Name: examining the role of nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissue (nalt) in mouse responses to vaccines
Uploaded: 2012-08-01T12:00:00
Duration: 12 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines at JoVE.com

Поддержка была оказана Becton Dickinson технологий. Мнения, высказанные в настоящем документе, являются мнениями авторов и не претендует на отражать официальную политику правительства США. Исследование было проведено в соответствии с Законом животных и других федеральных законов и правил, относящихся к животным и экспериментов с участием животных и придерживаться принципов, изложенных в руководстве по уходу и использованию лабораторных животных, Национальный исследовательский совет, 1996 год. Учреждении, в котором это исследование было проведено полностью аккредитована Ассоциацией по оценке и аккредитации лаборатории Animal Care International.

<ol>
	<li>Wiley, J. A., Tighe, M. P., Harmsen, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Upper+respiratory+tract+resistance+to+influenza+infection+is+not+prevented+by+the+absence+of+either+nasal-associated+lymphoid+tissue+or+cervical+lymph+nodes.">Upper respiratory tract resistance to influenza infection is not prevented by the absence of either nasal-associated lymphoid tissue or cervical lymph nodes.</a> J. Immunol. 175, 3186-3196 (2005).</li><li>W, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intranasal+immunisation+with+conjugate+vaccine+protects+mice+from+systemic+and+respiratory+tract+infection+with+Pseudomonas+aeruginosa.">Intranasal immunisation with conjugate vaccine protects mice from systemic and respiratory tract infection with Pseudomonas aeruginosa.</a> Vaccine. 24, 4333-4342 (2006).</li><li>Fernandez, S., Cisney, E. D., Hall, S. I., Ulrich, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal+immunity+to+staphylococcal+toxic+shock+is+controlled+by+the+nasopharynx-associated+lymphoid+tissue.">Nasal immunity to staphylococcal toxic shock is controlled by the nasopharynx-associated lymphoid tissue.</a> Clin. Vaccine Immunol. 18, 667-675 (2011).</li><li>Asanuma, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mouse+nasal-associated+lymphoid+tissue.">Isolation and characterization of mouse nasal-associated lymphoid tissue.</a> J. Immunol. Methods. 202, 123-131 (1997).</li><li>Casteleyn, C., Broos, A. M., Simoens, P., Van den Broeck, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NALT+(nasal+cavity-associated+lymphoid+tissue)+in+the+rabbit.">NALT (nasal cavity-associated lymphoid tissue) in the rabbit.</a> Vet. Immunol. Immunopathol. 133, 212-218 (2010).</li><li>Debertin, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal-associated+lymphoid+tissue+(NALT):+frequency+and+localization+in+young+children.">Nasal-associated lymphoid tissue (NALT): frequency and localization in young children.</a> Clin. Exp. Immunol. 134, 503-507 (2003).</li><li>Csencsits, K. L., Jutila, M. A., Pascual, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal-associated+lymphoid+tissue:+phenotypic+and+functional+evidence+for+the+primary+role+of+peripheral+node+addressin+in+naïve+lymphocyte+adhesion+to+high+endothelial+venules+in+a+mucosal+site.">Nasal-associated lymphoid tissue: phenotypic and functional evidence for the primary role of peripheral node addressin in naïve lymphocyte adhesion to high endothelial venules in a mucosal site.</a> J. Immunol. 163, 1382-1389 (1999).</li><li>Zuercher, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal-associated+lymphoid+tissue+is+a+mucosal+inductive+site+for+virus-specific+humoral+and+cellular+immune+responses.">Nasal-associated lymphoid tissue is a mucosal inductive site for virus-specific humoral and cellular immune responses.</a> J. Immunol. 168, 1796-1803 (2002).</li><li>Park, H. S., Francis, K. P., Yu, J., Cleary, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membranous+cells+in+nasal-associated+lymphoid+tissue:+a+portal+of+entry+for+the+respiratory+mucosal+pathogen+group+A+streptococcus.">Membranous cells in nasal-associated lymphoid tissue: a portal of entry for the respiratory mucosal pathogen group A streptococcus.</a> J. Immunol. 171, 2532-2537 (2003).