Name: isolation and culture of rat embryonic neural cells: a quick protocol
Uploaded: 2012-05-24T12:00:00
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हम Jonna एलिस संपादकीय सहायता के लिए धन्यवाद. मानसिक स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान से: वर्णित परियोजना पुरस्कार R01MH079751 संख्या (एफ Peruzzi PI) के द्वारा समर्थित किया गया है. सामग्री केवल लेखकों की ज़िम्मेदारी है और मानसिक स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान या स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान के आधिकारिक विचार जरूरी नहीं प्रतिनिधित्व करते हैं.

1. पाली - डी - Lysine (PDL): तैयारी <ol><li> PDL के 5 मिलीग्राम 1 मिलीग्राम / एमएल स्टॉक समाधान प्राप्त करने के लिए बाँझ DDH 2 हे 5 मिलीलीटर जोड़ें. </li><li> कई बार pipetting द्वारा शेयर समाधान मिश्रण. </li><li> तुरंत का उपयोग करें या 2-8 पर पाल...

<ol>
	<li>Aprea, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubulin-mediated+binding+of+human+immunodeficiency+virus-1+Tat+to+the+cytoskeleton+causes+proteasomal-dependent+degradation+of+microtubule-associated+protein+2+and+neuronal+damage.">Tubulin-mediated binding of human immunodeficiency virus-1 Tat to the cytoskeleton causes proteasomal-dependent degradation of microtubule-associated protein 2 and neuronal damage.</a> J. Neurosci. 26, 4054-4062 (2006).</li><li>Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+culture+of+rat+post-natal+and+fetal+brainstem+neurons.">Serum-free culture of rat post-natal and fetal brainstem neurons.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 120, 199-210 (2000).</li><li>Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+serum-free+culture+of+late+fetal+and+early+postnatal+rat+brainstem+neurons.">Method for serum-free culture of late fetal and early postnatal rat brainstem neurons.</a> Brain Res. Brain Res. Protoc. 6, 91-99 (2001).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing nerve cells. , (1998).</li><li>Eletto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+SNAP25+expression+by+HIV-1+Tat+involves+the+activity+of+mir-128a.">Inhibition of SNAP25 expression by HIV-1 Tat involves the activity of mir-128a.</a> J. Cell Physiol. 216, 764-770 (2008).</li><li>Gualco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGF-IR-dependent+expression+of+Survivin+is+required+for+T-antigen-mediated+protection+from+apoptosis+and+proliferation+of+neural+progenitors.">IGF-IR-dependent expression of Survivin is required for T-antigen-mediated protection from apoptosis and proliferation of neural progenitors.</a> Cell Death Differ. 17, 439-451 (2010).</li><li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+differentiation+of+adult+neuronal+progenitor+cells+transplanted+to+the+adult+brain.">Survival and differentiation of adult neuronal progenitor cells transplanted to the adult brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 11879-11883 (1995).</li><li>Keyser, D. O., Pellmar, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+transmission+in+the+hippocampus:+critical+role+for+glial+cells.">Synaptic transmission in the hippocampus: critical role for glial cells.</a> Glia. 10, 237-243 (1994).</li><li>Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+efficacy+enhanced+by+glial+cells+in+vitro.">Synaptic efficacy enhanced by glial cells in vitro.</a> Science. 277, 1684-1687 (1997).</li></ol>

