Name: examining the role of nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissue (nalt) in mouse responses to vaccines
Uploaded: 2012-08-01T12:00:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines at JoVE.com

समर्थन Becton डिकिंसन टेक्नोलॉजीज द्वारा प्रदान की गई थी. इस प्रस्तुत करने में व्यक्त विचार लेखकों के हैं और मुराद के लिए अमेरिकी सरकार की सरकारी नीति को प्रतिबिंबित नहीं. अनुसंधान पशु कल्याण अधिनियम और अन्य संघीय विधियों और पशुओं और जानवरों और प्रयोगशाला पशुओं की देखभाल और उपयोग करें, राष्ट्रीय अनुसंधान परिषद, 1996 के लिए गाइड में कहा गया है सिद्धांतों का पालन करता है को शामिल प्रयोगों से संबंधित नियमों के साथ अनुपालन में आयोजित किया गया. सुविधा जहां यह अनुसंधान का आयोजन किया गया था और प्रयोगशाला पशु केयर इंटरनेशनल के आकलन और प्रत्यायन के लिए एसोसिएशन द्वारा पूरी तरह से मान्यता प्राप्त है.

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	<li>Wiley, J. A., Tighe, M. P., Harmsen, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upper+respiratory+tract+resistance+to+influenza+infection+is+not+prevented+by+the+absence+of+either+nasal-associated+lymphoid+tissue+or+cervical+lymph+nodes.">Upper respiratory tract resistance to influenza infection is not prevented by the absence of either nasal-associated lymphoid tissue or cervical lymph nodes.</a> J. Immunol. 175, 3186-3196 (2005).</li><li>W, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+immunisation+with+conjugate+vaccine+protects+mice+from+systemic+and+respiratory+tract+infection+with+Pseudomonas+aeruginosa.">Intranasal immunisation with conjugate vaccine protects mice from systemic and respiratory tract infection with Pseudomonas aeruginosa.</a> Vaccine. 24, 4333-4342 (2006).</li><li>Fernandez, S., Cisney, E. D., Hall, S. I., Ulrich, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal+immunity+to+staphylococcal+toxic+shock+is+controlled+by+the+nasopharynx-associated+lymphoid+tissue.">Nasal immunity to staphylococcal toxic shock is controlled by the nasopharynx-associated lymphoid tissue.</a> Clin. Vaccine Immunol. 18, 667-675 (2011).</li><li>Asanuma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mouse+nasal-associated+lymphoid+tissue.">Isolation and characterization of mouse nasal-associated lymphoid tissue.</a> J. Immunol. Methods. 202, 123-131 (1997).</li><li>Casteleyn, C., Broos, A. M., Simoens, P., Van den Broeck, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NALT+(nasal+cavity-associated+lymphoid+tissue)+in+the+rabbit.">NALT (nasal cavity-associated lymphoid tissue) in the rabbit.</a> Vet. Immunol. Immunopathol. 133, 212-218 (2010).</li><li>Debertin, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal-associated+lymphoid+tissue+(NALT):+frequency+and+localization+in+young+children.">Nasal-associated lymphoid tissue (NALT): frequency and localization in young children.</a> Clin. Exp. Immunol. 134, 503-507 (2003).</li><li>Csencsits, K. L., Jutila, M. A., Pascual, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal-associated+lymphoid+tissue:+phenotypic+and+functional+evidence+for+the+primary+role+of+peripheral+node+addressin+in+naïve+lymphocyte+adhesion+to+high+endothelial+venules+in+a+mucosal+site.">Nasal-associated lymphoid tissue: phenotypic and functional evidence for the primary role of peripheral node addressin in naïve lymphocyte adhesion to high endothelial venules in a mucosal site.</a> J. Immunol. 163, 1382-1389 (1999).</li><li>Zuercher, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal-associated+lymphoid+tissue+is+a+mucosal+inductive+site+for+virus-specific+humoral+and+cellular+immune+responses.">Nasal-associated lymphoid tissue is a mucosal inductive site for virus-specific humoral and cellular immune responses.</a> J. Immunol. 168, 1796-1803 (2002).</li><li>Park, H. S., Francis, K. P., Yu, J., Cleary, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membranous+cells+in+nasal-associated+lymphoid+tissue:+a+portal+of+entry+for+the+respiratory+mucosal+pathogen+group+A+streptococcus.">Membranous cells in nasal-associated lymphoid tissue: a portal of entry for the respiratory mucosal pathogen group A streptococcus.</a> J. Immunol. 171, 2532-2537 (2003).</li><li>Tyrer, P., Foxwell, A. R., Cripps, A. W., Apicella, M. A., Kyd, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+pattern+recognition+receptors+mediate+M-cell+uptake+of+a+gram-negative+bacterium.">Microbial pattern recognition receptors mediate M-cell uptake of a gram-negative bacterium.</a> Infect. Immun. 74, 625-631 (2006).</li><li>Wu, A. W., Russell, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal+lymphoid+tissue,+intranasal+immunization,+and+compartmentalization+of+the+common+mucosal+immune+system.">Nasal lymphoid tissue, intranasal immunization, and compartmentalization of the common mucosal immune system.</a> Immunol. Res. 16, 187-201 (1997).</li><li>Harmsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+organogenesis+of+nasal-associated+lymphoid+tissue+(NALT)+occurs+independently+of+lymphotoxin-alpha+(LT+alpha)+and+retinoic+acid+receptor-related+orphan+receptor-gamma,+but+the+organization+of+NALT+is+LT+alpha+dependent.">Cutting edge: organogenesis of nasal-associated lymphoid tissue (NALT) occurs independently of lymphotoxin-alpha (LT alpha) and retinoic acid receptor-related orphan receptor-gamma, but the organization of NALT is LT alpha dependent.</a> J. Immunol. 168, 986-990 (2002).</li><li>Rangel-Moreno, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+CXC+chemokine+ligand+13,+CC+chemokine+ligand+(CCL)+19,+and+CCL21+in+the+organization+and+function+of+nasal-associated+lymphoid+tissue.">Role of CXC chemokine ligand 13, CC chemokine ligand (CCL) 19, and CCL21 in the organization and function of nasal-associated lymphoid tissue.</a> J. Immunol. 175, 4904-4913 (2005).</li><li>Morefield, G. L., Hawkins, L. D., Ishizaka, S. T., Kissner, T. L., Ulrich, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+Toll-like+receptor+4+agonist+enhances+vaccine+efficacy+in+an+experimental+model+of+toxic+shock+syndrome.">Synthetic Toll-like receptor 4 agonist enhances vaccine efficacy in an experimental model of toxic shock syndrome.</a> Clin. Vaccine Immunol. 14, 1499-1504 (2007).</li></ol>

