Name: engineering a bilayered hydrogel to control asc differentiation
Uploaded: 2012-05-25T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Engineering a Bilayered Hydrogel to Control ASC Differentiation at JoVE.com

Н. была поддержана Грантом Докторантура стипендий от инженерной инициативы тканей Питтсбурге. ДОЗ поддерживается гранта от Фонда Женеве.

1. Изоляция жировой производные стволовые клетки (ИСС), 1, 5 Примечание: Все процедуры были выполнены при комнатной температуре, если не указано иное. <ol><li> Изолировать крысы паранефральная и придатка жировой и промыть буферной соли стерильной Хэнка решени?...

<ol>
	<li>Natesan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bilayer+construct+controls+adipose-derived+stem+cell+differentiation+into+endothelial+cells+and+pericytes+without+growth+factor+stimulation.">A bilayer construct controls adipose-derived stem cell differentiation into endothelial cells and pericytes without growth factor stimulation.</a> Tissue Eng. Part A. 17, 941-953 (2011).</li><li>Nuttelman, C. R., Tripodi, M. C., Anseth, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+hydrogel+niches+that+promote+hMSC+viability.">Synthetic hydrogel niches that promote hMSC viability.</a> Matrix Biol. 24, 208-218 (2005).</li><li>Benoit, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrin-linked+kinase+production+prevents+anoikis+in+human+mesenchymal+stem+cells.">Integrin-linked kinase production prevents anoikis in human mesenchymal stem cells.</a> J Biomed Mater Res A. 81, 259-268 (2007).</li><li>Willerth, S. M., Sakiyama-Elbert, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+stem+cells+and+biomaterial+scaffolds+for+constructing+tissues+and+cell+delivery.">Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues and cell delivery.</a> , (2008).</li><li>Natesan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose-derived+stem+cell+delivery+into+collagen+gels+using+chitosan+microspheres.">Adipose-derived stem cell delivery into collagen gels using chitosan microspheres.</a> Tissue Eng. Part A. 16, 1369-1384 (2010).</li><li>Bubnis, W. A., Ofner, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+determination+of+epsilon-amino+groups+in+soluble+and+poorly+soluble+proteinaceous+materials+by+a+spectrophotometric+method+using+trinitrobenzenesulfonic+acid.">The determination of epsilon-amino groups in soluble and poorly soluble proteinaceous materials by a spectrophotometric method using trinitrobenzenesulfonic acid.</a> Anal. Biochem. 207, 129-133 (1992).</li><li>Zhang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+PEGylated+fibrin+patch+for+mesenchymal+stem+cell+delivery.">A PEGylated fibrin patch for mesenchymal stem cell delivery.</a> Tissue Eng. 12, 9-19 (2006).</li><li>Bornstein, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reconstituted+rattail+collagen+used+as+substrate+for+tissue+cultures+on+coverslips+in+Maximow+slides+and+roller+tubes.">Reconstituted rattail collagen used as substrate for tissue cultures on coverslips in Maximow slides and roller tubes.</a> Lab Invest. 7, 134-137 (1958).</li><li>Zhang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+differentiation+of+bone+marrow+stem+cells+is+directed+by+a+tunable+three-dimensional+matrix.">Vascular differentiation of bone marrow stem cells is directed by a tunable three-dimensional matrix.</a> Acta Biomater. 6, 3395-3403 (2010).</li><li>Rochon, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+human+epithelial+cells+regulate+the+size+and+morphology+of+tissue-engineered+capillaries.">Normal human epithelial cells regulate the size and morphology of tissue-engineered capillaries.</a> Tissue Eng. Part A. 16, 1457-1468 (2010).</li><li>Liu, H., Collins, S. F., Suggs, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+for+expansion+and+differentiation+of+mouse+embryonic+stem+cells.">Three-dimensional culture for expansion and differentiation of mouse embryonic stem cells.</a> Biomaterials. 27, 6004-6014 (2006).</li></ol>

