Name: isolation and culture of rat embryonic neural cells: a quick protocol
Uploaded: 2012-05-24T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol at JoVE.com

نشكر يونا اليس للحصول على مساعدة التحرير. وأيد المشروع التي وصفها عدد جائزة R01MH079751 (PI: F. بيروتزي) من المعهد الوطني للصحة العقلية. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني للصحة العقلية أو المعاهد الوطنية للصحة.

1. بولي-D-ليسين (PDL): إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أضف 5 مل من عقيم O 2 DDH إلى 5 ملغ من PDL للحصول على حل الأوراق المالية من 1 ملغ / مل. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> خلط الأوراق المالية عن طريق حل pipetting عدة مرات. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدامها ...

<ol>
	<li>Aprea, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubulin-mediated+binding+of+human+immunodeficiency+virus-1+Tat+to+the+cytoskeleton+causes+proteasomal-dependent+degradation+of+microtubule-associated+protein+2+and+neuronal+damage.">Tubulin-mediated binding of human immunodeficiency virus-1 Tat to the cytoskeleton causes proteasomal-dependent degradation of microtubule-associated protein 2 and neuronal damage.</a> J. Neurosci. 26, 4054-4062 (2006).</li><li>Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+culture+of+rat+post-natal+and+fetal+brainstem+neurons.">Serum-free culture of rat post-natal and fetal brainstem neurons.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 120, 199-210 (2000).</li><li>Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+serum-free+culture+of+late+fetal+and+early+postnatal+rat+brainstem+neurons.">Method for serum-free culture of late fetal and early postnatal rat brainstem neurons.</a> Brain Res. Brain Res. Protoc. 6, 91-99 (2001).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing nerve cells. , (1998).</li><li>Eletto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+SNAP25+expression+by+HIV-1+Tat+involves+the+activity+of+mir-128a.">Inhibition of SNAP25 expression by HIV-1 Tat involves the activity of mir-128a.</a> J. Cell Physiol. 216, 764-770 (2008).</li><li>Gualco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGF-IR-dependent+expression+of+Survivin+is+required+for+T-antigen-mediated+protection+from+apoptosis+and+proliferation+of+neural+progenitors.">IGF-IR-dependent expression of Survivin is required for T-antigen-mediated protection from apoptosis and proliferation of neural progenitors.</a> Cell Death Differ. 17, 439-451 (2010).</li><li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+differentiation+of+adult+neuronal+progenitor+cells+transplanted+to+the+adult+brain.">Survival and differentiation of adult neuronal progenitor cells transplanted to the adult brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 11879-11883 (1995).</li><li>Keyser, D. O., Pellmar, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+transmission+in+the+hippocampus:+critical+role+for+glial+cells.">Synaptic transmission in the hippocampus: critical role for glial cells.</a> Glia. 10, 237-243 (1994).</li><li>Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+efficacy+enhanced+by+glial+cells+in+vitro.">Synaptic efficacy enhanced by glial cells in vitro.</a> Science. 277, 1684-1687 (1997).</li></ol>

