Name: isolation and culture of rat embryonic neural cells: a quick protocol
Uploaded: 2012-05-24T12:00:00
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우리는 편집 지원 Jonna 엘리스 감사드립니다. 정신 건강의 국립 연구소에서 : 설명이 프로젝트는 보너스 번호 R01MH079751 (F. Peruzzi PI)에 의해 지원되었다. 내용은 전적으로 저자의 책임이며 반드시 정신 건강의 국립 연구소 또는 국립 보건원의 공식 견해를 대변하지 않습니다.

1. 폴리-D-라이신 (PDL) : 준비 <ol><li> 1 MG / ML의 주식 솔루션을 얻기 위해 PDL의 5 MG로 멸균 ddH 2 O 5 ML을 추가합니다. </li><li> 여러 차례 pipetting하여 주식 솔루션을 섞는다. </li><li> 즉시 사용하거나 2-8로 폴리-D-라이신 솔루션을 저장할 ° C. </li></ol> 2. 폴리-D-라이신 (PDL) : 코팅 플라스틱 세포 배양 접시 <ol><li> 멸균 ddH 2 O을 갖춘 10 μg / ML의 최종 농도로 PDL 주식 솔루션...

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	<li>Aprea, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubulin-mediated+binding+of+human+immunodeficiency+virus-1+Tat+to+the+cytoskeleton+causes+proteasomal-dependent+degradation+of+microtubule-associated+protein+2+and+neuronal+damage.">Tubulin-mediated binding of human immunodeficiency virus-1 Tat to the cytoskeleton causes proteasomal-dependent degradation of microtubule-associated protein 2 and neuronal damage.</a> J. Neurosci. 26, 4054-4062 (2006).</li><li>Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+culture+of+rat+post-natal+and+fetal+brainstem+neurons.">Serum-free culture of rat post-natal and fetal brainstem neurons.</a> Brain Res. Dev. Brain Res. 120, 199-210 (2000).</li><li>Kivell, B. M., McDonald, F. J., Miller, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+serum-free+culture+of+late+fetal+and+early+postnatal+rat+brainstem+neurons.">Method for serum-free culture of late fetal and early postnatal rat brainstem neurons.</a> Brain Res. Brain Res. Protoc. 6, 91-99 (2001).</li><li>Brewer, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+B27/neurobasal+medium+supports+differentiated+growth+of+neurons+from+the+striatum,+substantia+nigra,+septum,+cerebral+cortex,+cerebellum,+and+dentate+gyrus.">Serum-free B27/neurobasal medium supports differentiated growth of neurons from the striatum, substantia nigra, septum, cerebral cortex, cerebellum, and dentate gyrus.</a> J. Neurosci. Res. 42, 674-683 (1995).</li><li>Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing nerve cells. , (1998).</li><li>Eletto, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+SNAP25+expression+by+HIV-1+Tat+involves+the+activity+of+mir-128a.">Inhibition of SNAP25 expression by HIV-1 Tat involves the activity of mir-128a.</a> J. Cell Physiol. 216, 764-770 (2008).</li><li>Gualco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IGF-IR-dependent+expression+of+Survivin+is+required+for+T-antigen-mediated+protection+from+apoptosis+and+proliferation+of+neural+progenitors.">IGF-IR-dependent expression of Survivin is required for T-antigen-mediated protection from apoptosis and proliferation of neural progenitors.</a> Cell Death Differ. 17, 439-451 (2010).</li><li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Survival+and+differentiation+of+adult+neuronal+progenitor+cells+transplanted+to+the+adult+brain.">Survival and differentiation of adult neuronal progenitor cells transplanted to the adult brain.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92, 11879-11883 (1995).</li><li>Keyser, D. O., Pellmar, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+transmission+in+the+hippocampus:+critical+role+for+glial+cells.">Synaptic transmission in the hippocampus: critical role for glial cells.</a> Glia. 10, 237-243 (1994).</li><li>Pfrieger, F. W., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+efficacy+enhanced+by+glial+cells+in+vitro.">Synaptic efficacy enhanced by glial cells in vitro.</a> Science. 277, 1684-1687 (1997).</li></ol>