</li><li>Tyrer, P., Foxwell, A. R., Cripps, A. W., Apicella, M. A., Kyd, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+pattern+recognition+receptors+mediate+M-cell+uptake+of+a+gram-negative+bacterium.">Microbial pattern recognition receptors mediate M-cell uptake of a gram-negative bacterium.</a> Infect. Immun. 74, 625-631 (2006).</li><li>Wu, A. W., Russell, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nasal+lymphoid+tissue,+intranasal+immunization,+and+compartmentalization+of+the+common+mucosal+immune+system.">Nasal lymphoid tissue, intranasal immunization, and compartmentalization of the common mucosal immune system.</a> Immunol. Res. 16, 187-201 (1997).</li><li>Harmsen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+organogenesis+of+nasal-associated+lymphoid+tissue+(NALT)+occurs+independently+of+lymphotoxin-alpha+(LT+alpha)+and+retinoic+acid+receptor-related+orphan+receptor-gamma,+but+the+organization+of+NALT+is+LT+alpha+dependent.">Cutting edge: organogenesis of nasal-associated lymphoid tissue (NALT) occurs independently of lymphotoxin-alpha (LT alpha) and retinoic acid receptor-related orphan receptor-gamma, but the organization of NALT is LT alpha dependent.</a> J. Immunol. 168, 986-990 (2002).</li><li>Rangel-Moreno, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+CXC+chemokine+ligand+13,+CC+chemokine+ligand+(CCL)+19,+and+CCL21+in+the+organization+and+function+of+nasal-associated+lymphoid+tissue.">Role of CXC chemokine ligand 13, CC chemokine ligand (CCL) 19, and CCL21 in the organization and function of nasal-associated lymphoid tissue.</a> J. Immunol. 175, 4904-4913 (2005).</li><li>Morefield, G. L., Hawkins, L. D., Ishizaka, S. T., Kissner, T. L., Ulrich, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthetic+Toll-like+receptor+4+agonist+enhances+vaccine+efficacy+in+an+experimental+model+of+toxic+shock+syndrome.">Synthetic Toll-like receptor 4 agonist enhances vaccine efficacy in an experimental model of toxic shock syndrome.</a> Clin. Vaccine Immunol. 14, 1499-1504 (2007).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Мы представили коллективные методы разработки модели животных, получения биологических образцов и анализов для изучения NALT связанных иммунных реакций 1-4. Есть и другие факторы, чтобы рассмотреть в ходе выполнения этих методов. Стандартные стерильные методы хирургии и культуры тканей должны быть соблюдены. Сочетание антибактериальные и противогрибковые средства, используемые при выделении и культуры, а также поддержание стерилизовать инструменты, рабочая зона, и дезинфицировать вкус позволит снизить риск заражения. Слюна, носовые моет и аналогичные образцы слизистой секрецией должны быть проверены на предмет возможного загрязнения кровью, как сывороточные антитела, как правило, содержится в высоких концентрациях. Кроме того, слизистые выделения должны быть слегка разбавленный для анализа, поскольку более низкие концентрации антител, присутствующих в этих образцах по сравнению с сывороткой. Мыши должны быть теплыми непосредственно после операции, предварительновыход потенциал анестезии вызванной гипотермией. Альтернативные отдыха мыши на боку в течение послеоперационного восстановления, чтобы минимизировать нерегулярные дыхания. Хирургическая процедура является более эффективным с трех человек, работающих вместе для выполнения этих задач: одна выполняет операции, одна для оказания помощи в проведении открытым ртом, и одной обеспечить послеоперационный уход, мышей оправиться от наркоза. Необходимо использовать H &amp; E окрашивания черепной сечения в конце всех экспериментальных процедур или исследований для проверки успешности операции для каждой мыши. Возможные результаты операции являются: полное и двусторонним NALT абляции, неполное удаление или NALT нетронутыми. Потому что не все операции приведет к полной потере NALT, животных с остаточной или нетронутыми NALT может быть использован в качестве внутреннего контроля. Другим потенциальным результатом является то, что небо не удается полностью излечить, оставляя отверстие подключения носа и полости рта. Неполныйзаживление неба приведет к малому весу и нарушения развития, и эти люди должны быть исключены из исследования. Изучение вакцины ответы сначала с мышиной модели послужит созданию роль NALT в предполагаемый результат исследования (иммунного ответа, выживаемости и т.