Name: a system for ex vivo culturing of embryonic pancreas
Uploaded: 2012-08-27T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas at JoVE.com

Research in de Spagnoli lab. wordt gefinancierd door de Helmholtz Association, FP7-IRG-2008-ENDOPANC subsidie ​​en ERC-2009-Starten HEPATOPANCREATIC Grant.

De hier beschreven protocol werd aangepast van de techniek oorspronkelijk beschreven in Percival en Slack 9 en geoptimaliseerd voor confocale microscopie. 1. Coating van Glass Bottom Cultuur Gerechten De volgende stappen worden uitgevoerd onder steriele omstandigheden in een laminaire stroming kap. <ol><li> Pancreas explantaten worden gekweekt in 35-mm petrischalen met 20-mm glas microwell bodem (bijv. MatTek Corporation). Gebruik een glazen...

<ol>
	<li>Slack, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+biology+of+the+pancreas.">Developmental biology of the pancreas.</a> Development. 121, 1569-1580 (1995).</li><li>Pan, F., Wright, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreas+organogenesis:+from+bud+to+plexus+to+gland.">Pancreas organogenesis: from bud to plexus to gland.</a> Dev. Dyn. 240, 530-565 (2011).</li><li>Puri, S., Hebrok, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Plasticity+within+the+Pancreas-+Lessons+Learned+from+Development.">Cellular Plasticity within the Pancreas- Lessons Learned from Development.</a> Developmental Cell. 18, 342-356 (2010).</li><li>Spagnoli, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+endoderm+to+pancreas:+a+multistep+journey.">From endoderm to pancreas: a multistep journey.</a> Cell. Mol. Life Sci. 64, 2378-2390 (2007).</li><li>Hick, A. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+primitive+duct+formation+in+the+pancreas+and+submandibular+glands:+a+role+for+SDF-1.">Mechanism of primitive duct formation in the pancreas and submandibular glands: a role for SDF-1.</a> BMC Dev. Biol. 9, 1-17 (2009).</li><li>Villasenor, A., Chong, D., Henkemeyer, M., Cleaver, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+dynamics+of+pancreatic+branching+morphogenesis.">Epithelial dynamics of pancreatic branching morphogenesis.</a> Development. 137, 4295-4305 (2010).</li><li>Kesavan, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cdc42-Mediated+Tubulogenesis+Controls+Cell+Specification.">Cdc42-Mediated Tubulogenesis Controls Cell Specification.</a> Cell. 139, 791-801 (2009).</li><li>Zhou, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Multipotent+Progenitor+Domain+Guides+Pancreatic+Organogenesis.">A Multipotent Progenitor Domain Guides Pancreatic Organogenesis.</a> Developmental Cell. 13, 103-114 (2007).</li><li>Percival, A., Slack, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+pancreatic+development+using+a+cell+lineage+label.">Analysis of pancreatic development using a cell lineage label.</a> Exp. Cell Res. 247, 123-132 (1999).</li><li>Miralles, F., Czernichow, P., Ozaki, K., Itoh, N., Scharfmann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+through+fibroblast+growth+factor+receptor+2b+plays+a+key+role+in+the+development+of+the+exocrine+pancreas.">Signaling through fibroblast growth factor receptor 2b plays a key role in the development of the exocrine pancreas.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96, 6267-6272 (1999).</li><li>Puri, S., Hebrok, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+embryonic+pancreas+development+using+real-time+imaging.">Dynamics of embryonic pancreas development using real-time imaging.</a> Dev. Biol. 306, 82-93 (2007).</li><li>Magenheim, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+vessels+restrain+pancreas+branching,+differentiation+and+growth.">Blood vessels restrain pancreas branching, differentiation and growth.</a> Development. 138, 4743-4752 (2011).</li><li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual. , (2003).</li><li>Horb, L. D., Slack, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+cell+division+in+branching+morphogenesis+and+differentiation+of+the+embryonic+pancreas.">Role of cell division in branching morphogenesis and differentiation of the embryonic pancreas.</a> Int. J. Dev. Biol. 44, 791-796 (2000).</li><li>Muzumdar, M., Tasic, B., Miyamichi, K., Li, L., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+global+double-fluorescent+Cre+reporter+mouse.">A global double-fluorescent Cre reporter mouse.</a> Genesis. 45, 593-605 (2007).</li></ol>

Zodra pancreatic lot is aangegeven, pancreatische progenitorcellen ondergaan uitgebreide proliferatie, differentiatie en morfogenese om uiteindelijk een rijpe en functionele orgaan 2,4. Momenteel hoe vertakking plaatsvindt in de pancreas en hoe het is aangesloten progenitor proliferatie en differentiatie is grotendeels onbekend. Pancreas explantatie culturen vormen een ideaal systeem om op te helderen deze processen ex vivo 5,9,11. Door de combinatie van live-cell imaging met ex vivo</...

