Name: solubilization and bio-conjugation of quantum dots and bacterial toxicity assays by growth curve and plate count
Uploaded: 2012-07-11T13:00:00
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Este trabalho foi financiado pelo programa Descoberta NSERC Individual, o NSERC / CIHR Programa Cooperativo de Investigação de Saúde (CHRP), eo NSERC CRIAR canadense Programa de Formação de Astrobiologia (CAPT).

1. Solubilização QD Este é um método apropriado para CdTe. Métodos semelhantes podem ser utilizados com outros tipos de QDs tais como InP / ZnS 20 e CdSe / ZnS 21. <ol><li> Prepara-se uma solução de QDs CdTe em tolueno a 15 mM (densidade óptica = 2,5 no pico exciton primeiro). </li><li> Transferir 200 uL deste estoque para um frasco de vidro. Não utilize plástico! </li><li> Adicionar 800 uL de tolueno, 1 mL de tampão de borato 200 mM (pH 9) e 2 uL de 11,5 M...

<ol>
	<li>Michalet, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantum+dots+for+live+cells,+in+vivo+imaging,+and+diagnostics.">Quantum dots for live cells, in vivo imaging, and diagnostics.</a> Science. 307, 538-544 (2005).</li><li>Jamieson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+applications+of+quantum+dots.">Biological applications of quantum dots.</a> Biomaterials. 28, 4717-4732 (2007).</li><li>Asokan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+heat+transfer+fluids+in+the+synthesis+of+high-quality+CdSe+quantum+dots,+core/shell+quantum+dots,+and+quantum+rods.">The use of heat transfer fluids in the synthesis of high-quality CdSe quantum dots, core/shell quantum dots, and quantum rods.</a> Nanotechnology. 16, 2000-2011 (2005).</li><li>Chan, W. 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G., Pulgarin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+coaxial+photocatalytic+reactor+(CAPHORE)+in+the+TiO2+photo-assisted+treatment+of+mixed+Escherichia+coli+and+Bacillus+subtilis+and+the+bacterial+community+present+in+wastewater.">Use of coaxial photocatalytic reactor (CAPHORE) in the TiO2 photo-assisted treatment of mixed Escherichia coli and Bacillus subtilis and the bacterial community present in wastewater.</a> Catal. Today. 101, 331-344 (2005).</li><li>Neal, A. 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As nanopartículas representam uma abordagem promissora para a criação de novos agentes anti-microbianos. Análise da curva de crescimento é uma maneira de monitorar a densidade da célula bacteriana que distingue as células-ativamente crescentes de crescimento inibido células. Quando acoplada com contagens de placas, permite uma análise completa do potencial antibiótico de um conjugado. O formato de 96 poços permite variações relativamente alto rendimento de concentração e outras condições, tais como expo...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Companhia </td><td> Número de Catálogo </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> Borato componente tampão # 1 </td><td> Pescador </td><td> O ácido bórico A-74-1 </td><td></td></tr><tr><td> Borato componente tampão # 2 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> Tetraborato de sódio B9876 </td><td></td></tr><tr><td> MPA </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M5801 </td><td></td></tr><tr><td> Vivaspin 500 </td><td> GE Healthcare </td><td> 28-9322 </td><td> Vários MWCO disponível </td></tr><tr><td> Frascos de vidro </td><td> Pescador </td><td> 03-338C </td><td></td></tr><tr><td> EDC </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E6383 </td><td></td></tr><tr><td> A polimixina B </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1004 </td><td></td></tr><tr><td> Gr bacterianaowth médio Componente (LB) # 1 </td><td> Pescador </td><td> NaCl S271 </td><td></td></tr><tr><td> Meio de crescimento bacteriano (LB) Componente # 2 </td><td> BD </td><td> Triptona 211705 </td><td></td></tr><tr><td> Meio de crescimento bacteriano (LB) Componente # 3 </td><td> BD </td><td> Extracto de levedura 211.929 </td><td></td></tr><tr><td> Lâmpada para exposição à luz </td><td> Personalizado </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Clara de fundo placas de 96 poços </td><td> Pescador </td><td> 07-200-567 ou 07-200-730 </td><td></td></tr><tr><td> Fluorescência espectrômetro </td><td> Molecular Devices </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leitor de placas de absorbância </td><td> Molecular Devices </td><td></td><td></td></tr><tr><td> BactoAgar para meios sólidos </td><td> Bioshop </td><td> AGR001.1 </td><td></td></tr><tr><td> As placas de Petri em volta </td><td> Pescador </td><td> 08-75-12 </td><td></td></tr><tr><td> As placas de Petri rectangulares </td><td> Pescador </td><td> 08-757-11A </td><td></td></tr></tbody></table>

solubilization and bio-conjugation of quantum dots and bacterial toxicity assays by growth curve and plate count