विच्छेदन और चूहे hippocampal और cortical न्यूरॉन्स की संस्कृति की विधि यहाँ वर्णित लगभग शुद्ध neuronal एक रासायनिक परिभाषित मध्यम (चित्रा 3) में हो संस्कृतियों का उपयोग कर प्रयोगों प्रदर्शन की अनुमति देता है. हाल?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक </td><td> एकाग्रता </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> 98% </td></tr><tr><td> B27 </td><td> 2% </td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> 0.5 मिमी </td></tr></tbody></table> टेबल मैं Neurobasal/B27 पूरा मध्यम. <table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक </td><td> एकाग्रता </td></tr><tr><td> ग्लूकोज </td><td> 16 मिमी </td></tr><tr><td> Sucrose </td><td> 22 मिमी </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 मिमी </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 160 मिमी </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 5 मिमी </td></tr><tr><td> ना दो चार HPO </td><td> 1 मिमी </td></tr><tr><td> के.एच. दो दो पीओ </td><td> 0.22 मिमी </td></tr><tr><td> Gentamicin </td><td> 50 / μg मिलीलीटर </td></tr&gt; <tr><td> Fungizone </td><td> 250 एनजी / मिली </td></tr><tr><td> पीएच </td><td> 7.4 </td></tr><tr><td> Osmolarity </td><td> 320-330 mOsm </td></tr></tbody></table> टेबल द्वितीय. विच्छेदन मध्यम. <table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक </td><td> मात्रा (μl) </td></tr><tr><td> Neurobasal/B27 पूरा मध्यम </td><td> 240 </td></tr><tr><td> Trypan ब्लू 0.4% दाग </td><td> 250 </td></tr><tr><td> कुल </td><td> 490 </td></tr></tbody></table> टेबल तृतीय. 50x समाधान गिनती. <table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक </td><td> कंपनी </td><td> बिल्ली. संख्या </td></tr><tr><td> सीतनिद्रा में होना ई </td><td> Brainbits </td><td> 767,171 </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> Fungizone </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 15290-018 </td></tr><tr><td> Gentamicin सल्फेट </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> G1264 </td></tr><tr><td> Glutamax 200 मिमी </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 35,050 </td></tr><tr><td> TrypLE एक्सप्रेस w / ओ phenol के लाल </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 12,604 </td></tr><tr><td> साइटोसिन β-D-arabinofuranoside हाइड्रोक्लोराइड </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> C6645 </td></tr><tr><td> पाली-D-Lysine </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> P6407 </td></tr><tr><td> Laminin 1 मिलीग्राम / एमएल </td><td> Millipore </td><td> CC095 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> Trypan ब्लू 0.4% दाग </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> +१५,२५० </td></tr></tbody></p&gt; तालिका चतुर्थ. विशिष्ट अभिकर्मकों. <table border="1"><tbody><tr><td> उपकरण </td><td> कंपनी </td><td> बिल्ली. संख्या </td></tr><tr><td> स्टीरियो माइक्रोस्कोप </td><td> ओलिंप </td><td> SZ61 </td></tr><tr><td> बड़े संदंश </td><td> FST </td><td> 11022-14 </td></tr><tr><td> ठीक इत्तला दे दी संदंश </td><td> मोरिया </td><td> MC40B </td></tr><tr><td> माइक्रो ठीक इत्तला दे दी संदंश </td><td> मोरिया </td><td> MC31 </td></tr><tr><td> उस्तरा तेज कैंची </td><td> Roboz </td><td> RS-६,८२० </td></tr><tr><td> माइक्रो विदारक कैंची </td><td> FST </td><td> 91460-11 </td></tr><tr><td> माइक्रो घुमावदार कैंची विदारक </td><td> FST </td><td> 14067-11 </td></tr><tr><td> ग्लास 2 - कक्ष स्लाइड </td><td> लैब टेक </td><td> +१५४४६१ </td></tr><tr><td> 60 मिमी व्यंजन </td&gt; <td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 353,002 </td></tr><tr><td> 100 मिमी व्यंजन </td><td> कोर्निंग </td><td> 430,167 </td></tr><tr><td> 15 मिलीलीटर ट्यूबों </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> ३५२०९९ </td></tr><tr><td> 1.5 मिलीग्राम शीशी क्रायो - ट्यूब </td><td> Nunc </td><td> 375,353 </td></tr></tbody></table> टेबल वी. विशिष्ट उपकरण.

isolation and culture of rat embryonic neural cells: a quick protocol

हम अलग कर देना और संस्कृति E15-17 चूहा भ्रूण से hippocampal या cortical न्यूरॉन्स के लिए एक त्वरित विधि का वर्णन कर रहे हैं. माउस और मानव प्राथमिक न्यूरॉन्स और तंत्रिका progenitors के अलगाव की प्रक्रिया सफलतापूर्वक लागू किया जा सकता है. Dissociated न्यूरॉन्स सीरम मुक्त मध्यम में रखा जाता है कई हफ्तों के लिए. इन संस्कृतियों nucleofection, immunocytochemistry, nucleic एसिड तैयारी के रूप में के रूप में अच्छी तरह से इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. वृध्द neuronal संस्कृतियों भी से lentiviral पारगमन द्वारा एक अच्छा दक्षता दर और कम कुशलता, कैल्शियम फॉस्फेट या lipofectamine जैसे लिपिड आधारित विधियों के साथ के साथ ट्रांसफ़ेक्ट किया जा सकता है.

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Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

हम एक तेजी से अलग और संस्कृति कृंतक भ्रूण से hippocampal और cortical न्यूरॉन्स कार्यप्रणाली का वर्णन. इस प्रोटोकॉल हमें प्रयोगों में जो लगभग शुद्ध neuronal संस्कृतियों की आवश्यकता है प्रदर्शन के लिए अनुमति देता है.

अलगाव और चूहा भ्रूण तंत्रिका कोशिकाओं की संस्कृति: एक त्वरित प्रोटोकॉल

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

विच्छेदन और भ्रूणीय स्पाइनल कॉर्ड से Commissural न्यूरॉन्स की संस्कृति

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

अलगाव और वयस्क माउस तंत्रिका स्टेम सेल के विस्तार Neurosphere परख का उपयोग

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

भ्रूण माउस तंत्रिका स्टेम सेल संस्कृति की स्थापना Neurosphere परख का उपयोग

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

सेल परख बनाने तंत्रिका कालोनी: एक सदाशयी तंत्रिका पूर्वपुस्र्ष कोशिकाओं से तंत्रिका स्टेम सेल भेदभाव की परख

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

अलगाव और तंत्रिका शिखा मानव बालों के रोम से स्टेम सेल के संस्कृति

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

Lectin आधारित और माउस भ्रूणीय motoneurons के अलगाव संस्कृति

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

अलगाव और भ्रूण murine तंत्रिका ट्यूब से तंत्रिका शिखा कोशिकाओं की संस्कृति

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

विच्छेदन, संस्कृति, और विश्लेषण<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; भ्रूण ऊतक रेटिना

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

भ्रूण अग्रमस्तिष्क से endothelial कोशिकाओं के अलगाव और संस्कृति

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

एक माउस, दो संस्कृतियों: अलगाव और वयस्क तंत्रिका की संस्कृति व्यक्तिगत चूहों के दो तंत्रिकाजन्य क्षेत्रों से स्टेम सेल

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...