<table border="1"><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Antibodies: Carboxypeptidase E-cadherine F-actine Glucagon Insuline β1-integrine Pdx1 Pdx1 Fosfo-histon H3 </td><td> Abd Serotec Invitrogen Molecular Probes ImmunoStar Millipore Millipore Abcam Hybridoma bank Cell Signalling </td><td> 1810-0006 13-1.900 A-12373 20076 4011 tot 01 MAB1997 ab47267 F109-D12 9706 </td><td></td></tr><tr><td> Basale Medium Eagle (BME) </td><td> Sigma </td><td> B1522-500ML </td><td> Bewaard in steriele omstandigheden </td></tr><tr><td> Celcultuur kwaliteit water </td><td> PAA </td><td> S15-012 </td&gt; <td> Bewaard in steriele omstandigheden </td></tr><tr><td> Cultuur gerechten (glazen bodem), 35-mm </td><td> MatTek Corporation </td><td> P35G-0-20-C </td><td></td></tr><tr><td> Donkey Serum </td><td> Chemicon </td><td> S30-100 ml </td><td></td></tr><tr><td> Foetaal kalfsserum Gold </td><td> PAA </td><td> A15-151 </td><td> Bewaard in steriele omstandigheden </td></tr><tr><td> Fibronectine </td><td> Invitrogen </td><td> 330.100-8 </td><td> De sol. 1 mg / ml in celkweek waterbehandeling </td></tr><tr><td> Gentamicine </td><td> Invitrogen </td><td> 15750-037 </td><td> Bewaard in steriele omstandigheden </td></tr><tr><td> Glutamine </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-024 </td><td> Bewaard in steriele omstandigheden </td></tr><tr><td> 4-goed Multidishes </td><td> Nunc </td><td> 176740 </td><td></td></tr><tr><td> Microscopen: Omgekeerde confocale microscoop (LSM 700) Stereomicroscoop (Discovery V12) </td><td> Zeiss Zeiss </td><td></td><td> Doelstellingen: C-Apochromat 10x / 0,45 W M27 (werk. dist 1,8 mm;. Beeldvorming diepte ~ 100 mm), C-Apochromat 40x / 1,2 W Corr M27 (werk. dist 0,28 mm;. ~ Imaging diepte 50 pm) Transilluminatie van onderen en glasvezel-verlichting van bovenaf </td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> Roth </td><td> 0335,3 </td><td> Voorraadoplossing 20% </td></tr><tr><td> Pasteurpipet (Glass), 150 mm </td><td> VWR </td><td> HECH567 / 1 </td><td></td></tr><tr><td> Penicilline / streptomycine </td><td> PAA </td><td> P11-010 </td><td> Gehouden in steriele cOORWAARDEN </td></tr><tr><td> Petrischalen, 60 mm </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 628102 </td><td></td></tr><tr><td> Petrischalen, 35 mm </td><td> Greiner Bio-One </td><td> 627161 </td><td></td></tr><tr><td> 1X PBS, pH 7,4 </td><td> PAA </td><td> H15-002 </td><td> Bewaard in steriele omstandigheden </td></tr><tr><td> Spring Schaar 8 mm zaagblad gebogen </td><td> Fine Science Tools </td><td> 15.023-10 </td><td></td></tr><tr><td> Triton-X100 </td><td> Roth </td><td> 3051,3 </td><td></td></tr><tr><td> Horlogemaker&#39;s foreceps Dumont # 5 </td><td> Roth </td><td> K342.1 </td><td></td></tr></table>

