese ist, dass aus Fettgewebe gewonnenen Stammzellen zu unterschiedlichen Phänotypen gleichzeitig einfach durch Co-Kultivierung ihnen in zweischichtigen Matrices 1 gerichtet werden kann. Unser Labor ist auf die dermale Wundheilung konzentriert. Zu diesem Zweck haben wir einen einzigen zusammengesetzten Matrix aus den natürlichen Biomaterialien, Fibrin, Kollagen und Chitosan, die die Eigenschaften und Funktionen eines dermo-spezifischen Wundheilung ECM-Umgebung nachahmen kann.

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Engineering a Bilayered Hydrogel to Control ASC Differentiation

Dieses Protokoll konzentriert sich auf die Nutzung der inhärenten Fähigkeit von Stammzellen zu Stichwort von der sie umgebenden extrazellulären Matrix induziert nehmen und in mehrere Phänotypen zu unterscheiden. Dieses Verfahren erweitert unser Manuskript Beschreibung und Charakterisierung eines Modells unter Verwendung einer zweischichtigen Hydrogel, von PEG-Fibrin und Kollagen zusammen, um gleichzeitig Co-differenzieren Fettgewebe gewonnene Stammzellen<sup&gt; 1</sup&gt;.

Projektierung eines zweischichtigen Hydrogel ASC Differenzierungskontrolle

Natural polymers over the years have gained more importance because of their host biocompatibility and ability to interact with cells in vitro and in ...

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