Name: visualization of cortex organization and dynamics in microorganisms, using total internal reflection fluorescence microscopy
Uploaded: 2012-05-01T12:03:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل جمعية ماكس بلانك.

1. عينة تحضير <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد قسائم الغطاء يجب تنظيف Coverslips من جزيئات الغبار وTIRF حساسة للإشارات خلفية الناشئة عن ساترة (الشكل 1A، فيلم 1). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> باستخدام ملقط زلات غطا...

<ol>
	<li>Axelrod, D., Thompson, N. L., Burghardt, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+internal+inflection+fluorescent+microscopy.">Total internal inflection fluorescent microscopy.</a> J. Microsc. 129, 19-28 (1983).</li><li>Axelrod, D., Omann, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+microscopy.">Combinatorial microscopy.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 944-952 (2006).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+imaging+of+surface+fluorescence+with+very+high+aperture+microscope+objectives.">Selective imaging of surface fluorescence with very high aperture microscope objectives.</a> J. Biomed. Opt. 6, 6-13 (2001).</li><li>Dominguez-Escobar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processive+movement+of+MreB-associated+cell+wall+biosynthetic+complexes+in+bacteria.">Processive movement of MreB-associated cell wall biosynthetic complexes in bacteria.</a> Science. 333, 225-228 (2011).</li><li>Sparkes, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleach+it,+switch+it,+bounce+it,+pull+it:+using+lasers+to+reveal+plant+cell+dynamics.">Bleach it, switch it, bounce it, pull it: using lasers to reveal plant cell dynamics.</a> J. Exp. Bot. 62, 1-7 (2011).</li><li>Uchida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+synthesis+and+absolute+configuration+of+avenolide,+extracellular+factor+in+Streptomyces+avermitilis.">Total synthesis and absolute configuration of avenolide, extracellular factor in Streptomyces avermitilis.</a> J. Antibiot. (Tokyo). , (2011).</li><li>Yu, H., Wedlich-Soldner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+actin+dynamics:+Generating+randomness+by+formin(g)+and+moving.">Cortical actin dynamics: Generating randomness by formin(g) and moving.</a> Bioarchitecture. 1, 165-168 (2011).</li><li>Yu, J. H., Crevenna, A. H., Bettenbuhl, M., Freisinger, T., Wedlich-Soldner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+actin+dynamics+driven+by+formins+and+myosin+V.">Cortical actin dynamics driven by formins and myosin V.</a> J. Cell. Sci. 124, 1533-1541 (2011).</li><li>Berchtold, D., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TORC2+plasma+membrane+localization+is+essential+for+cell+viability+and+restricted+to+a+distinct+domain.">TORC2 plasma membrane localization is essential for cell viability and restricted to a distinct domain.</a> Mol. Biol. Cell. 20, 1565-1575 (2009).</li><li>Vizcay-Barrena, G., Webb, S. E., Martin-Fernandez, M. L., Wilson, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+and+single-molecule+imaging+of+plant+fluorescent+proteins+using+total+internal+reflection+fluorescence+microscopy+(TIRFM).">Subcellular and single-molecule imaging of plant fluorescent proteins using total internal reflection fluorescence microscopy (TIRFM).</a> J. Exp. Bot. 62, 5419-5428 (2011).</li></ol>