ИСС хорошо известны за их простоту изоляции и способность различать на различные типы клеток. С методами, описанными в этой рукописи, мы можем использовать пластичность ИСС, подвергая эти клетки на несколько biomatrices одновременно. Как клетки мигрируют от их CSM базу и ввести окружающих их ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента / оборудование </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Хэнкс сбалансированный солевой раствор (HBSS) </td><td> Гибко </td><td> 14175 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Эмбриональной телячьей сыворотки </td><td> Hyclone </td><td> SH30071.03 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Коллагеназы II типа </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C6685 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> 70-мкм нейлоновая сетка фильтра </td><td> BD Biosciences </td><td> 352350 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> 100 мкм нейлоновая сетка фильтра </td><td> BD Biosciences </td><td> 352360 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> MesenPRO рост средней система </td><td> Invitrogen </td><td> 12746-012 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> L-Глютамин </TD&gt; <td> Гибко </td><td> 25030 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> CaCl 2 · 2H 2 O </td><td> Сигма </td><td> C8106 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> T75 тканевой культуры колбу </td><td> BD Biosciences </td><td> 137787 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Хитозан </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 448869 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Уксусная кислота </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 320099 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Октаноле </td><td> Acros Organics </td><td> 150630025 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Сорбитан-моноолеат </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S6760 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Гидроксид калия </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1767 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Ацетон </td><td> Fisher Scientific </td><td> L-4859 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Этанол </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 270741 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Тринитро бензолсульфокислота </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P2297 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Соляная кислота </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 320331 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Этиловый эфир </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 472-484 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> 8 мкм ткани Вставки культуры плиты </td><td> BD Biosciences </td><td> 353097 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> 1,5 мл Трубы Микроцентрифуга </td><td> Рыбак </td><td> 05-408-129 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> МТТ реагентов </td><td> Invitrogen </td><td> M6494 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Диметилсульфоксида </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D8779 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Qtracker мечения клеток Kit (QTracker 655) </td><td> Молекулярные зонды </td><td> Q2502PMP </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Коллаген типа 1 </td><td> Travigen </td><td> 3447-020-01 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Едкий натр </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S8045 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> 12-луночных тканевой культуры </td><td> BD Biosciences </td><td> 353043 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Фибриноген </td><td> Сигма </td><td> F3879 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Тромбин </td><td> Сигма </td><td> T6884 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Benztriazole Производная полиэтилена </td><td> Sunbio </td><td> DE-034GS </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Tris буфера Tablet (рН 7,6) </td><td> Сигма </td><td> T5030 </td><td> Потребляемый </td></tr><tr><td> Центрифугировать </td><td> Эппендорф </td><td> 5417R </td><td> Оборpment </td></tr><tr><td> Орбитальный Шейкер </td><td> Нью-Брансуик Scienctific </td><td> C24 </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Увлажненном инкубаторе с воздушным 5% CO 2 </td><td> Thermo Scientific </td><td> Модель 370 </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Накладные мешалки </td><td> IKA </td><td> Visc6000 </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Магнитная мешалка </td><td> Гранулирование </td><td> PC-210 </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Вакуум-эксикатор </td><td> - </td><td> - </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Анализатор размеров частиц </td><td> Малверн </td><td> STP2000 Spraytec </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Водяная баня </td><td> Fisher Scientific </td><td> Isotemp210 </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Спектрофотометр </td><td> Beckman </td><td> Beckman Coulter DU 800UV/Visible спектрофотометр </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Вихревой </td><td> Diagger </td><td> 3030a </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Считыватель микропланшетов </td><td> Molecular Devices </td><td> SpectraMax M2 </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Свет / флуоресцентный микроскоп </td><td> Олимп </td><td> IX71 </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Конфокальной микроскопии </td><td> Олимп </td><td> FV-500 лазерный сканирующий конфокальный микроскоп </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Сканирующий электронный микроскоп </td><td> Carl Zeiss MicroImaging </td><td> Лев 435 VP </td><td> Оборудование </td></tr><tr><td> Просвечивающего электронного микроскопа </td><td> JEOL </td><td> JEOL 1230 </td><td> Оборудование </td></tr></tbody></table>

engineering a bilayered hydrogel to control asc differentiation

Природных полимеров на протяжении многих лет приобрели большее значение из-за их биосовместимостью хозяина и способность взаимодействовать с клетками, в пробирке и в естественных условиях. Область исследований, которая держит обещание в регенеративной медицине комбинаторной использование новых биоматериалов и стволовых клеток. Основная стратегия в области тканевой инженерии является использование трехмерных леса (например, decellularized внеклеточного матрикса, гидрогели, микро / нано частиц) для направления клеточной функции. Эта технология прошла путь от открытия, что клетки должны подложки, на которой они могут придерживаться, размножаться, и выражать свои дифференцированные клеточный фенотип и функции 2-3. Совсем недавно было также установлено, что клетки не только использовать эти субстраты для присоединения, а также взаимодействовать и принимать сигналы с матрицы подложки (например, внеклеточный матрикс, ECM) 4. Таким образом, клетки и леса имеют взаимные связи, чтослужит для контроля тканей развитию, организации и конечная функция. Жировая производные стволовые клетки (ИСС) являются мезенхимальные, не кроветворения стволовые клетки, присутствующие в жировой ткани, что может выставить несколько линия дифференциации и служить доступный источник клеток (т.е. предварительно сосудистой эндотелия и перицитов). Наша гипотеза состоит в том, что жировая стволовых клеток могут быть направлены на различные фенотипы одновременно просто совместного культивирования их в двухслойных матриц 1. Наша лаборатория ориентирована на кожный заживления ран. С этой целью мы создали один составной матрицы от природных биоматериалов, фибрин, коллаген и хитозан, которые могут имитировать характеристики и функции кожного конкретных раны окружающей среды исцеления ECM.