д.). Хирургическим удалением NALT облегчает определение носовой вклад в местных и системного иммунитета. Хирургический подход, описанный здесь, является наиболее прямой способ получения модели мыши лишенные NALT. Выберите нокаут мышах, как сообщается, отсутствие NALT, но эти животные также являются дефицит цитокинов и хемокинов важное значение для развития других вторичных лимфоидных тканей, и может питать дополнительные дефекты 12,13. Кроме того, методы, описанные здесь, были разработаны для изучения некоторых аспектов иммунных реакций, происходящих в носовые ходы. Наши экспериментальные результаты основаны на исследованиях с использованием всей верхней Палатоме от мыши на культуре ткани, хотя не исключено, что участки могут быть использованы. И, наконец, культурные модели NALT полезна для проведения экспериментов полностью в культуре ткани.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Нержавеющая сталь стерильные хирургические лезвия, № 11 </td><td> MILTEX </td><td> 4-311 </td><td></td></tr><tr><td> Рукоять ножа, № 3 </td><td> MILTEX </td><td> 4-7 </td><td></td></tr><tr><td> 48-луночных культуре клеток </td><td> Costar </td><td> 3548 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 11875-093 </td><td></td></tr><tr><td> Эмбриональной телячьей сыворотки, тепло инактивированная </td><td> Гибко / Invitrogen </td><td> 16000-044 </td><td> Окончательный Конц: 10% по объему в культуре средств массовой информации </td></tr><tr><td> Стрептомицина сульфата </td><td> Сигма </td><td> S9137 </td><td> Окончательный Конц: 100 мкг / мл </td></tr><tr><td> Пенициллин </td><td> Сигма </td><td> P7794 </td><td> Окончательный Конц: 100 UI / мл </td></tr><tr><td> Гентамицин </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G1397-10ML </td><td> Окончательный Конц: 50 мкг / мл </td></tr><tr><td> Fungizone </td><td> Гибко / Invitrogen </td><td> 15290-018 </td><td> Окончательный Конц: 1 мкг / мл </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H0887 </td><td> Окончательный Конц: 10 мМ </td></tr><tr><td> Трубы Эппендорф Микроцентрифуга </td><td> Эппендорф </td><td> 022364111 </td><td></td></tr><tr><td> Nutra-гель Черри ароматизированные мыши влажный корм </td><td> Био-Подавайте </td><td> S4798-TRAY </td><td></td></tr><tr><td> Metacam </td><td> Boehringer Ingelheim </td><td> 601531000 </td><td> Одна капля 1,5 мг / мл Устная Приостановка </td></tr><tr><td> Кетамин </td><td> Pfizer </td><td> 00856440301 </td><td> Окончательный Coпс: 6.06 мг / мл </td></tr><tr><td> Acepromazine </td><td> Vedco </td><td> VEDC207 </td><td> Окончательный Конц: 0,061 мг / мл </td></tr><tr><td> Ксилазин </td><td> Ллойд </td><td> 4811 </td><td> Окончательный Конц: 0,667 мг / мл </td></tr><tr><td> Puralube Vet мазь </td><td> Pharmaderm здоровья животных </td><td> 1621 </td><td></td></tr><tr><td> 0,9% раствор хлорида натрия инъекций USP </td><td> Бакстер </td><td> 2B1302 </td><td></td></tr><tr><td> 0,5 мм Microcurette </td><td> Roboz </td><td> RS-6350 </td><td></td></tr><tr><td> Тепловая единица Прижигание </td><td> Счетчик Гейгера </td><td> 150-S/150A-S </td><td></td></tr><tr><td> Жало ГТС, прямой изобразительных Loop </td><td> Счетчик Гейгера </td><td> 214 </td><td></td></tr><tr><td> Хирургические ножницы </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10% нейтральный буферный формалин </td><td> Сигма </td><td> HT501128 </td><td></td></tr><tr><td> Муравьиная кислота </td><td> Рыбак </td><td> A119P-4 </td><td> Смешайте 426 мл муравьиной кислоты в 1047 мл водопроводной воды, затем добавляют 45 мл Rexyn 101 (H) </td></tr><tr><td> Rexyn 101 (H) </td><td> Рыбак </td><td> R231-500 </td><td></td></tr><tr><td> Ткань-Tek VIP E150/E300 </td><td> Сакура </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ротари Микротом </td><td> Leica </td><td> RM2255 </td><td></td></tr><tr><td> Гематоксилин Майера </td><td> Сигма </td><td> MHS16-500ML </td><td></td></tr><tr><td> Гилл № 1 гематоксилин </td><td> Сигма </td><td> GHS116 </td><td></td></tr><tr><td> Eosin B </td><td> Сигма </td><td> 2853 </td><td></td></tr><tr><td> Microtainer сыворотки сепаратор </td><td> BD Medical </td><td> 365956 </td><td></td></tr><tr><td> Фосфатного буфера </td><td></td><td></td><td> 100 мМ NaH 2 PO 4, 140 мМ NaCl, рН 7,4 </td></tr><tr><td> Ингибитор протеазы коктейль, ЭДТА бесплатно </td><td> Thermo Scientific </td><td> 78415 </td><td></td></tr></tbody></table>