TIRF المجهري هو الأسلوب المفضل للبروتينات صورة هامشية. عمق الاختراق المنخفض للمجال زائل يقلل من الخروج من ضوء التركيز، الأمر الذي يؤدي إلى إشارة جيدة للغاية لنسبة الضوضاء، ويتيح الحصول على البيانات مع ارتفاع معدلات الإطار، أو التصوير من البروتينات ضعيف جدا التي أعرب ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الأداة / كاشف </td><td> نوع </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> شاكر المداري </td><td> أداة </td><td> UniEquip </td><td> UNITWIST 3-D ROCKER شاكر </td></tr><tr><td> TIRF المجهر </td><td> حتى </td><td></td><td> مخصصة الإعداد </td></tr><tr><td> زجاج حاوية </td><td> أداة </td><td> Vitlab </td><td> 340-232880353 </td></tr><tr><td> السيراميك تلطيخ رف </td><td> أداة </td><td> توماس الخيال العلمي. </td><td> 8542E40 </td></tr><tr><td> كونكانافالين A </td><td> الكاشف </td><td> سيغما </td><td> L7647 </td></tr><tr><td> Coverslips # 1 (18 × 18 مم) </td><td> مجهر </td><td> منزل جلاسر </td><td> BB018018A1 </td></tr><tr><td> مجهر الشرائح </td><td> مجهر </td><td> منزل Gالليزر </td><td> AA00000102E </td></tr><tr><td> غمر النفط </td><td> مجهر </td><td> زييس </td><td> Immersol 518F </td></tr><tr><td> الاغاروز </td><td> الكاشف </td><td> إينفيتروجن </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> FluoSpheres </td><td> الكاشف </td><td> إينفيتروجن </td><td> F8795 </td></tr></tbody></table>

visualization of cortex organization and dynamics in microorganisms, using total internal reflection fluorescence microscopy

وقد برزت TIRF المجهري باعتبارها تكنولوجيا التصوير قوية لدراسة المكانية والزمانية ديناميكية الجزيئات فلوري في التجارب المختبرية والخلايا الحية 1. هذه الظاهرة البصرية من الانعكاس الداخلي الكامل يحدث عندما يمر الضوء من وسط معامل الانكسار مع ارتفاع في متوسط ​​معامل الانكسار مع انخفاض في زاوية أكبر من زاوية حرجة مميزة (أي أقرب إلى كونه بالتوازي مع الحدود). على الرغم من أن ينعكس كل الضوء مرة أخرى في ظل هذه الظروف، يتم إنشاء موجة زائل التي تنتشر عبر وعلى طول الحدود، والذى يضمحل بشكل كبير، مع المسافة، وتخترق المناطق فقط عينة التي هي 100-200 نانومتر بالقرب من واجهة 2. بالإضافة إلى تقديم قرار محوري متفوقة، وإثارة انخفاض من أصل fluorophores التركيز يخلق إشارة إلى نسب عالية جدا من الضوضاء ويقلل من الآثار الضارة للphotobleaching 2،3. كونها تقنية widefield، TIRF يسمح أيضا أسرع AC صورةquisition من مسح معظم الاجهزة مبائر القائم. للوهلة الأولى، عمق الاختراق المنخفض للTIRF يبدو لتكون متوافقة مع التصوير من الخلايا البكتيرية والفطرية، والتي غالبا محاطة بجدران سميكة الخلية. على العكس من ذلك، وجدنا أن جدران الخلايا من خميرة وخلايا بكتيرية فعلا على تحسين قابليتها للاستخدام من TIRF وزيادة مجموعة من الهياكل ملاحظتها 4-8. وبالتالي، يمكن العديد من العمليات الخلوية يمكن الوصول إليها مباشرة بواسطة الكائنات الحية الدقيقة TIRF في صغير وحيد الخلية، والتي غالبا ما تقدم قوي تقنيات التلاعب الجيني. وهذا يسمح لنا لأداء التجارب في الكيمياء الحيوية الحية، حيث يمكن حركية التفاعلات البروتينية والأنشطة المقررة مباشرة في الخلايا الحية. نحن هنا وصف الخطوات الفردية المطلوبة للحصول على صور عالية الجودة للTIRF خميرة الخباز أو عصيات الخلايا الرقيقة. نشير إلى مختلف المشاكل التي يمكن أن affeط م TIRF تصور تحقيقات فلوري في الخلايا وتوضيح إجراءات تطبيق مع أمثلة عدة. أخيرا، علينا أن نبرهن كيف يمكن الصور TIRF تحسينها باستخدام تقنيات استعادة صورة ثابتة.

