Name: isolation and culture of rat embryonic neural cells: a quick protocol
Uploaded: 2012-05-24T12:00:00
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我々は編集支援のためにJonnaエリスに感謝します。国立精神衛生研究所から：説明プロジェクトが受賞番号R01MH079751（F.ペルッツィPI）によってサポートされていました。内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしも国立精神衛生研究所や国立衛生研究所の公式見解を示すものではありません。

1。ポリ-D-リジン（PDL）：準備<ol><li> 1 mg / mlのストック溶液を得るためにPDLの5mgに無菌のddH 2 Oの5ミリリットルを追加します。 </li><li>数回ピペッティングしてストック溶液を混ぜる。 </li><li>すぐに使用するか、または2-8ポリ-D-リジン溶液℃で保存してください。 </li></ol> 2。ポリ-D-リジン（PDL）：コーティングプラスチック細胞培養皿<ol><li>滅菌のddH 2 Oで1...

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	<li>Aprea, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubulin-mediated+binding+of+human+immunodeficiency+virus-1+Tat+to+the+cytoskeleton+causes+proteasomal-dependent+degradation+of+microtubule-associated+protein+2+and+neuronal+damage.">Tubulin-mediated binding of human immunodeficiency virus-1 Tat to the cytoskeleton causes proteasomal-dependent degradation of microtubule-associated protein 2 and neuronal damage.</a> J. Neurosci. 26, 4054-4062 (2006).</li><li>Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+culture+of+rat+post-natal+and+fetal+brainstem+neurons.">Serum-free culture of rat post-natal and fetal brainstem neurons.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 120, 199-210 (2000).</li><li>Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+serum-free+culture+of+late+fetal+and+early+postnatal+rat+brainstem+neurons.">Method for serum-free culture of late fetal and early postnatal rat brainstem neurons.</a> Brain Res. Brain Res. Protoc. 6, 91-99 (2001).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing nerve cells. , (1998).</li><li>Eletto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+SNAP25+expression+by+HIV-1+Tat+involves+the+activity+of+mir-128a.">Inhibition of SNAP25 expression by HIV-1 Tat involves the activity of mir-128a.</a> J. Cell Physiol. 216, 764-770 (2008).</li><li>Gualco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGF-IR-dependent+expression+of+Survivin+is+required+for+T-antigen-mediated+protection+from+apoptosis+and+proliferation+of+neural+progenitors.">IGF-IR-dependent expression of Survivin is required for T-antigen-mediated protection from apoptosis and proliferation of neural progenitors.</a> Cell Death Differ. 17, 439-451 (2010).</li><li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+differentiation+of+adult+neuronal+progenitor+cells+transplanted+to+the+adult+brain.">Survival and differentiation of adult neuronal progenitor cells transplanted to the adult brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 11879-11883 (1995).</li><li>Keyser, D. O., Pellmar, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+transmission+in+the+hippocampus:+critical+role+for+glial+cells.">Synaptic transmission in the hippocampus: critical role for glial cells.</a> Glia. 10, 237-243 (1994).</li><li>Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+efficacy+enhanced+by+glial+cells+in+vitro.">Synaptic efficacy enhanced by glial cells in vitro.</a> Science. 277, 1684-1687 (1997).</li></ol>

