Name: rat mesentery exteriorization: a model for investigating the cellular dynamics involved in angiogenesis
Uploaded: 2012-05-20T14:00:00
Duration: 12 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מועצת העוצרים של מדינת לואיזיאנה LEQSF (2009-12), RD-A-19 (PI: WL Murfee) לבין יתר לחץ דם טוליין מרכז כליות מצוינות ממומן על ידי מענק P20RR017659 NIH-08 (PI : ל &#39;גבריאל Navar).

<ol>
	<li>Carmeliet, P., Jain, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+in+cancer+and+other+diseases.">Angiogenesis in cancer and other diseases.</a> Nature. 407, 249-257 (2000).</li><li>le Noble, F. A., Stassen, F. R., Hacking, W. J., Struijker Boudier, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+and+hypertension.">Angiogenesis and hypertension.</a> J. Hypertens. 16, 1563-1572 (1998).</li><li>Peirce, S. M., Skalak, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microvascular+remodeling:+a+complex+continuum+spanning+angiogenesis+to+arteriogenesis.">Microvascular remodeling: a complex continuum spanning angiogenesis to arteriogenesis.</a> Microcirculation. 10, 99-111 (2003).</li><li>Anderson, C. R., Ponce, A. M., Price, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+identification+of+an+extracellular+matrix+scaffold+that+microguides+capillary+sprouting+in+vivo.">Immunohistochemical identification of an extracellular matrix scaffold that microguides capillary sprouting in vivo.</a> J. Histochem. Cytochem. 52, 1063-1072 (2004).</li><li>Ponce, A. M., Price, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenic+stimulus+determines+the+positioning+of+pericytes+within+capillary+sprouts+in+vivo.">Angiogenic stimulus determines the positioning of pericytes within capillary sprouts in vivo.</a> Microvasc. Res. 65, 45-48 (2003).</li><li>Franzen, L., Ghassemifar, R., Malcherek, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+mast+cell+activation+improves+connective+tissue+repair+in+the+perforated+rat+mesentery.">Experimental mast cell activation improves connective tissue repair in the perforated rat mesentery.</a> Agents Actions. 33, 371-377 (1991).</li><li>Anderson, C. R., Hastings, N. E., Blackman, B. R., Price, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+sprout+endothelial+cells+exhibit+a+CD36+low+phenotype:+regulation+by+shear+stress+and+vascular+endothelial+growth+factor-induced+mechanism+for+attenuating+anti-proliferative+thrombospondin-1+signaling.">Capillary sprout endothelial cells exhibit a CD36 low phenotype: regulation by shear stress and vascular endothelial growth factor-induced mechanism for attenuating anti-proliferative thrombospondin-1 signaling.</a> Am. J. Pathol. 173, 1220-1228 (2008).</li><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+models+of+angiogenesis.">In vivo models of angiogenesis.</a> J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).</li><li>Norrby, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rat+Mesentery+Angiogenesis+Assay.">Rat Mesentery Angiogenesis Assay.</a> J. Vis. Exp. (52), e3078 (2011).</li><li>Murfee, W. L., Rehorn, M. R., Peirce, S. M., Skalak, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+cells+along+venules+upregulate+NG2+expression+during+microvascular+remodeling.">Perivascular cells along venules upregulate NG2 expression during microvascular remodeling.</a> Microcirculation. 13, 261-273 (2006).</li><li>Stapor, C. P., Murfee, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+class+III+&#946;-tubulin+as+a+marker+of+angiogenic+perivascular+cells.">Identification of class III &#946;-tubulin as a marker of angiogenic perivascular cells.</a> Microvascular Research. , (2011).</li><li>Yang, M., Aragon, M., Murfee, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+in+Mesenteric+Microvascular+Networks+from+Spontaneously+Hypertensive+Versus+Normotensive+Rats.">Angiogenesis in Mesenteric Microvascular Networks from Spontaneously Hypertensive Versus Normotensive Rats.</a> Microcirculation. , (2011).</li><li>Robichaux, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphatic/Blood+endothelial+cell+connections+at+the+capillary+level+in+adult+rat+mesentery.">Lymphatic/Blood endothelial cell connections at the capillary level in adult rat mesentery.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 293, 1629-1638 (2010).</li><li>Amos, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IFATS+collection:+The+role+of+human+adipose-derived+stromal+cells+in+inflammatory+microvascular+remodeling+and+evidence+of+a+perivascular+phenotype.">IFATS collection: The role of human adipose-derived stromal cells in inflammatory microvascular remodeling and evidence of a perivascular phenotype.</a> Stem Cells. 26, 2682-2690 (2008).</li></ol>

אין לנו מה למסור.

