Name: engineering a bilayered hydrogel to control asc differentiation
Uploaded: 2012-05-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Engineering a Bilayered Hydrogel to Control ASC Differentiation at JoVE.com

SN נתמך על ידי מענק מלגה דוקטורים מן היוזמה הנדסת רקמות פיטסבורג. Doz נתמך על ידי מענק הוענק מטעם קרן ז&#39;נבה.

1. בידוד השומן שמקורם בתאי גזע (ASCs) 1, 5 הערה: כל הנהלים בוצעו בטמפרטורת החדר אלא אם צוין אחרת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לבודד את השומן עכברוש perirenal ו epididymal ולשטוף עם פתרון שנאגרו האנק של מלח סטר...

<ol>
	<li>Natesan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bilayer+construct+controls+adipose-derived+stem+cell+differentiation+into+endothelial+cells+and+pericytes+without+growth+factor+stimulation.">A bilayer construct controls adipose-derived stem cell differentiation into endothelial cells and pericytes without growth factor stimulation.</a> Tissue Eng. Part A. 17, 941-953 (2011).</li><li>Nuttelman, C. R., Tripodi, M. C., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+hydrogel+niches+that+promote+hMSC+viability.">Synthetic hydrogel niches that promote hMSC viability.</a> Matrix Biol. 24, 208-218 (2005).</li><li>Benoit, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-linked+kinase+production+prevents+anoikis+in+human+mesenchymal+stem+cells.">Integrin-linked kinase production prevents anoikis in human mesenchymal stem cells.</a> J Biomed Mater Res A. 81, 259-268 (2007).</li><li>Willerth, S. M., Sakiyama-Elbert, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+stem+cells+and+biomaterial+scaffolds+for+constructing+tissues+and+cell+delivery.">Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues and cell delivery.</a> , (2008).</li><li>Natesan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cell+delivery+into+collagen+gels+using+chitosan+microspheres.">Adipose-derived stem cell delivery into collagen gels using chitosan microspheres.</a> Tissue Eng. Part A. 16, 1369-1384 (2010).</li><li>Bubnis, W. A., Ofner, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+determination+of+epsilon-amino+groups+in+soluble+and+poorly+soluble+proteinaceous+materials+by+a+spectrophotometric+method+using+trinitrobenzenesulfonic+acid.">The determination of epsilon-amino groups in soluble and poorly soluble proteinaceous materials by a spectrophotometric method using trinitrobenzenesulfonic acid.</a> Anal. Biochem. 207, 129-133 (1992).</li><li>Zhang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+PEGylated+fibrin+patch+for+mesenchymal+stem+cell+delivery.">A PEGylated fibrin patch for mesenchymal stem cell delivery.</a> Tissue Eng. 12, 9-19 (2006).</li><li>Bornstein, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituted+rattail+collagen+used+as+substrate+for+tissue+cultures+on+coverslips+in+Maximow+slides+and+roller+tubes.">Reconstituted rattail collagen used as substrate for tissue cultures on coverslips in Maximow slides and roller tubes.</a> Lab Invest. 7, 134-137 (1958).</li><li>Zhang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+differentiation+of+bone+marrow+stem+cells+is+directed+by+a+tunable+three-dimensional+matrix.">Vascular differentiation of bone marrow stem cells is directed by a tunable three-dimensional matrix.</a> Acta Biomater. 6, 3395-3403 (2010).</li><li>Rochon, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+human+epithelial+cells+regulate+the+size+and+morphology+of+tissue-engineered+capillaries.">Normal human epithelial cells regulate the size and morphology of tissue-engineered capillaries.</a> Tissue Eng. Part A. 16, 1457-1468 (2010).</li><li>Liu, H., Collins, S. F., Suggs, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+for+expansion+and+differentiation+of+mouse+embryonic+stem+cells.">Three-dimensional culture for expansion and differentiation of mouse embryonic stem cells.</a> Biomaterials. 27, 6004-6014 (2006).</li></ol>