Watch this Scientific Journal Video about Engineering a Bilayered Hydrogel to Control ASC Differentiation at JoVE.com

Engineering a Bilayered Hydrogel to Control ASC Differentiation

Этот протокол фокусируется на использовании врожденной способности стволовых клеток брать пример с окружающих их внеклеточный матрикс и вызвать их дифференцировку в несколько фенотипов. Это методы рукопись расширяет наше описание и характеристика модели использования двухслойных гидрогель, состоящий из PEG-фибрин и коллаген, одновременно совместно дифференцировать жировой ткани стволовых клеток<sup&gt; 1</sup&gt;.

Инжиниринг двухслойных гидрогель для управления ASC дифференциации

Natural polymers over the years have gained more importance because of their host biocompatibility and ability to interact with cells in vitro and in ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Procedure for Lung Engineering

Порядок легких инженерных

Lung tissue, including lung cancer and chronic lung diseases such as chronic obstructive pulmonary disease, cumulatively account for some 280,000 deaths ...

Encapsulation of Cardiomyocytes in a Fibrin Hydrogel for Cardiac Tissue Engineering

Инкапсуляция кардиомиоцитов в Фибрин Гидрогель для сердечной тканевой инженерии

Culturing cells in a three dimensional hydrogel environment is an important technique for developing constructs for tissue engineering as well as studying ...

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

Дизайн Циклические биореактора давление для Ex Vivo Изучение аортального клапанов сердца

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

A Toolkit to Enable Hydrocarbon Conversion in Aqueous Environments

Инструментарий, позволяющий конверсии углеводородов в водной среде

This work puts forward a toolkit that enables the conversion of alkanes by Escherichia coli and presents a proof of principle of its applicability. The ...

Synthesis of an Intein-mediated Artificial Protein Hydrogel

Синтез интеин-опосредованной искусственного белка гидрогеля

We present the synthesis of a highly stable protein hydrogel mediated by a split-intein-catalyzed protein trans-splicing reaction. The building blocks of ...

Tissue Engineering of Tumor Stromal Microenvironment with Application to Cancer Cell Invasion

Тканевая инженерия из стромальных опухолей микроокружения с применением к клеточной Рак Invasion

3D organotypic cultures of epithelial cells on a matrix embedded with mesenchymal cells are widely used to study epithelial cell differentiation and ...

An Injectable and Drug-loaded Supramolecular Hydrogel for Local Catheter Injection into the Pig Heart

Инъекций и медикаментов загружены Супрамолекулярная Гидрогель для местного катетера для инъекций в сердце свиньи

Regeneration of lost myocardium is an important goal for future therapies because of the increasing occurrence of chronic ischemic heart failure and the ...

Tissue Engineering by Intrinsic Vascularization in an In Vivo Tissue Engineering Chamber

Tissue Engineering by Intrinsic Vascularization in an In Vivo Tissue Engineering Chamber

Тканевая инженерия по искробезопасности васкуляризации<em&gt; В Vivo</em&gt; Tissue Engineering палата

In reconstructive surgery, there is a clinical need for an alternative to the current methods of autologous reconstruction which are complex, costly and ...

Dendrimer-based Uneven Nanopatterns to Locally Control Surface Adhesiveness: A Method to Direct Chondrogenic Differentiation

На основе дендример неравномерным Nanopatterns для локально клейкости поверхность управления: метод прямого хондрогенном дифференциация

Cellular adhesion and differentiation is conditioned by the nanoscale disposition of the extracellular matrix (ECM) components, with local concentrations ...

Gel-seq: A Method for Simultaneous Sequencing Library Preparation of DNA and RNA Using Hydrogel Matrices

Гель seq: Метод для подготовки библиотека одновременных секвенирования ДНК и РНК с помощью матрицы Гидрогель

The ability to amplify and sequence either DNA or RNA from small starting samples has only been achieved in the last five years. Unfortunately, the ...