המודל החצנה דווח בשנת 2006 והוא מותאם החל מה מכניים חולדה פגיעה מודלים לפדר של אנגיוגנזה 4-7 ומייצרת תוצאות דומות שהוקמו גם דגמים הזרקת ה-IP לנצל עכברוש לפדר 9. השעה החצנה 20 דקות נקבע באופן ניסיוני כדי לייצר תגובה angiogenic חזקים. אמנם זה פרק הזמן יכול להיות מגוונים, זה לאפשר יישום מקומי של מעכבי angiogenic 4 ללימודי מכניסטיים יישום ישיר של תאים חיצוניים ללימודי השושלת סלולריים. הכדאיות של שילוב תאים לתוך הרקמה שיפוץ mesenteric נתמכת על ידי מחקרים ראשוניים במעבדה שלנו באמצעות מראש שכותרתו מח עצם ותאי גזע mesenchymal (איור 7), ועל ידי ההצלחה של חוקרת את גורלו של האדם IP השומן המופק בתאי סטרומה הזרקת 14 . במעבדה שלנו, השתמשנו במודל זה כדי לזהות phen pericyteשינויים otypic במהלך זמן התגובה angiogenic 10 ולהעריך את הפוטנציאל angiogenic במהלך במצבים פתולוגיים, דוגמת יתר לחץ דם 12. בתגובה angiogenic ו פנוטיפ התא שינויים הקשורים מודל זה יכול להיות גם ציין אחרות mesenteric מודלים חולדה angiogenic כולל חשיפה היפוקסיה כרונית 10, 11. הגבלה של המודל החצנה היא מפעילה את המנגנונים המדויקים של אנגיוגנזה אינם ידועים. החצנה של לפדר נקשר degranulation תא התורן רמות היסטמין גבוהות 6, אך חקירה נוספת נדרשת כדי לקבל תובנה רבה יותר. גירוי angiogenic הוא ללא ספק רב העצרת, ייצור תגובה שיפוץ חזקים מעבר בהיררכיה של רשת כלי הדם. אמנם לא ידועים המנגנונים להישאר הביקורת העיקרי של מודל זה, שחזור שלה ופשטות להפוך אותו למושך לזיהוי הסלולר דינמיקה involved בתהליך מורכב מיסודו הנבטה נימי. שחזור של מודל נתמך על ידי מדדים angiogenic דומים במהלך תקופה של צמיחה רשת כלי הדם על פני מספר רב של זנים של עכברים (Wistar זכר ונקבה Sprague-Dawley) במחקרים שפורסמו בעבר מהמעבדה שלנו, 10, 12. מאז, רוב הרקמות mesenteric עכברים בוגרים הם vascularized, המודל גם מאפשר מספר רב של רקמות כדי להיבדק לכל בעל חיים. למרבה הצער, מודל זה אינו ישים בעליל מודלים העכבר גנטיות כמו mesenteric Windows העכבר יש כלי הדם יליד פחות, מניסיוננו, בדרך כלל אין רשתות הסתעפות הנצפה. יישומים עתידיים כוללים את החקירה של פונקציונליות כלי במהלך אנגיוגנזה באמצעות מיקרוסקופ תוך חיוני בנקודות זמן ספציפיות חקירת הדינמיקה הסלולר הקשורות המעורבים lymphangiogenesis ו neurogenesis. למרות היקף כלי הדם יליד לכל חלון mesenteric נראה המשוגעיחסי ghly עם הגיל, ראינו הסתעפות רשתות כלי הדם אצל הזכר חולדות Wistar החל מגיל 4-5 שבועות. תצפיות מראות כי המודל החצנה יכול להיות מיושם גם להשוות את ההבדלים angiogenic על פני המון זמן.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערות נוספות </td></tr><tr><td> וילון </td><td> הקרדינל הבריאות </td><td> 4012 </td><td> 12 &quot;x12&quot; Bio-Shield עיקור רגיל כורכת </td></tr><tr><td> נויס מספריים Micro </td><td> Roboz כירורגית כלי </td><td> RS-5677 </td><td> נויס מיקרו הביתור מספריים אביב; ישרים, שארפ-בלאנט נקודות; חדשניות 13 מ&quot;מ, רוחב עצה 0.25mm, 4 1/2 &quot;אורך כולל </td></tr><tr><td> גרפה המלקחיים </td><td> Roboz כירורגית כלי </td><td> RS-5135 </td><td> מיקרו הביתור מלקחיים, משונן, עיקול קל, רוחב עצה 0.8mm; 4 &quot;אורך </td></tr><tr><td> גרפה המלקחיים </td><td> Roboz כירורגית כלי </td><td> RS-5130 </td><td> מלקחיים המבתרים מיקרו, משונן, סטרייט, רוחב 0.8mm, עצה 4 &quot;אורך </td></tr&gt; <tr><td> 4-0 תפר </td><td> Ethicon </td><td> 699G </td><td> (1.5 מדד) קשירת ETHILON ניילון שחור monofilament </td></tr><tr><td> 5-0 תפר </td><td> Ethicon </td><td> 8556 </td><td> (1.0 מדד) PROLENE Polyprolene קשירת monofilament כחול </td></tr><tr><td> 7-0 תפר </td><td> Ethicon </td><td> 1647G </td><td> (0.5 מדד) קשירת ETHILON ניילון שחור monofilament </td></tr><tr><td> Castroviejo מיקרו מחזיק מחט </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 12060-02 </td><td> רוחב טיפ: 0.6 מ&quot;מ לחיצה אורך: 5 מ&quot;מ אורך: 9cm ישר עצה </td></tr><tr><td> Castroviejo מחזיק מחט </td><td> מדע כלים עדינים </td><td> 12565-14 </td><td> צורה טיפ: סטרייט רוחב טיפ: 1.5mm לחיצה אורך: 10 מ&quot;מ מספריים: אין נעילה: כן אורך: 14cm משוננת: כן </td></tr><tr><td> אזמל ידית </td><td> רובוz כירורגית כלי </td><td> RS-9843 </td><td> אזמל ידית, # 3, מוצק; 4 &quot;אורך </td></tr><tr><td> סכין כירורגית סטרילית </td><td> סינסינטי כירורגי </td><td> 0110 </td><td> נירוסטה, גודל 10 </td></tr><tr><td> צלחת פטרי </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 08-757-13 </td><td> רכס beveled, Slippable </td></tr></tbody></table> טבלת חומרים כירורגית כלים ספציפיים. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערות נוספות </td></tr><tr><td> Beuthanasia </td><td> Schering-Plough בעלי חיים בריאות ברית קורפ (שהוזמנו אספקה ​​MWI וטרינרית) </td><td> MWI #: 011168 </td><td> המרכיב הפעיל: לכל 100 מ&quot;ל, 390 מ&quot;ג נתרן pentobarbital, 50 מ&quot;ג נתרן פניטואין </td></tr><tr><td> קטמין </td><td> Fort Dodge לבריאות בעלי חיים (שהוזמנו אספקה ​​MWI וטרינרית) </td><td> MWI #: 000680 </td><td> Kateset 100 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> לויד. בע&quot;מ (שהוזמנו אספקה ​​MWI וטרינרית) </td><td> MWI #: 009307 </td><td> Anased 100 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td></tr><tr><td> מלוח </td><td> Hospira בע&quot;מ </td><td> 94-217-JT </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> SIGMA </td><td> 011M8207 </td><td></td></tr><tr><td> Saponin </td><td> סיגמא </td><td> BCBB4080 </td><td></td></tr><tr><td> PECAM (CD31) </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553371 </td><td></td></tr><tr><td> Streptavidin-CY3 </td><td> ג&#39;קסון ImmunoResearch </td><td> 016-160-084 </td><td></td></tr><tr><td> BSA </td><td> ג&#39;קסון ImmunoResearch </td><td> 096555 </td><td></td></tr><tr><td> VECTASTAIN עלית ABC </td><td> וקטור מעבדות </td><td> PK-6100 </td><td></td></tr><tr><td> וקטור נובה האדום </td><td> וקטור מעבדות </td><td> SK-4800 </td><td></td></tr><tr><td> VectaMount </td><td> וקטור מעבדות </td><td> H-500 </td><td></td></tr></tbody></table> טבלה של חומרים כימיים ספציפיים