ASCs ידועים, כדי להקל על הבידוד שלהם היכולת להבדיל כלפי סוגי תאים שונים. עם הטכניקות המתוארות בכתב היד הזה, אנו יכולים לנצל את הגמישות של ASCs ידי חשיפת תאים אלה כדי biomatrices מרובים בו זמנית. כמו תאים נודדים הרחק מבסיס CSM שלהם ולהיכנס סביבתו שלהם תאיים, התאים את הרמז מן הפיגום...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> הנקס תמיסת מלח מאוזנת (HBSS) </td><td> Gibco </td><td> 14175 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> בסרום שור עוברית </td><td> Hyclone </td><td> SH30071.03 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> Collagenase Type II </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C6685 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> 70 מיקרומטר קווי ניילון מסנן </td><td> BD Biosciences </td><td> 352350 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> 100 מיקרומטר קווי ניילון מסנן </td><td> BD Biosciences </td><td> 352360 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> בינוני MesenPRO צמיחה מערכת </td><td> Invitrogen </td><td> 12746-012 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> L-גלוטמין </TD&gt; <td> Gibco </td><td> 25030 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> CaCl 2 0.2 H 2 O </td><td> סיגמא </td><td> C8106 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> T75 בתרבית רקמה Flask </td><td> BD Biosciences </td><td> 137787 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> Chitosan </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 448869 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> חומצה אצטית </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 320099 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> N-Octanol </td><td> Acros Organics </td><td> 150630025 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> Sorbitan-Mono-Oleate </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S6760 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> אשלגן הידרוקסיד </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1767 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> אצטון </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> L-4859 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> אתנול </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 270741 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> Trinitro Benzenesulfonic חומצה </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P2297 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> מימן כלורי </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 320331 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> אתיל Ether </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 472-484 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> 8-מיקרומטר בתרבית רקמה הוספת פלייט </td><td> BD Biosciences </td><td> 353097 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> 1.5-מ&quot;ל Microcentrifuge צינורות </td><td> דיג </td><td> 05-408-129 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> MTT מגיב </td><td> Invitrogen </td><td> M6494 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> דימתיל Sulfoxide </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D8779 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> תא Qtracker סימון Kit (שגשש 655) </td><td> בדיקות מולקולריות </td><td> Q2502PMP </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> הקלד 1 קולגן </td><td> Travigen </td><td> 3447-020-01 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> סודיום הידרוקסיד </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S8045 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> 12 ובכן בתרבית רקמה צלחות </td><td> BD Biosciences </td><td> 353043 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> פיברינוגן </td><td> סיגמא </td><td> F3879 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> תרומבין </td><td> סיגמא </td><td> T6884 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> נגזרת Benztriazole של פוליאתילן </td><td> Sunbio </td><td> DE-034GS </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> טריס מאגר Tablet (pH 7.6) </td><td> סיגמא </td><td> T5030 </td><td> מתכלים </td></tr><tr><td> סרכזת </td><td> Eppendorf </td><td> 5417R </td><td> שוהpment </td></tr><tr><td> Orbital שאכר </td><td> ניו ברונסוויק Scienctific </td><td> C24 </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> החממה Humidified עם האוויר CO-5% 2 </td><td> Thermo Scientific </td><td> דגם 370 </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> תקורה stirrer </td><td> איקא </td><td> Visc6000 </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> מגנטית stirrer </td><td> קורנינג </td><td> PC-210 </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> אבק תא ייבוש </td><td> - </td><td> - </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> גודל החלקיקים Analyzer </td><td> Malvern </td><td> STP2000 Spraytec </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> מי האמבט </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> Isotemp210 </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> ספקטרופוטומטר </td><td> Beckman </td><td> Beckman Coulter DU ספקטרופוטומטר 800UV/Visible </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> מערבולת </td><td> Diagger </td><td> 3030a </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> Microplate Reader </td><td> התקנים מולקולריים </td><td> SpectraMax M2 </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> אור / מיקרוסקופ פלואורסצנטי </td><td> אולימפוס </td><td> IX71 </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> Confocal מיקרוסקופ </td><td> אולימפוס </td><td> FV-500 סריקת לייזר מיקרוסקופ Confocal </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> סריקת מיקרוסקופ אלקטרונים </td><td> Carl Zeiss MicroImaging </td><td> ליאו 435 סמנכ&quot;ל </td><td> ציוד </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ אלקטרונים הילוכים </td><td> JEOL </td><td> JEOL 1230 </td><td> ציוד </td></tr></tbody></table>

engineering a bilayered hydrogel to control asc differentiation

פולימרים טבעיים לאורך השנים זכו חשיבות גדולה יותר בגלל biocompatibility המארח שלהם ואת היכולת לתקשר עם תאים במבחנה in vivo. תחום מחקר זה טומן בחובו הבטחה ברפואה רגנרטיבית הוא השימוש קומבינטורית של biomaterials הרומן ותאי גזע. האסטרטגיה הבסיסית בתחום של הנדסת רקמות הוא השימוש תלת ממדי הפיגום (למשל, decellularized תאי מטריקס, הידרוג, מיקרו / ננו חלקיקים) על בימוי תפקוד התא. טכנולוגיה זו התפתחה מן הגילוי כי תאים צריך המצע שעליו הם יכולים להתאים, מתרבים, ומבטאים פנוטיפ מובחן הסלולר שלהם פונקציה 2-3. לאחרונה, הוכח גם קבע כי התאים לא רק להשתמש אלה מצעים של דבקות, אלא גם לתקשר ולקבל רמזים מן המצע מטריקס (Matrix למשל, תאית, ECM) 4. לכן, התאים ופיגומים יש קשר גומלין זהמשמש לשלוט בפיתוח רקמות, ארגון ותפקוד האולטימטיבי. השומן שמקורם בתאי גזע (ASCs) הם mesenchymal, לא hematopoetic בתאי גזע הנמצאים ברקמות השומן שניתן להציג רב שושלת דיפרנציאציה לשמש מקור וזמין של תאים (כלומר מראש כלי דם endothelia ו pericytes). ההשערה שלנו היא כי השומן שמקורם בתאי גזע יכולה להיות מופנית כלפי פנוטיפים שונים בו זמנית, פשוט על ידי שיתוף culturing אותם מטריצות bilayered 1. המעבדה שלנו מתמקדת בריפוי פצעים עורי. לצורך כך, יצרנו מטריצה ​​מורכב אחד מן biomaterials טבעיים, הפיברין, קולגן, ו chitosan שיכולים לחקות את המאפיינים והפונקציות של הסביבה עורי ספציפי ריפוי הפצע ECM.