ووصف طريقة تشريح وثقافة من الخلايا العصبية الفئران قرن آمون والقشرة هنا يتيح إجراء التجارب باستخدام الخلايا العصبية الثقافات نقي تقريبا نمت في المتوسط ​​محددة الصفات كيميائيا (الشكل 3). وعلى الرغم من بروتوكولات لزراعة الخلايا العصبية في مصل الدم النقي تقر...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> تركيز </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> 98٪ </td></tr><tr><td> B27 </td><td> 2٪ </td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> 0.5 ملم </td></tr></tbody></table> الجدول أولا Neurobasal/B27 المتوسطة كاملة. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> تركيز </td></tr><tr><td> جلوكوز </td><td> 16 ملم </td></tr><tr><td> سكر القصب </td><td> 22 ملم </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 ملي </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> 160 مم </td></tr><tr><td> بوكل </td><td> 5 ملم </td></tr><tr><td> نا 2 هبو 4 </td><td> 1 مم </td></tr><tr><td> KH 2 PO 2 </td><td> 0.22 ملي </td></tr><tr><td> جنتاميسين </td><td> 50 ميكروغرام / مل </td></TR&gt; <tr><td> Fungizone </td><td> 250 نانوغرام / مل </td></tr><tr><td> درجة الحموضة </td><td> 7.4 </td></tr><tr><td> الأسمولية </td><td> 320-330 mOsm </td></tr></tbody></table> الجدول الثاني. تشريح المتوسط. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> حجم (ميكرولتر) </td></tr><tr><td> Neurobasal/B27 المتوسطة كاملة </td><td> 240 </td></tr><tr><td> التريبان البقع الزرقاء بنسبة 0.4٪ </td><td> 250 </td></tr><tr><td> مجموع </td><td> 490 </td></tr></tbody></table> الجدول الثالث. 50X عد حل. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> شركة </td><td> القط. عدد </td></tr><tr><td> السبات E </td><td> Brainbits </td><td> 767171 </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Gibco، إينفيتروجن </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Gibco، إينفيتروجن </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> Fungizone </td><td> Gibco، إينفيتروجن </td><td> 15290-018 </td></tr><tr><td> جنتاميسين سلفات </td><td> سيجما ألدريتش </td><td> G1264 </td></tr><tr><td> Glutamax 200 ملي مول </td><td> Gibco، إينفيتروجن </td><td> 35050 </td></tr><tr><td> TrypLE اكسبريس ث / س أحمر الفينول </td><td> Gibco، إينفيتروجن </td><td> 12604 </td></tr><tr><td> السيتوزين-β-D-arabinofuranoside هيدروكلوريد </td><td> سيجما ألدريتش </td><td> C6645 </td></tr><tr><td> بولي-D-ليسين </td><td> سيجما ألدريتش </td><td> P6407 </td></tr><tr><td> Laminin 1 ملغ / مل </td><td> ميليبور </td><td> CC095 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> سيجما ألدريتش </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> التريبان البقع الزرقاء بنسبة 0.4٪ </td><td> Gibco، إينفيتروجن </td><td> 15250 </td></tr></tbody></جدول&gt; الجدول الرابع. الكواشف محددة. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> معدات </td><td> شركة </td><td> القط. عدد </td></tr><tr><td> ستيريو المجهر </td><td> أوليمبوس </td><td> SZ61 </td></tr><tr><td> كبير الملقط </td><td> FST </td><td> 11022-14 </td></tr><tr><td> غرامة ذات الرؤوس ملقط </td><td> موريا </td><td> MC40B </td></tr><tr><td> الدقيقة غرامة ذات الرؤوس ملقط </td><td> موريا </td><td> MC31 </td></tr><tr><td> أسلاك شائكة حادة مقص </td><td> Roboz </td><td> RS-6820 </td></tr><tr><td> الدقيقة مقص تشريح </td><td> FST </td><td> 91460-11 </td></tr><tr><td> الجزئي تشريح مقص منحني </td><td> FST </td><td> 14067-11 </td></tr><tr><td> زجاج 2 غرفة الشرائح </td><td> مختبر تيك </td><td> 154461 </td></tr><tr><td> 60 أطباق مم </td&gt; <td> دينار بحريني الصقر </td><td> 353002 </td></tr><tr><td> 100 ملم الأطباق </td><td> كورنينج </td><td> 430167 </td></tr><tr><td> 15 مل من أنابيب </td><td> دينار بحريني الصقر </td><td> 352099 </td></tr><tr><td> 1.5 مل البرد أنبوب قارورة </td><td> نونك </td><td> 375353 </td></tr></tbody></table> الجدول خامسا معدات محددة.

isolation and culture of rat embryonic neural cells: a quick protocol

نحن تصف طريقة سريعة لفصل الخلايا العصبية قرن آمون والثقافة أو من أجنة الفئران القشرية E15-17. ويمكن تطبيق هذا الإجراء بنجاح إلى العزلة من الفأر والخلايا العصبية الأولية الإنسان والأسلاف العصبية. تتم المحافظة على الخلايا العصبية في فصل المصل خالية المتوسطة تصل إلى عدة أسابيع. ويمكن استخدام هذه الثقافات لnucleofection، كيمياء سيتولوجية مناعية، الأحماض النووية الإعداد، وكذلك الكهربية. ويمكن أيضا أن أقدم الثقافات العصبية يمكن transfected مع معدل كفاءة جيدة من خلال تنبيغ lentiviral، وأقل كفاءة، مع فوسفات الكالسيوم أو للدهون، على أساس أساليب مثل lipofectamine.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol at JoVE.com

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

وصفنا منهجية السريع لعزل والثقافة الخلايا العصبية قرن آمون والقشرة من أجنة القوارض. هذا البروتوكول يسمح لنا لإجراء تجارب التي يلزم فيها الثقافات العصبية نقي تقريبا.

العزلة والثقافة من خلايا الفئران العصبية الجنينية: بروتوكول سريعة

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

العزل والتوسع في الخلايا الجذعية العصبية الكبار باستخدام الفحص Neurosphere

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

تأسيس الخلايا الجذعية الجنينية الماوس العصبية الثقافة باستخدام الفحص Neurosphere

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

العصبية تشكيل مستعمرة الفحص الخلوي : إن الفحص تميز بحسن نية الخلايا الجذعية العصبية من الخلايا العصبية السلف

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

العزلة وثقافة العصبية الخلايا الجذعية من بصيلات الشعر كريست الإنسان

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Lectin القائم على عزل وثقافة حركية مماثلة الجنينية الماوس

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

العزلة والثقافة من الخلايا العصبية كريست من الأنبوبة العصبية الجنينية الفئران

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

تشريح والثقافة، وتحليل<em&gt; القيطم المورق</em&gt; الأنسجة الجنينية الشبكية

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

العزلة والثقافة من الخلايا البطانية من الجنينية الدماغ المقدم

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

ماوس واحدة، واثنين من الثقافات: العزلة وثقافة الكبار الخلايا الجذعية العصبية من المناطق العصبية اثنان من الفئران الفردية

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...