Name: isolation and culture of rat embryonic neural cells: a quick protocol
Uploaded: 2012-05-24T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol at JoVE.com

אנו מודים jonna אליס לסיוע המערכת. הפרויקט המתואר נתמך על ידי מספר פרס R01MH079751 (PI: פ Peruzzi) מהמכון הלאומי לבריאות הנפש. התוכן הוא באחריות הבלעדית של הכותבים ולא בהכרח מייצגים את הדעות הרשמיות של המכון הלאומי לבריאות הנפש או מכוני הבריאות הלאומיים.

1. פולי-D-ליזין (PDL): הכנת <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף 5 מ&quot;ל סטרילי DDH 2 O ל 5 מ&quot;ג של PDL להשיג פתרון מלאי של 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מערבבים פתרון המניות על ידי pipetting מספר פעמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להשתמש מיד או לא...

<ol>
	<li>Aprea, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubulin-mediated+binding+of+human+immunodeficiency+virus-1+Tat+to+the+cytoskeleton+causes+proteasomal-dependent+degradation+of+microtubule-associated+protein+2+and+neuronal+damage.">Tubulin-mediated binding of human immunodeficiency virus-1 Tat to the cytoskeleton causes proteasomal-dependent degradation of microtubule-associated protein 2 and neuronal damage.</a> J. Neurosci. 26, 4054-4062 (2006).</li><li>Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+culture+of+rat+post-natal+and+fetal+brainstem+neurons.">Serum-free culture of rat post-natal and fetal brainstem neurons.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 120, 199-210 (2000).</li><li>Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+serum-free+culture+of+late+fetal+and+early+postnatal+rat+brainstem+neurons.">Method for serum-free culture of late fetal and early postnatal rat brainstem neurons.</a> Brain Res. Brain Res. Protoc. 6, 91-99 (2001).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing nerve cells. , (1998).</li><li>Eletto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+SNAP25+expression+by+HIV-1+Tat+involves+the+activity+of+mir-128a.">Inhibition of SNAP25 expression by HIV-1 Tat involves the activity of mir-128a.</a> J. Cell Physiol. 216, 764-770 (2008).</li><li>Gualco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGF-IR-dependent+expression+of+Survivin+is+required+for+T-antigen-mediated+protection+from+apoptosis+and+proliferation+of+neural+progenitors.">IGF-IR-dependent expression of Survivin is required for T-antigen-mediated protection from apoptosis and proliferation of neural progenitors.</a> Cell Death Differ. 17, 439-451 (2010).</li><li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+differentiation+of+adult+neuronal+progenitor+cells+transplanted+to+the+adult+brain.">Survival and differentiation of adult neuronal progenitor cells transplanted to the adult brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 11879-11883 (1995).</li><li>Keyser, D. O., Pellmar, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+transmission+in+the+hippocampus:+critical+role+for+glial+cells.">Synaptic transmission in the hippocampus: critical role for glial cells.</a> Glia. 10, 237-243 (1994).</li><li>Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+efficacy+enhanced+by+glial+cells+in+vitro.">Synaptic efficacy enhanced by glial cells in vitro.</a> Science. 277, 1684-1687 (1997).</li></ol>