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

हम एक पशु मॉडल के विकास के लिए सामूहिक तरीके से प्रस्तुत किया है, जैविक नमूने, और NALT जुड़े प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया 1-4 की जांच के लिए assays प्राप्त करने. इन तरीकों के प्रदर्शन के दौरान अतिरिक्त कारकों पर विचार कर रहे हैं. सर्जरी और ऊतक संस्कृति के लिए मानक बाँझ तकनीक का पालन किया जाना चाहिए. जीवाणुरोधी और ऐंटिफंगल एजेंटों के अलगाव और संस्कृति, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से बनाए रखने के निष्फल उपकरणों, कार्य क्षेत्र, और कीटाणुरहित palates के दौरान प्रयोग किया जाता एक संयोजन संदूषण का जोखिम कम हो जाएगा. लार, नाक washes और समान mucosal स्राव नमूनों रक्त के साथ संभावित संक्रमण के लिए निरीक्षण किया जाना चाहिए, सीरम एंटीबॉडी के रूप में आम तौर पर उच्च सांद्रता में पाया जाता है. इसके अलावा, mucosal स्राव केवल थोड़ा विश्लेषण के लिए पतला हो क्योंकि एंटीबॉडी के कम सांद्रता सीरम करने के लिए तुलना में इन नमूनों में मौजूद हैं. चूहे सर्जरी के बाद सीधे गर्म किया जाना चाहिए पूर्व करने के लिए रखासंभावित संज्ञाहरण प्रेरित हाइपोथर्मिया वेंट. अपने पक्ष पर वैकल्पिक विश्राम चूहों के बाद सर्जरी के आरोग्यलाभ के दौरान अनियमित श्वसन कम करने के लिए. शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया एक साथ काम कर रहे इन कार्यों को पूरा करने के लिए तीन व्यक्तियों के साथ और अधिक कुशल है: सर्जरी प्रदर्शन, एक मुँह खुला रखने में सहायता, और एक शल्य चिकित्सा के बाद देखभाल प्रदान करने के लिए के रूप में चूहों संज्ञाहरण से ठीक हो. यह सभी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं या अध्ययन के लिए प्रत्येक माउस के लिए सर्जरी की सफलता की पुष्टि के अंत में कपाल - पार वर्गों की और एच ई धुंधला उपयोग करने के लिए आवश्यक है. पूरा और द्विपक्षीय NALT के पृथक, अपूर्ण पृथक या NALT बरकरार: संभव सर्जरी परिणाम हो सकते हैं. क्योंकि सभी सर्जरी नहीं NALT का पूर्ण हानि, अवशिष्ट या अक्षुण्ण NALT के के साथ जानवरों में परिणाम होगा आंतरिक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. एक अन्य संभावित परिणाम है कि तालू के लिए पूरी तरह से ठीक करने में विफल रहता है, एक नाक और मौखिक cavities जोड़ने खोलने जा रही है. अधूरातालु के उपचार के कम वजन के लिए और फूलने की विफलता में परिणाम है, और इन व्यक्तियों के अध्ययन से हटा दिया जाना चाहिए. माउस मॉडल के साथ पहला टीका प्रतिक्रियाओं की जांच करने के लिए इच्छित अध्ययन के परिणाम (एंटीबॉडी प्रतिक्रिया, अस्तित्व, आदि) में NALT के लिए एक भूमिका की स्थापना की सेवा करेंगे. शल्य चिकित्सा NALT हटाने नाक योगदान के स्थानीय और प्रणालीगत प्रतिरक्षा करने के लिए दृढ़ संकल्प की सुविधा. यहाँ वर्णित शल्य दृष्टिकोण माउस NALT की रहित मॉडल प्राप्त करने के लिए सबसे प्रत्यक्ष विधि है. माउस मॉडल दस्तक बाहर चयन कमी NALT सूचना दी, लेकिन इन पशुओं को भी साइटोकिन्स या अन्य माध्यमिक lymphoid ऊतकों के विकास के लिए आवश्यक chemokines में कमी कर रहे हैं, और अतिरिक्त दोष 12,13 बंदरगाह हो सकता है. इसके अलावा, यहां वर्णित विधियों नाक passages के भीतर होने वाले प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के कई पहलुओं की जांच करने के लिए विकसित किए गए. हमारे प्रयोगात्मक परिणाम पूरे ऊपरी पलट का उपयोग अध्ययन पर आधारित हैंटिशू कल्चर के लिए माउस से ई, हालांकि यह संभव है कि वर्गों इस्तेमाल किया जा सकता है. अंत में, सुसंस्कृत NALT मॉडल प्रयोगों टिशू कल्चर में पूरी तरह से प्रदर्शन के लिए उपयोगी है.