쥐 hippocampal과 대뇌 피질 뉴런의 해부 · 문화의 방법은 여기에서 설명한 화학적으로 정의된 매체 (그림 3) 재배 거의 순수의 연결 문화권을 사용하여 실험을 수행할 수 있습니다. 혈청 프리 미디어 culturing 거의 순수 뉴런에 대한 프로토콜 이전에 2,3,4를 설명되어 있지만, 우리의 방법으로 만들어진 중요한 변화가 없습니다. 기존의 프로토콜과는 다른 (즉 은행 외.) 5, 우...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 집중 </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> 98% </td></tr><tr><td> B27 </td><td> 2퍼센트 </td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> 0.5 MM </td></tr></tbody></table> 표 I. Neurobasal/B27 완료 매체. <table border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 집중 </td></tr><tr><td> 포도당 </td><td> 16 MM </td></tr><tr><td> 자당 </td><td> 22 MM </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 10 MM </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 160 MM </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 5 MM </td></tr><tr><td> 나 2 HPO 4 </td><td> 1 ㎜ </td></tr><tr><td> KH 2 PO 2 </td><td> 0.22 MM </td></tr><tr><td> Gentamicin </td><td> 50 μg / ML </td></TR&gt; <tr><td> Fungizone </td><td> 250 NG / ML </td></tr><tr><td> 산도 </td><td> 7.4 </td></tr><tr><td> Osmolarity </td><td> 320-330 mOsm </td></tr></tbody></table> 표 II. 해부 매체. <table border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 볼륨 (μl) </td></tr><tr><td> Neurobasal/B27 완료 매체 </td><td> 240 </td></tr><tr><td> Trypan 블루는 0.4 %를 청바지 </td><td> 250 </td></tr><tr><td> 합계 </td><td> 490 </td></tr></tbody></table> 표 III. 솔루션을 계산 50x. <table border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 회사 </td><td> 고양이. 번호 </td></tr><tr><td> 최대 절전 E </td><td> Brainbits </td><td> 767,171 </td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 21103-049 </td></tr><tr><td> B27 </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 17504-044 </td></tr><tr><td> Fungizone </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 15290-018 </td></tr><tr><td> Gentamicin 황산 </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> G1264 </td></tr><tr><td> Glutamax 200 MM </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 35,050 </td></tr><tr><td> TrypLE 익스프레스 W / O 페놀 레드 </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 12,604 </td></tr><tr><td> 사이 토신-β-D-arabinofuranoside 하이드로 클로라이드 </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> C6645 </td></tr><tr><td> 폴리-D-라이신 </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> P6407 </td></tr><tr><td> Laminin 1 MG / ML </td><td> Millipore </td><td> CC095 </td></tr><tr><td> HEPES </td><td> 시그마 알드리치 </td><td> H3375 </td></tr><tr><td> Trypan 블루는 0.4 %를 청바지 </td><td> Gibco, Invitrogen </td><td> 15,250 </td></tr></tbody></테이블&gt; 표 IV. 특정 시약. <table border="1"><tbody><tr><td> 장비 </td><td> 회사 </td><td> 고양이. 번호 </td></tr><tr><td> 스테레오 현미경 </td><td> 올림포스 산 </td><td> SZ61 </td></tr><tr><td> 대형 집게 </td><td> FST </td><td> 11022-14 </td></tr><tr><td> 미세 스쳐 포셉 </td><td> 모리아 </td><td> MC40B </td></tr><tr><td> 마이크로 미세 스쳐 포셉 </td><td> 모리아 </td><td> MC31 </td></tr><tr><td> 면도칼 같은 날카로운 가위 </td><td> Roboz </td><td> RS-6820 </td></tr><tr><td> 마이크로 분석 해 봅시다 가위 </td><td> FST </td><td> 91460-11 </td></tr><tr><td> 마이크로 곡선 가위 분석 해 봅시다 </td><td> FST </td><td> 14067-11 </td></tr><tr><td> 유리 2 챔버 슬라이드 </td><td> 실험실 - 테크 </td><td> 154,461 </td></tr><tr><td> 60mm 요리 </td&gt; <td> BD 팔콘 </td><td> 353,002 </td></tr><tr><td> 100mm 요리 </td><td> 코닝 </td><td> 430,167 </td></tr><tr><td> 15 ML 튜브 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352,099 </td></tr><tr><td> 1.5 ML cryo-튜브 약병 </td><td> Nunc </td><td> 375,353 </td></tr></tbody></table> 표 V. 특정 장비.