שיטת לנתיחה והתרבות של נוירונים בהיפוקמפוס של חולדות ועל קליפת המוח המתואר כאן מאפשר ביצוע ניסויים באמצעות תרביות נוירונים טהורים כמעט שגודלו בינוני הגדרה כימית (איור 3). אף על פי פרוטוקולים של נוירונים culturing טהורים כמעט בסרום ללא מדיה תוארו בעבר 2,3,4, י...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> ריכוז </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> 98% </td></tr><tr><td> B27 </td><td> 2% </td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> 0.5 מ&quot;מ </td></tr></tbody></table> לוח ט Neurobasal/B27 שלם בינוני. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> ריכוז </td></tr><tr><td> גלוקוז </td><td> 16 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> סוכרוז </td><td> 22 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 mM </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 160 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 5 מ&quot;מ </td></tr><tr><td> Na 2 HPO 4 </td><td> 1 mM </td></tr><tr><td> KH 2 PO 2 </td><td> 0.22 mM </td></tr><tr><td> גנטמיצין </td><td> 50 מיקרוגרם / מ&quot;ל </td></tr&gt; <tr><td> Fungizone </td><td> 250 ng / mL </td></tr><tr><td> ה-pH </td><td> 7.4 </td></tr><tr><td> Osmolarity </td><td> 320-330 mOsm </td></tr></tbody></table> לוח ב. דיסקציה בינוני. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> נפח (μl) </td></tr><tr><td> Neurobasal/B27 שלם בינוני </td><td> 240 </td></tr><tr><td> Trypan כתם כחול 0.4% </td><td> 250 </td></tr><tr><td> סך הכל </td><td> 490 </td></tr></tbody></table> לוח ג. 50x ספירת פתרון. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> חברה </td><td> החתול. מספר </td></tr><tr><td> שינה E </td><td> Brainbits </td><td> 767171 </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> Fungizone </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 15290-018 </td></tr><tr><td> גנטמיצין סולפט </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> G1264 </td></tr><tr><td> Glutamax 200 מ&quot;מ </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 35050 </td></tr><tr><td> TrypLE Express W / O פנול אדום </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 12604 </td></tr><tr><td> ציטוסין-β-D-arabinofuranoside hydrochloride </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> C6645 </td></tr><tr><td> פולי-D-ליזין </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> P6407 </td></tr><tr><td> Laminin 1 מ&quot;ג / מ&quot;ל </td><td> Millipore </td><td> CC095 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> Trypan כתם כחול 0.4% </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 15250 </td></tr></tbody></table&gt; לוח ד. חומרים כימיים מסוימים. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> ציוד </td><td> חברה </td><td> החתול. מספר </td></tr><tr><td> סטריאו מיקרוסקופ </td><td> אולימפוס </td><td> SZ61 </td></tr><tr><td> מלקחיים גדולים </td><td> FST </td><td> 11022-14 </td></tr><tr><td> בסדר שקצהו מלקחיים </td><td> מוריה </td><td> MC40B </td></tr><tr><td> מיקרו בסדר שקצהו מלקחיים </td><td> מוריה </td><td> MC31 </td></tr><tr><td> חדות כתער מספריים </td><td> Roboz </td><td> RS-6820 </td></tr><tr><td> מספריים המבתרים מיקרו </td><td> FST </td><td> 91460-11 </td></tr><tr><td> מיקרו הביתור מספריים עקומים </td><td> FST </td><td> 14067-11 </td></tr><tr><td> זכוכית 2-קאמרית שקופיות </td><td> Lab-Tek </td><td> 154461 </td></tr><tr><td> 60 מנות מ&quot;מ </td&gt; <td> BD פלקון </td><td> 353002 </td></tr><tr><td> 100 מנות מ&quot;מ </td><td> קורנינג </td><td> 430167 </td></tr><tr><td> 15 מ&quot;ל צינורות </td><td> BD פלקון </td><td> 352099 </td></tr><tr><td> 1.5 מ&quot;ל cryo-צינור בקבוקון </td><td> Nunc </td><td> 375353 </td></tr></tbody></table> לוח ו &#39;ספציפית ציוד.

isolation and culture of rat embryonic neural cells: a quick protocol

אנו מתארים שיטה מהירה לנתק ותרבות נוירונים בהיפוקמפוס או קליפת המוח של E15-17 עוברי עכברים. ההליך יכול להיות מיושם בהצלחה את הבידוד של העכבר הנוירונים העיקריים אדם אבות עצביים. נוירונים ניתק נשמרות בינוני סרום ללא עד מספר שבועות. תרבויות אלה יכולים לשמש nucleofection, immunocytochemistry, חומצות גרעין הכנה, כמו גם electrophysiology. תרבויות נוירונים מבוגרים יותר ניתן גם transfected עם שיעור יעיל על ידי התמרה lentiviral ו, פחות יעיל, עם סידן פוספט או שומנים על בסיס שיטות כגון lipofectamine.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol at JoVE.com

Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

אנו מתארים מתודולוגיה מהירה לבודד ותרבות נוירונים בהיפוקמפוס ואת קליפת המוח של עוברי מכרסמים. פרוטוקול זה מאפשר לנו לבצע ניסויים שבהם תרבויות עצביים כמעט טהור נדרשים.

בידוד והתרבות של תאים עובריים עצביים עכברוש: ​​פרוטוקול מהיר

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

Dissection והתרבות של נוירונים Commissural מחוט השדרה עובריים

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

בידוד הרחבה של תאים בוגרים עכבר גזע עצביים שימוש Assay Neurosphere

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

הקמת עכבר עובריים גזע עצביים תרבית תאים באמצעות Assay Neurosphere

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

עצבית, המושבה יצירת Assay נייד: Assay להפלות בונה תאים בתום גזע עצביים מן ובתאים עצבית

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

בידוד ותרבות של תאי גזע עצביים קרסט מזקיקי שיער אנושיים

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

לקטינים מבוססי בידוד תרבות Motoneurons עכבר עובריים

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

בידוד והתרבות של תאים עצביים לפסגה מהצינור עובריים עצבית Murine

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, תרבות וניתוח של<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; רקמת רשתית עוברית

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

בידוד והתרבות של תאי האנדותל מהמוח הקדמי עוברי

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

עכבר אחד, שתי תרבויות: בידוד והתרבות של תאי גזע עצביים למבוגרים משני האזורים העצביים של עכברים בודדים

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...

בידוד והתרבות של תאים עובריים עצביים עכברוש: ​​פרוטוקול מהיר

בידוד והתרבות של תאים עובריים עצביים עכברוש: פרוטוקול מהיר