rat mesentery exteriorization: a model for investigating the cellular dynamics involved in angiogenesis

הצמיחה לרשת שיפוץ Microvacular והם היבטים קריטיים של ריפוי פצעים, דלקות, רטינופתיה סוכרתית, הגידול ותנאי מחלות אחרות 1, 2. הצמיחה לרשת מיוחסת בדרך כלל אנגיוגנזה, כהגדרתו צמיחה של כלי דם חדשים מתוך קיימים כלי. תהליך angiogenic הוא גם מקושר ישירות אל arteriogenesis, כהגדרתו רכישת נימי של ציפוי תא perivascular והגדלת כלי. למותר לציין, אנגיוגנזה הוא מורכב ומעורבים בו מספר שחקנים ברמה תאית ומולקולרית 3. ההבנה כיצד רשת כלי הדם גדל דורש לזהות את הדינמיקה במרחב ובזמן, יחד היררכיה של הרשת במהלך תקופה של אנגיוגנזה. מידע זה הוא קריטי להתפתחות של טיפולים שמטרתם מניפולציה צמיחה כלי. המודל החצנה המתוארת במאמר זה מהווה מודל פשוט, לשחזור של stimulating אנגיוגנזה ב לפדר את העכברוש. זה הותאם מפצע ריפוי מודלים בחולדה לפדר 4-7, והוא אלטרנטיבה לעורר אנגיוגנזה ב לפדר באמצעות זריקות IP של Pro-angiogenic סוכני 8, 9. המודל החצנה הוא אטרקטיבי כי זה דורש התערבות כירורגית מינימלית ומפיק דרמטיים, עולה ב לשחזור נבטים נימי, אזור כלי הדם וצפיפות כלי הדם במשך זמן קצר יחסית ברקמות המאפשר הדמיה דו ממדית של רשתות שלמות כלי הדם עד יחיד התא ברמה. הגידול משקף מגורה תגובות angiogenic טבעיים בסביבה ללא הפרעה פיזיולוגית של מולקולות angiogenic זרים. באמצעות שיטות תיוג immunohistochemical, מודל זה הוכח מאוד שימושי בזיהוי אירועים הסלולר הרומן המעורבים אנגיוגנזה. החוקרים יכולים בקלות לתאם את המדדים angiogenic במהלך תקופה של שיפוצים עם הזמן specific Dynamics, כגון שינויים פנוטיפי סלולריים או אינטראקציות הסלולר 4, 5, 7, 10, 11.

Watch this Scientific Journal Video about Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis at JoVE.com

Rat Mesentery Exteriorization: A Model for Investigating the Cellular Dynamics Involved in Angiogenesis

מאמר זה מתאר מודל פשוט של גירוי אנגיוגנזה ב לפדר את העכברוש. המודל מייצר עליות דרמטיות באזור נימי, מצמיח כלי דם וצפיפות כלי הדם במשך זמן קצר יחסית ברקמות המאפשר en להדמיה פני רשתות שלמות כלי הדם עד לרמה תא בודד.

לפדר החצנה חולדה: דגם לחקירת דינמיקה סלולר המעורבים אנגיוגנזה

Microvacular network growth and remodeling are critical aspects of wound healing, inflammation, diabetic retinopathy, tumor growth and other disease ...

Research

JoVE Journal

Biology

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis (Interview)

Christopher Hughes:  An in vitro model for the Study of Angiogenesis Interview

כריסטופר יוז: במודל חוץ גופית לחקר אנגיוגנזה (ראיון)

Christopher C.W. Hughes describes the utility of his culture system for studying angiogenesis in vitro.  He explains the importance of fibroblasts that ...

Use of Rotorod as a Method for the Qualitative Analysis of Walking in Rat

השימוש Rotorod כשיטה לניתוח איכותי של הליכה עכברוש

High speed videoanalysis of the details of movement can provide a source of information about qualitative aspects of walking movements. When walking on a ...

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

עכברוש mesentery Assay אנגיוגנזה

The adult rat mesentery window angiogenesis assay is biologically appropriate and is exceptionally well suited to the 
study of sprouting angiogenesis in ...

An Explant Assay for Assessing Cellular Behavior of the Cranial Mesenchyme

Assay Explant להערכת התנהגות ניידת של mesenchyme הגולגולת

The central nervous system is derived from the neural plate that undergoes a series of complex morphogenetic movements resulting in formation of the ...

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

באמצעות אסטרטגית האכלת התערבות RNA בתיווך למסך לגנים מעורבים בויסות משקל גוף בנמטודות<em&gt; ג elegans</em

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

הקלטת תיקון מהדק מצורף תא אחד ערוצים

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

Microperfusion Technique to Investigate Regulation of Microvessel Permeability in Rat Mesentery

Microperfusion טכניקה לחקירת הסדרת כלי דם קטן חדירות בחולדה לפדר

Experiments to measure the permeability properties of individually perfused microvessels provide a bridge between investigation of molecular and cellular ...

A Simple Bioassay for the Evaluation of Vascular Endothelial Growth Factors

מבדק פשוט עבור הערכת גורמי הגדילה של אנדותל כלי דם

The analysis of receptor tyrosine kinases and their interacting ligands involved in vascular biology is often challenging due to the constitutive ...

High-resolution Time-lapse Imaging and Automated Analysis of Microtubule Dynamics in Living Human Umbilical Vein Endothelial Cells

זמן לשגות הדמיה ברזולוציה גבוהה וניתוח אוטומטי של Dynamics microtubule In Living האדם טבורי וריד לתאי אנדותל

The physiological process by which new vasculature forms from existing vasculature requires specific signaling events that trigger morphological changes ...