isolation and culture of rat embryonic neural cells: a quick protocol

우리는 E15-17 쥐의 배아에서 hippocampal 또는 대뇌 피질의 뉴런을 해리와 문화에 빠른 방법을 설명합니다. 절차는 마우스와 인간의 기본 뉴런과 신경 progenitors의 분리에 성공적으로 적용할 수 있습니다. Dissociated 뉴런은 몇 주간에 혈청이없는 배지에 보관됩니다. 이러한 문화는 nucleofection, immunocytochemistry, 핵산 준비뿐만 아니라, 전기 생리학을 위해 사용될 수 있습니다. 이전의 연결을 문화도 좋은 효율 lentiviral 형질 도입에 의한 속도와, 덜 효율적으로 인산 칼슘이나 lipofectamine과 같은 지질 기반 방법과 함께 transfected 수 있습니다.

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Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol

우리는 쥐 배아에서 hippocampal과 대뇌 피질의 신경 세포를 분리하고 문화에 빠른 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 우리가 거​​의 순수의 연결을 문화가 요구되는 실험을 수행할 수 있습니다.

쥐 배아 신경 세포의 분리 및 문화 : 빠른 프로토콜

We are describing a quick method to dissociate and culture hippocampal or cortical neurons from E15-17 rat embryos. The procedure can be applied ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

배아 척수에서 뉴런의 Commissural 해부와 문화

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

연구

신경과학

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

절연 및 Neurosphere 어세를 사용하여 성인 마우스 신경 줄기 세포의 확장

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

Neurosphere 분석을 사용하여 마우스 배아 신경 줄기 세포 문화 구축

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

세포 어세를 형성 신경 콜로니 : 신경 전구 세포로부터 타고난 신경 줄기 세포를 차별 어세이

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Isolation and Culture of Neural Crest Stem Cells from Human Hair Follicles

인간의 모공에서 신경 크레스트 줄기 세포의 분리와 문화

Hair follicles undergo lifelong growth and hair cycle is a well-controlled process involving stem cell proliferation and quiescence. Hair bulge is a ...

Lectin-based Isolation and Culture of Mouse Embryonic Motoneurons

마우스 배아의 Motoneurons의 렉틴 기반 격리와 문화

Spinal motoneurons develop towards postmitotic stages through early embryonic nervous system development and subsequently grow out dendrites and axons. ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

배아 Murine 신경 튜브에서 신경 크레스트 세포의 분리 및 문화

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

Dissection, Culture, and Analysis of Xenopus laevis Embryonic Retinal Tissue

의 해부, 문화, 및 분석<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; 배아 망막 조직

The process by which  the anterior region of the neural plate gives rise to the vertebrate retina  continues to be a major focus of both clinical and ...

Isolation and Culture of Endothelial Cells from the Embryonic Forebrain

배아 전뇌에서 내피 세포의 분리 및 문화

Embryonic brain endothelial cells can serve as an important tool in the study of angiogenesis and neurovascular development and interactions. The two ...

One Mouse, Two Cultures: Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Two Neurogenic Zones of Individual Mice

하나의 마우스, 두 문화 : 분리 및 성인 신경의 문화가 개인 마우스의 두 신경 인성 영역에서 줄기 세포

The neurosphere assay and the adherent monolayer culture system are valuable tools to determine the potential (proliferation or differentiation) of adult ...