a system for ex vivo culturing of embryonic pancreas

De alvleesklier controleert vitale functies van ons lichaam, met inbegrip van de productie van spijsverteringsenzymen en de regulering van de bloedsuikerspiegel 1. Hoewel in de afgelopen tien jaar veel studies hebben bijgedragen aan een solide basis voor het begrijpen van de pancreas organogenese, belangrijke lacunes bestaan ​​in de kennis van de vroege pancreas vorming 2. Een volledig begrip van deze vroege gebeurtenissen zal inzicht geven in de ontwikkeling van dit orgaan, maar ook in ongeneeslijke ziekten die de alvleesklier te richten, zoals diabetes of alvleesklierkanker. Tenslotte zal deze informatie genereert een blauwdruk voor de ontwikkeling cel-vervangende therapieën in het kader van diabetes. Tijdens de embryogenese, de alvleesklier is afkomstig van verschillende embryonale uitwassen van de dorsale en ventrale voordarm endoderm op embryonale dag (E) 9,5 in de muis embryo 3,4. Beide uitwassen evaginate in het omringende mesenchym als vaste epitheell knoppen, die proliferatie ondergaan, vertakking en differentiatie tot een volledig volwassen orgel 2,5,6 genereren. Recent bewijs heeft gesuggereerd dat de groei en differentiatie van pancreatische cellijnen, zoals de insuline producerende β-cellen, afhankelijk juiste weefsel-architectuur, epitheliale cellen remodellering en positionering binnen de vertakking pancreas epitheel 7,8. Maar hoe vertakking morfogenese optreedt en gecoördineerd met proliferatie en differentiatie in de pancreas is grotendeels onbekend. Dit is gedeeltelijk te wijten aan het feit dat de huidige kennis over deze processen is bijna uitsluitend op de analyse van vaste monsters, terwijl morfogenetische gebeurtenissen zijn zeer dynamisch. Hier beschrijven we een werkwijze voor het ontleden en kweken muis embryonale alvleesklier knoppen ex vivo op glazen schalen, die directe visualisatie van de ontwikkeling pancreas (figuur 1) te maken. Deze cultusure systeem is ideaal ontworpen voor confocale laser scanning microscopie en in het bijzonder levende cellen imaging. Pancreas explantaten kan worden bereid niet alleen uit wildtype muis embryo, maar ook uit genetisch gemanipuleerde muizenstammen (zoals transgene of knock-out), waardoor real-time onderzoek mutant fenotype. Bovendien is deze ex vivo teeltsysteem is waardevol om de effecten van chemische verbindingen op pancreas ontwikkeling te bestuderen, waardoor kwantitatieve gegevens over de proliferatie en groei, rek, vertakking, tubulogenesis en differentiatie te verkrijgen. Kortom, de ontwikkeling van een ex vivo pancreas explantaatkweek methode in combinatie met hoge-resolutie beeldvorming biedt een sterk platform voor het observeren van morfogenetische en differentiatie gebeurtenissen die zich voordoen binnen de zich ontwikkelende muis embryo.

Watch this Scientific Journal Video about A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas at JoVE.com

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

We beschrijven een werkwijze voor isolatie, cultuur en manipulatie van muis embryonale pancreas. Dit is een uitgelezen<em&gt; Ex vivo</em&gt; Systeem voor het bestuderen van verschillende aspecten van de pancreas ontwikkeling, met inbegrip van morfogenese, differentiatie en groei. Pancreas knop explantaten worden enkele dagen gekweekt en gebruikt in een aantal verschillende toepassingen, waaronder geheel gemonteerde immunofluorescentie en live beeldvorming.

Een systeem voor<em&gt; Ex vivo</em&gt; Kweken van embryonale Pancreas

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

Research

JoVE Journal

Biology

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Methode voor Cultuur van Early kippenembryo&#39;s ex vivo (Nieuwe Cultuur)

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

Een Ex-ovo Chicken Embryo Cultuur systeem geschikt voor Imaging en microchirurgie toepassingen

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...

A System for Culturing Iris Pigment Epithelial Cells to Study Lens Regeneration in Newt

Een systeem voor het kweken van Iris pigment epitheelcellen aan Lens Regeneratie Study in Newt

Salamanders like newt and axolotl possess the ability to regenerate many of its lost body parts such as limbs, the tail with spinal cord, eye, brain, ...

A 3D System for Culturing Human Articular Chondrocytes in Synovial Fluid

Een 3D-systeem voor het kweken van menselijke articulaire chondrocyten in gewrichtsvloeistof

Cartilage destruction is a central pathological feature of osteoarthritis, a leading cause of disability in the US. Cartilage in the adult does not ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

Voorbereiding van muis embryonale Fibroblast cellen die geschikt zijn voor het kweken van menselijke embryonale en geïnduceerde pluripotente stamcellen

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel Ex vivo Culture Method for the Embryonic Mouse Heart

A Novel<em&gt; Ex vivo</em&gt; Cultuur Methode voor de embryonale Mouse Hart

Developmental studies in the mouse are hampered  by the inaccessibility of the embryo during gestation. Thus, protocols to  isolate and culture individual ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

Een methode voor het kweken van embryonale<em&gt; C. elegans</em&gt; Cellen

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

Ex vivo Culture of Mouse Embryonic Skin and Live-imaging of Melanoblast Migration

Ex vivo cultuur van muis embryonale Huid en live-beeldvorming van melanoblast Migratie

Melanoblasts are the neural crest derived precursors of melanocytes; the cells responsible for producing the pigment in skin and hair. Melanoblasts ...

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

An Ex vivo Culture System to Study Thyroid Development

Een<em&gt; Ex vivo</em&gt; Cultuur Systeem om Schildklier Development Study

The thyroid is a bilobated endocrine gland localized at the base of the neck, producing the thyroid hormones T3, T4, and calcitonin. T3 and T4 are ...

In Vitro Pancreas Organogenesis from Dispersed Mouse Embryonic Progenitors

In Vitro Pancreas Organogenesis from Dispersed Mouse Embryonic Progenitors

In Vitro Pancreas Organogenese van Dispersed muis embryonale Progenitors

The pancreas is an essential organ that regulates glucose homeostasis and secretes digestive enzymes. Research on pancreas embryogenesis has led to the ...