Watch this Scientific Journal Video about Engineering a Bilayered Hydrogel to Control ASC Differentiation at JoVE.com

Engineering a Bilayered Hydrogel to Control ASC Differentiation

פרוטוקול זה מתמקד ניצול היכולת הטמונה בתאי גזע כדי לקחת את המקל מ מטריקס הסובבת אותם תאי ו להיגרם להתמיין פנוטיפים רבים. זה כתב היד שיטות משתרע תיאור שלנו ואפיון של המודל ניצול הידרוג bilayered, המורכבת PEG-הפיברין וכן קולגן, בו זמנית לשתף להבדיל השומן שמקורם בתאי גזע<sup&gt; 1</sup&gt;.

הנדסת Hydrogel Bilayered לשלוט בידול ASC

Natural polymers over the years have gained more importance because of their host biocompatibility and ability to interact with cells in vitro and in ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Procedure for Lung Engineering

נוהל הנדסה ריאות

Lung tissue, including lung cancer and chronic lung diseases such as chronic obstructive pulmonary disease, cumulatively account for some 280,000 deaths ...

Encapsulation of Cardiomyocytes in a Fibrin Hydrogel for Cardiac Tissue Engineering

Encapsulation של cardiomyocytes ב Hydrogel הפיברין עבור הנדסת רקמות לב

Culturing cells in a three dimensional hydrogel environment is an important technique for developing constructs for tissue engineering as well as studying ...

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

עיצוב של bioreactor לחץ על מחזורי Ex Vivo מחקר של מסתמי הלב אבי העורקים

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

A Toolkit to Enable Hydrocarbon Conversion in Aqueous Environments

Toolkit כדי לאפשר גיור פחמימן בסביבות מימיות

This work puts forward a toolkit that enables the conversion of alkanes by Escherichia coli and presents a proof of principle of its applicability. The ...

Synthesis of an Intein-mediated Artificial Protein Hydrogel

סינתזה של חלבון מלאכותי בתיווך intein Hydrogel

We present the synthesis of a highly stable protein hydrogel mediated by a split-intein-catalyzed protein trans-splicing reaction. The building blocks of ...

Tissue Engineering of Tumor Stromal Microenvironment with Application to Cancer Cell Invasion

הנדסת רקמות של גידול סטרומה Microenvironment עם בקשה לפלישת תאי הסרטן

3D organotypic cultures of epithelial cells on a matrix embedded with mesenchymal cells are widely used to study epithelial cell differentiation and ...

An Injectable and Drug-loaded Supramolecular Hydrogel for Local Catheter Injection into the Pig Heart

מולקולריים Hydrogel זריקות וטעוני תרופות להזרקה מקומית צנתר לתוך לב החזיר

Regeneration of lost myocardium is an important goal for future therapies because of the increasing occurrence of chronic ischemic heart failure and the ...

Tissue Engineering by Intrinsic Vascularization in an In Vivo Tissue Engineering Chamber

Tissue Engineering by Intrinsic Vascularization in an In Vivo Tissue Engineering Chamber

הנדסת רקמות ידי עצמותי כלי דם בתוך<em&gt; In vivo</em&gt; הנדסת רקמות קאמרית

In reconstructive surgery, there is a clinical need for an alternative to the current methods of autologous reconstruction which are complex, costly and ...

Dendrimer-based Uneven Nanopatterns to Locally Control Surface Adhesiveness: A Method to Direct Chondrogenic Differentiation

דנדרימר מבוססי Nanopatterns לא אחיד כדי מקומית משטח שליטה Adhesiveness: שיטה ישירה בידול Chondrogenic

Cellular adhesion and differentiation is conditioned by the nanoscale disposition of the extracellular matrix (ECM) components, with local concentrations ...

Gel-seq: A Method for Simultaneous Sequencing Library Preparation of DNA and RNA Using Hydrogel Matrices

ג'ל-seq: שיטת הכנת ספריה סימולטני רצף DNA ו- RNA באמצעות מטריצות הידרוג

The ability to amplify and sequence either DNA or RNA from small starting samples has only been achieved in the last five years. Unfortunately, the ...