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूची संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> स्टेनलेस स्टील बाँझ सर्जिकल ब्लेड, संख्या 11 </td><td> Miltex </td><td> 4-311 </td><td></td></tr><tr><td> चाकू के हैंडल, नंबर 3 </td><td> Miltex </td><td> 4-7 </td><td></td></tr><tr><td> 48 अच्छी तरह से सेल संस्कृति प्लेट्स </td><td> Costar </td><td> 3548 </td><td></td></tr><tr><td> 1640 RPMI </td><td> Invitrogen </td><td> 11875-093 </td><td></td></tr><tr><td> भ्रूण गोजातीय सीरम, निष्क्रिय हीट </td><td> / Gibco Invitrogen </td><td> 16000-044 </td><td> संस्कृति मीडिया में मात्रा से 10%: अंतिम सान्द्र </td></tr><tr><td> स्ट्रेप्टोमाइसिन सल्फेट </td><td> सिग्मा </td><td> S9137 </td><td> अंतिम सान्द्र 100 μg / एमएल: </td></tr><tr><td> पेनिसिलिन </td><td> सिग्मा </td><td> P7794 </td><td> अंतिम सान्द्र: 100 यूआई एमएल / </td></tr><tr><td> Gentamicin </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> G1397-10ML </td><td> अंतिम सान्द्र 50 μg / एमएल: </td></tr><tr><td> Fungizone </td><td> / Gibco Invitrogen </td><td> 15290-018 </td><td> 1 μg / एमएल: अंतिम सान्द्र </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> H0887 </td><td> अंतिम सान्द्र: 10 मिमी </td></tr><tr><td> Eppendorf Microcentrifuge ट्यूबें </td><td> Eppendorf </td><td> 022364111 </td><td></td></tr><tr><td> Nutra जेल चेरी फ्लेवर्ड माउस गीले खाद्य </td><td> जैव सेवा </td><td> S4798 - ट्रे </td><td></td></tr><tr><td> Metacam </td><td> Boehringer Ingelheim </td><td> 601531000 </td><td> 1.5 मिलीग्राम / एमएल ओरल सस्पेंशन की एक बूँद </td></tr><tr><td> Ketamine </td><td> फ़िज़र </td><td> 00856440301 </td><td> अंतिम सहनेकां: 6.06 मिलीग्राम / एमएल </td></tr><tr><td> Acepromazine </td><td> Vedco </td><td> VEDC207 </td><td> अंतिम सान्द्र: 0.061 मिलीग्राम / एमएल </td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> लॉयड </td><td> 4811 </td><td> अंतिम सान्द्र: 0.667 मिलीग्राम / एमएल </td></tr><tr><td> Puralube डॉक्टर मरहम </td><td> Pharmaderm पशु स्वास्थ्य </td><td> 1621 </td><td></td></tr><tr><td> 0.9% सोडियम क्लोराइड इंजेक्शन खासियत </td><td> बैक्सटर </td><td> 2B1302 </td><td></td></tr><tr><td> 0.5 मिमी Microcurette </td><td> Roboz </td><td> RS-6350 </td><td></td></tr><tr><td> थर्मल दाग़ना यूनिट </td><td> Geiger </td><td> 150-S/150A-S </td><td></td></tr><tr><td> TCU रिप्लेसमेंट टिप, सीधे ठीक लूप </td><td> Geiger </td><td> 214 </td><td></td></tr><tr><td> सर्जिकल कैंची </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10 तटस्थ% Formalin के बफर </td><td> सिग्मा </td><td> HT501128 </td><td></td></tr><tr><td> चींटी एसिड </td><td> मछुआ </td><td> A119P - 4 </td><td> 1047 एमएल पानी के नल में 426 एमएल चींटी एसिड मिश्रण, तो 45 एमएल Rexyn 101 (एच) </td></tr><tr><td> Rexyn 101 (एच) </td><td> मछुआ </td><td> R231-500 </td><td></td></tr><tr><td> ऊतक टेक वीआईपी E150/E300 </td><td> Sakura </td><td></td><td></td></tr><tr><td> रोटरी सूक्ष्म तक्षणी </td><td> Leica </td><td> RM2255 </td><td></td></tr><tr><td> मेयर Hematoxylin </td><td> सिग्मा </td><td> MHS16-500ml </td><td></td></tr><tr><td> गिल नंबर 1 Hematoxylin </td><td> सिग्मा </td><td> GHS116 </td><td></td></tr><tr><td> लाल भामसान रंग बी </td><td> सिग्मा </td><td> 2853 </td><td></td></tr><tr><td> Microtainer सीरम सेपरेटर </td><td> बी.डी. एमedical </td><td> 365,956 </td><td></td></tr><tr><td> फास्फेट खारा बफर </td><td></td><td></td><td> 100 मिमी नः 2 4 पीओ, 140 मिमी, NaCl 7.4 पीएच </td></tr><tr><td> Protease अवरोध करनेवाला कॉकटेल, EDTA मुक्त </td><td> थर्मो वैज्ञानिक </td><td> +७८,४१५ </td><td></td></tr></tbody></table>