ここで説明したラット海馬および皮質ニューロンの解剖と文化の方法は化学的に定義された媒体（ 図3）で成長し、ほぼ純粋な神経細胞の培養物を用いて実験を行うことができます。無血清培地で培養し、ほぼ純粋なニューロンのプロトコルは以前に2,3,4を説明してきたが、我々の方法で行われた重要な変更があります。従来のプロトコルから別の（すなわち、バンカー?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬 </td><td> 濃度 </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> 98パーセント</td></tr><tr><td> B27 </td><td>二パーセント</td></tr><tr><td>グルタミン</td><td> 0.5mMの</td></tr></tbody></table> 表I. Neurobasal/B27完全培地 。 <table border="1"><tbody><tr><td> 試薬 </td><td> 濃度 </td></tr><tr><td>グルコース</td><td> 16mMの</td></tr><tr><td>スクロース</td><td> 22 mmの</td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10mMの</td></tr><tr><td> NaClを</td><td> 160 mMの</td></tr><tr><td>塩化カリウム</td><td> 5mMの</td></tr><tr><td>のNa 2 HPO 4 </td><td> 1mMの</td></tr><tr><td> KH 2 PO 2 </td><td> 0.22 mMの</td></tr><tr><td>ゲンタマイシン</td><td> 50μg/ mlの</td></TR&gt; <tr><td>ファンギゾン</td><td> 250 ng / mlの</td></tr><tr><td> pHは</td><td> 7.4 </td></tr><tr><td>オスモル濃度</td><td> 320から330浸透圧</td></tr></tbody></table> 表II。解剖媒体 。 <table border="1"><tbody><tr><td> 試薬 </td><td> 量（μL） </td></tr><tr><td> Neurobasal/B27完全培地</td><td> 240 </td></tr><tr><td>トリパンブルーは0.4％の染色</td><td> 250 </td></tr><tr><td>合計</td><td> 490 </td></tr></tbody></table> 表III。ソリューションを数える50倍 。 <table border="1"><tbody><tr><td> 試薬 </td><td> 会社 </td><td> 猫。数 </td></tr><tr><td> HibernateはE </td><td> Brainbits </td><td> 767171 </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Gibco社、Invitrogen社</td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Gibco社、Invitrogen社</td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td>ファンギゾン</td><td> Gibco社、Invitrogen社</td><td> 15290-018 </td></tr><tr><td>硫酸ゲンタマイシン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> G1264 </td></tr><tr><td>グルタミン200mMの</td><td> Gibco社、Invitrogen社</td><td> 35050 </td></tr><tr><td> TrypLE ExpressのW / Oフェノールレッド</td><td> Gibco社、Invitrogen社</td><td> 12604 </td></tr><tr><td>シトシン-β-D-アラビノフラノシド塩酸塩</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> C6645 </td></tr><tr><td>ポリ-D-リジン</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> P6407 </td></tr><tr><td>ラミニン1 mg / mlの</td><td>ミリポア</td><td> CC095 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> H3375 </td></tr><tr><td>トリパンブルーは0.4％の染色</td><td> Gibco社、Invitrogen社</td><td> 15250 </td></tr></tbody></テーブル&gt; 表IV。特定の試薬 ​​が含まれています 。 <table border="1"><tbody><tr><td> 機器 </td><td> 会社 </td><td> 猫。数 </td></tr><tr><td>ステレオ顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> SZ61 </td></tr><tr><td>大鉗子</td><td> FST </td><td> 11022から14 </td></tr><tr><td>先の細いピンセット</td><td>モリア</td><td> MC40B </td></tr><tr><td>マイクロ先の細いピンセット</td><td>モリア</td><td> MC31 </td></tr><tr><td>鋭いはさみ</td><td> Roboz </td><td> RS-6820 </td></tr><tr><td>ミクロ解剖はさみ</td><td> FST </td><td> 91460から11 </td></tr><tr><td> Microは、湾曲したハサミの解剖</td><td> FST </td><td> 14067から11 </td></tr><tr><td>ガラス2 - チャンバースライド</td><td>ラボ·テック</td><td> 154461 </td></tr><tr><td> 60 mmの皿</td&gt; <td> BDファルコン</td><td> 353002 </td></tr><tr><td> 100ミリメートル料理</td><td>コー​​ニング</td><td> 430167 </td></tr><tr><td> 15 mlチューブ</td><td> BDファルコン</td><td> 352099 </td></tr><tr><td> 1.5ミリリットルクライオチューブバイアル</td><td>ヌンク</td><td> 375353 </td></tr></tbody></table> 表V.特定の機器 。

isolation and culture of rat embryonic neural cells: a quick protocol

我々は、E15-17ラットの胚から海馬または皮質ニューロンを分離し、培養するための簡単​​な方法を記述しています。手順は、マウスとヒトの一次ニューロンと神経前駆細胞の分離に正常に適用することができます。解離ニューロンは、数週間に、無血清培地に維持されます。これらの培養物は、ヌクレオ、免疫細胞化学、核酸の調製と同様に、電気生理学的に使用することができます。古いニューロンの培養物は、またリン酸カルシウムや、リポフェクトアミンなどの脂質ベースの方法で、効率は低下し、レンチウイルス形質導入により効率の良いレートでトランスフェクトすることができます。

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Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

我々は、齧歯類の胚から海馬および皮質ニューロンを分離、培養するための迅速な方法論を記述します。このプロトコルは、私たちはほぼ純粋な神経細胞の培養が必要とされる実験を行うことができます。

ラット胚神経細胞の分離と文化：クイックプロトコル

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

胚の脊髄から交連ニューロンの解剖と文化

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

ニューロスフェアのアッセイを使用して成体マウス神経幹細胞の単離と拡大

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

ニューロスフェアのアッセイを使用してマウス胎児神経幹細胞培養の確立

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

神経コロニー形成細胞アッセイ：神経前駆細胞から善意の神経幹細胞を区別するアッセイ

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

人間の毛包から神経堤幹細胞の単離および培養

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

マウス胚の運動ニューロンのレクチンに基づく分離と文化

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

胎児マウス神経管から神経堤細胞の単離および培養

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

の解離、文化、および分析<em&gt;アフリカツメガエル</em&gt;胚性網膜組織

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

胚前脳からの内皮細胞の単離および培養

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

マウスを一回、二つの文化：個々のマウスの二つの神経原性のゾーンから成体神経幹細胞の単離および培養

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...