examining the role of nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissue (nalt) in mouse responses to vaccines

Носоглотки связанных лимфоретикулярной ткани (NALT) у людей, грызунов и других млекопитающих, способствуют иммунитета в носовых пазух 1-3. NALT два параллельных колоколообразной структур, расположенных в носовые проходы над твердого неба, и, как правило, считаются вторичными компонентами слизистой-лимфоидной системы 4-6. Расположенный в NALT дискретные отсеков и Т-лимфоциты перемежаются с антиген-представляющих дендритных клеток 4,7,8. Эти клетки окружены слоем клеток эпителиального интеркалированного М-клетки, которые отвечают за антиген поиск от поверхности слизистой оболочки дыхательных путей 9,10. Наивные лимфоцитов циркулирующей через NALT готовы ответить на первые встречи с возбудителей инфекций дыхательных путей 7. Хотя NALT исчезают люди в возрасте до двух лет, кольца и в аналогично построенных Вальдейерова в органах лимфатической продолжают сохраняться йroughout жизни 6. В отличие от людей, мышей сохранить NALT на протяжении всей жизни, обеспечивая удобную модель животного для изучения иммунных реакций, происходящих в придаточные пазухи носа 11. Культур одноклеточных суспензий NALT не практично из-за низкой урожайности мононуклеаров. Тем не менее, NALT биологии можно рассматривать экс культивирование естественных условиях интактного органа, и у этого метода есть дополнительное преимущество поддержания естественной структуры тканей. Ведь в естественных условиях исследования, генетические модели нокаутом представления дефектов ограничивается NALT в настоящее время отсутствуют в связи с плохим пониманием путь ее развития. Например, в то время как лимфотоксина-α мышей атрофировались NALT, патчи Пейера, периферические лимфатические узлы, фолликулярные дендритные клетки и других лимфоидных тканей также изменены в этих генетически модифицированных мышей 12,13. В качестве альтернативы мышам ген нокаутом, хирургическое удаление рermanently исключает NALT из носовой ход, не затрагивая другие ткани. В результате мышь модель была использована для установления связей между NALT и иммунные реакции на вакцины 1,3. Последовательный сбор сыворотки, слюна, носовые моет и вагинальных выделений необходимо для создания основы принимающих ответ на вакцинацию, в то время как иммунный ответ, происходящих непосредственно из NALT может быть подтверждено культуре ткани. Следующие процедуры наметить операции, культуры тканей и отбора образцов необходимо изучить местные и системные гуморальный иммунный ответ на интраназально (IN) вакцинации.

Watch this Scientific Journal Video about Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines at JoVE.com

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

Методы изучения вклада носоглотки связанных лимфоретикулярной ткани (NALT) для носа и системные иммунные реакции мышей на интраназальных вакцин описаны. Мы показываем, хирургической процедуры, чтобы установить NALT зависит от модели мыши и<em&gt; Бывший естественных условиях</em&gt; Культур извлеченных NALT.

Рассматривая роль носоглотки связанных лимфоретикулярных тканей (NALT) в мышь Ответы на вакцины

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Измерение бактериальной нагрузки и иммунного ответа в мышей, инфицированных Listeria моноцитогенес</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

Intranasal Administration of Recombinant Influenza Vaccines in Chimeric Mouse Models to Study Mucosal Immunity

Интраназального введения рекомбинантного гриппа вакцин в химерных мышей Модели для изучения слизистых оболочек

Vaccines are one of the greatest achievements of mankind, and have saved millions of lives over the last century. Paradoxically, little is known about the ...

Visualization of Twitching Motility and Characterization of the Role of the PilG in Xylella fastidiosa

Visualization of Twitching Motility and Characterization of the Role of the PilG in Xylella fastidiosa

Визуализация подергивания моторики и характеристика о роли<em&gt; PilG</em&gt; в<em&gt; Xylella fastidiosa</em

Xylella fastidiosa is a Gram-negative non-flagellated bacterium that causes a number of economically important diseases of plants. The twitching motility ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Нейтрофильная Выделение и анализ для определения их роли в клеточной лимфомы чувствительность к терапевтических агентов

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Модель переходной трансгенерации IL-8 для<em&gt; В Виво</em&gt; Долгосрочный мониторинг воспалительных реакций

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Overexpression and Purification of Human Cis-prenyltransferase in Escherichia coli

Сверхэкспрессия и очищение человека<em&gt; Cis</em&gt; -пренилтрансфераза в<em&gt; Escherichia coli</em

Prenyltransferases (PT) are a group of enzymes that catalyze chain elongation of allylic diphosphate using isopentenyl diphosphate (IPP) via multiple ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Изоляция Salmonella typhimurium-содержащих Phagosomes от макрофагов

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Immunization of Adult Zebrafish for the Preclinical Screening of DNA-based Vaccines

Иммунизации взрослых рыбок данио доклинические скрининга на основе ДНК вакцин

The interest in DNA-based vaccination has increased during the past two decades. DNA vaccination is based on the cloning of a sequence of a selected ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

Оценка хост возбудитель ответы и эффективность вакцины в мышей

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...

Bone Marrow Transplantation Platform to Investigate the Role of Dendritic Cells in Graft-versus-Host Disease

Платформа трансплантации костного мозга для изучения роли дендритных клеток в трансплантации против хост болезни

Allogeneic bone marrow transplantation (BMT) is an effective therapy for hematological malignancies due to the graft-versus-leukemia (GVL) effect to ...