examining the role of nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissue (nalt) in mouse responses to vaccines

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. The NALT are two parallel bell-shaped structures located in the nasal passages above the hard palate, and are usually considered to be secondary components of the mucosal-associated lymphoid system4-6. Located within the NALT are discrete compartments of B and T lymphocytes interspersed with antigen-presenting dendritic cells4,7,8. These cells are surrounded by an epithelial cell layer intercalated with M-cells that are responsible for antigen retrieval from the mucosal surfaces of the air passages9,10. Naive lymphocytes circulating through the NALT are poised to respond to first encounters with respiratory pathogens7. While NALT disappear in humans by the age of two years, the Waldeyer's Ring and similarly structured lymphatic organs continue to persist throughout life6. In contrast to humans, mice retain NALT throughout life, thus providing a convenient animal model for the study of immune responses originating within the nasal sinuses11.
Cultures of single-cell suspensions of NALT are not practical due to low yields of mononuclear cells. However, NALT biology can be examined by ex vivo culturing of the intact organ, and this method has the additional advantage of maintaining the natural tissue structure. For in vivo studies, genetic knockout models presenting defects limited to NALT are not currently available due to a poor understanding of the developmental pathway. For example, while lymphotoxin-&alpha; knockout mice have atrophied NALT, the Peyer's patches, peripheral lymph nodes, follicular dendritic cells and other lymphoid tissues are also altered in these genetically manipulated mice12,13. As an alternative to gene knockout mice, surgical ablation permanently eliminates NALT from the nasal passage without affecting other tissues. The resulting mouse model has been used to establish relationships between NALT and immune responses to vaccines1,3. Serial collection of serum, saliva, nasal washes and vaginal secretions is necessary for establishing the basis of host responses to vaccination, while immune responses originating directly from NALT can be confirmed by tissue culture. The following procedures outline the surgeries, tissue culture and sample collection necessary to examine local and systemic humoral immune responses to intranasal (IN) vaccination.

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Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

Nasopharyngeal जुड़े intranasal टीके के लिए चूहों के नाक और प्रणालीगत प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के लिए lymphoreticular ऊतकों (NALT) के योगदान की जांच के तरीके का वर्णन कर रहे हैं. हम एक शल्य प्रक्रिया के लिए एक माउस NALT पर निर्भर मॉडल की स्थापना प्रदर्शन और<em&gt; पूर्व vivo</emनिकाले NALT&gt; संस्कृतियों.

टीके के लिए माउस जवाब में nasopharyngeal जुड़े Lymphoreticular ऊतक (NALT) की भूमिका की जांच

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

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