Os pontos quânticos (QDs) são nanopartículas de semicondutores fluorescentes com tamanho dependente de espectros de emissão que podem ser excitados por uma ampla gama de comprimentos de onda. QDs têm atraído muito interesse para a imagem, diagnóstico e terapêutica devido a sua fluorescência brilhante e estável 1,2 3,4,5. QDs podem ser conjugados com uma variedade de moléculas bio-activas para a ligação a bactérias e células de mamíferos 6. QDs também estão sendo amplamente investigada como agentes citotóxicos para o assassinato seletivo de bactérias. O surgimento de multiplicar-estirpes bacterianas resistentes torna-se rapidamente uma crise de saúde pública, particularmente no caso de agentes patogénicos Gram negativos 7. Por causa do efeito bem conhecido antimicrobiana de nanomateriais certos, especialmente de Ag, existem centenas de estudos que examinam a toxicidade das nanopartículas de bactérias 8. Estudos bacterianas foram realizados com outros tipos de nanopartículas de semicondutores, bem como, especially TiO 2 9,10-11, mas também ZnO 12 e outros, incluindo CuO 13. Alguns comparações de estirpes bacterianas foram realizados nestes estudos, geralmente comparando uma estirpe de bactérias Gram negativas com um positivo de Gram. Com todas essas partículas, mecanismos de toxicidade são atribuídos a oxidação: ou fotogeração o de espécies reactivas de oxigénio (ROS) pelas partículas ou a libertação directa de iões metálicos que podem causar toxicidade oxidativo. Mesmo com esses materiais, resultados de diferentes estudos variam muito. Em alguns estudos a cepa teste do Gram positivo é declaradamente mais sensível do que os 10 Gram negativa, em outros, é o 14 oposto. Estes estudos têm sido bem revisada 15. Em todos os estudos de nanopartículas, a composição de partículas, o tamanho, a química de superfície, a amostra de envelhecimento / avaria, eo comprimento de onda, a potência ea duração da exposição à luz podem todos afectar dramaticamente os resultados. Além disso, sintetizadosubprodutos s e solventes deve ser considerado 16 17. Técnicas de rastreio de alto rendimento são necessários para ser capaz de desenvolver agentes eficazes de nanomedicina novos. QDs CdTe têm efeitos anti-microbianos por si só 18 ou em combinação com antibióticos. Em um estudo anterior, mostramos que o acoplamento de antibióticos para CdTe pode aumentar a toxicidade para as bactérias, mas reduzir a toxicidade para células de mamíferos, devido à diminuição da produção de espécies reativas de oxigênio a partir das 19 conjugados. Embora seja improvável que o cádmio contendo-os compostos irão ser aprovado para utilização em seres humanos, tais preparações podem ser utilizadas para a desinfecção de superfícies ou de esterilização da água. Neste protocolo, damos uma abordagem direta para solubilização QDs CdTe com ácido mercaptopropiónico (MPA). Os QDs estão prontos para uso dentro de uma hora. Nós, então, demonstrar o acoplamento de um agente antimicrobiano. A segunda parte do protocolodemonstra um ensaio de inibição de 96 poços bacteriana utilizando os QDs conjugados e não conjugada. A densidade óptica é lida durante muitas horas, permitindo que os efeitos da adição QD e exposição à luz a ser avaliada, bem como imediatamente após um período de recuperação. Nós também ilustram uma contagem da colónia para a quantificação de sobrevivência bacteriana.

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Solubilization and Bio-conjugation of Quantum Dots and Bacterial Toxicity Assays by Growth Curve and Plate Count

As nanopartículas, tais como pontos quânticos de semicondutores (QDs) pode ser usado para criar agentes fotoactiváveis ​​para aplicações anti-microbianos ou anti-cancro. Esta técnica mostra como a água-solubilizar telureto de cádmio (CdTe) QDs, conjugá-los a um antibiótico, e realizar um ensaio de inibição bacteriana baseada em curvas de crescimento e contagem de placa.

Solubilização e Bio conjugação de pontos quânticos e ensaios de toxicidade bacterianas por curva de crescimento e Contagem

Quantum dots (QDs) are fluorescent semiconductor nanoparticles with size-dependent emission spectra that can be excited by a broad choice of wavelengths. ...

Research

JoVE Journal

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