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

مجموع داخلي التأمل الإسفار (TIRF) المجهري هو نهج قوي لمراقبة الهياكل على مقربة من سطح الخلية في التباين العالي وقرار مؤقت. علينا أن نبرهن كيف يمكن توظيف TIRF لدراسة ديناميات البروتين في خلايا قشرة جدار المغلقة الخلية البكتيرية والفطرية.

تصور منظمة اللحاء وحيوية في الكائنات الدقيقة، وذلك باستخدام المجموع الإسفار التأمل الداخلي المجهر

TIRF microscopy has emerged as  a powerful imaging technology to study spatio-temporal dynamics of fluorescent molecules  in vitro and in living cells1. ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Visualization of Recombinant DNA and Protein Complexes Using Atomic Force Microscopy

التصور من الحمض النووي المؤتلف والمجمعات البروتين باستخدام الميكروسكوب القوة الذرية

Atomic force microscopy (AFM) allows for the visualizing of individual proteins, DNA molecules, protein-protein complexes, and DNA-protein complexes. On ...

Nanotopology of Cell Adhesion upon Variable-Angle Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy (VA-TIRFM)

Nanotopology of Cell Adhesion upon Variable-Angle Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy VA-TIRFM

Nanotopology من التصاق الخلايا على متغيرة الزوايا الداخلية انعكاس إجمالي مضان المجهري (VA-TIRFM)

Surface topology, e.g. of cells growing on a substrate, is determined with nanometer precision by Variable-Angle Total Internal Reflection Fluorescence ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

عالية الدقة تحليل الزمانية المكانية من مستقبلات حيوية من قبل جزيء واحدة الإسفار الميكروسكوب

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

3D تتبع المداري في التعديل المجهر ثنائي الفوتون: دراسة تطبيقية على تتبع من بين الخلايا الحويصلات

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope

من السريع إلى التصوير الإسفار الجزيئية قانون إنتشار على أغشية الخلايا الحية في المجهر التجاري

It has become increasingly evident that the spatial distribution and the motion of membrane components like lipids and proteins are key factors in the ...

Quantifying Microorganisms at Low Concentrations Using Digital Holographic Microscopy (DHM)

Quantifying Microorganisms at Low Concentrations Using Digital Holographic Microscopy DHM

التحديد الكمي للكائنات الحية الدقيقة في تركيزات منخفضة باستخدام المجهر المجسم الرقمي (DHM)

Accurately detecting and counting sparse bacterial samples has many applications in the food, beverage, and pharmaceutical processing industries, in ...

Mammalian Cell Division in 3D Matrices via Quantitative Confocal Reflection Microscopy

انقسام الخلية الثديية في مصفوفات ثلاثية الأبعاد عن طريق الفحص المجهري انعكاس [كنفوكل] الكمية

The study of how mammalian cell division is regulated in a 3D environment remains largely unexplored despite its physiological relevance and therapeutic ...

Conducting Multiple Imaging Modes with One Fluorescence Microscope

إجراء وسائط تصوير متعددة مع واحد Fluorescence المجهر

Fluorescence microscopy is a powerful tool to detect biological molecules in situ and monitor their dynamics and interactions in real-time. In addition to ...

Visualizing Adhesion Formation in Cells by Means of Advanced Spinning Disk-Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

تصور تشكيل الالتصاق في الخلايا من خلال متقدم الغزل مجهرية Fluorescence انعكاس الداخلية القرص--المجموع

In living cells, processes such as adhesion formation involve extensive structural changes in the plasma membrane and the cell interior. In order to ...

Visualization of Germinosomes and the Inner Membrane in Bacillus subtilis Spores

Visualization of Germinosomes and the Inner Membrane in Bacillus subtilis Spores

التصور جيرمينوسوميس و "الغشاء الداخلي" في الجراثيم العصوية نجحت

The small size of spores and the relatively low abundance of germination proteins, cause difficulties in their microscopic analyses using epifluorescence ...