Name: visualization of cortex organization and dynamics in microorganisms, using total internal reflection fluorescence microscopy
Uploaded: 2012-05-01T12:03:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy at JoVE.com

עבודה זו מומנה על ידי מקס פלאנק החברה.

1. לדוגמא הכנת <ol class="lalpha" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת תלושי כיסוי Coverslips יש לנקות בין חלקיקי האבק כמו TIRF רגיש אותות רקע הנובעים coverslip (איור 1 א &#39;, סרט 1). <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> באמצעות מלקחיים כיסוי תלושי מק?...

<ol>
	<li>Axelrod, D., Thompson, N. L., Burghardt, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+internal+inflection+fluorescent+microscopy.">Total internal inflection fluorescent microscopy.</a> J. Microsc. 129, 19-28 (1983).</li><li>Axelrod, D., Omann, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+microscopy.">Combinatorial microscopy.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 944-952 (2006).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+imaging+of+surface+fluorescence+with+very+high+aperture+microscope+objectives.">Selective imaging of surface fluorescence with very high aperture microscope objectives.</a> J. Biomed. Opt. 6, 6-13 (2001).</li><li>Dominguez-Escobar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processive+movement+of+MreB-associated+cell+wall+biosynthetic+complexes+in+bacteria.">Processive movement of MreB-associated cell wall biosynthetic complexes in bacteria.</a> Science. 333, 225-228 (2011).</li><li>Sparkes, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleach+it,+switch+it,+bounce+it,+pull+it:+using+lasers+to+reveal+plant+cell+dynamics.">Bleach it, switch it, bounce it, pull it: using lasers to reveal plant cell dynamics.</a> J. Exp. Bot. 62, 1-7 (2011).</li><li>Uchida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+synthesis+and+absolute+configuration+of+avenolide,+extracellular+factor+in+Streptomyces+avermitilis.">Total synthesis and absolute configuration of avenolide, extracellular factor in Streptomyces avermitilis.</a> J. Antibiot. (Tokyo). , (2011).</li><li>Yu, H., Wedlich-Soldner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+actin+dynamics:+Generating+randomness+by+formin(g)+and+moving.">Cortical actin dynamics: Generating randomness by formin(g) and moving.</a> Bioarchitecture. 1, 165-168 (2011).</li><li>Yu, J. H., Crevenna, A. H., Bettenbuhl, M., Freisinger, T., Wedlich-Soldner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+actin+dynamics+driven+by+formins+and+myosin+V.">Cortical actin dynamics driven by formins and myosin V.</a> J. Cell. Sci. 124, 1533-1541 (2011).</li><li>Berchtold, D., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TORC2+plasma+membrane+localization+is+essential+for+cell+viability+and+restricted+to+a+distinct+domain.">TORC2 plasma membrane localization is essential for cell viability and restricted to a distinct domain.</a> Mol. Biol. Cell. 20, 1565-1575 (2009).</li><li>Vizcay-Barrena, G., Webb, S. E., Martin-Fernandez, M. L., Wilson, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+and+single-molecule+imaging+of+plant+fluorescent+proteins+using+total+internal+reflection+fluorescence+microscopy+(TIRFM).">Subcellular and single-molecule imaging of plant fluorescent proteins using total internal reflection fluorescence microscopy (TIRFM).</a> J. Exp. Bot. 62, 5419-5428 (2011).</li></ol>

מיקרוסקופיה TIRF היא הטכניקה של בחירה לחלבונים תמונה הפריפריה. עומק החדירה הנמוך של תחום חלוף ממזער את האור של המוקד, אשר מוביל אות טובה מאוד יחס רעש ומאפשר רכישת נתונים עם מסגרת חליפין גבוה, או הדמיה של חלבונים ביטוי מאוד חלש. שילוב של ניגודיות גבוהה מסגרת חליפין גבוה ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם הכלי / מגיב </td><td> סוג </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> Orbital שאכר </td><td> כלי </td><td> UniEquip </td><td> UNITWIST 3-D Rocker שאכר </td></tr><tr><td> TIRF מיקרוסקופ </td><td> עד </td><td></td><td> התקנה מותאמת אישית </td></tr><tr><td> מיכל זכוכית </td><td> כלי </td><td> Vitlab </td><td> 340-232880353 </td></tr><tr><td> צביעת קרמיקה המדף </td><td> כלי </td><td> תומאס מדע. </td><td> 8542E40 </td></tr><tr><td> Concanavalin </td><td> מגיב </td><td> סיגמא </td><td> L7647 </td></tr><tr><td> Coverslips # 1 (18 x 18 מ&quot;מ) </td><td> מיקרוסקופ </td><td> מנצל גלזר </td><td> BB018018A1 </td></tr><tr><td> מיקרוסקופ שקופיות </td><td> מיקרוסקופ </td><td> מנצל Gלייזר </td><td> AA00000102E </td></tr><tr><td> טבילה שמן </td><td> מיקרוסקופ </td><td> Zeiss </td><td> Immersol 518F </td></tr><tr><td> Agarose </td><td> מגיב </td><td> Invitrogen </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> FluoSpheres </td><td> מגיב </td><td> Invitrogen </td><td> F8795 </td></tr></tbody></table>

visualization of cortex organization and dynamics in microorganisms, using total internal reflection fluorescence microscopy

מיקרוסקופיה TIRF התפתחה טכנולוגיית ההדמיה עוצמה ללמוד במרחב ובזמן בדינמיקה של מולקולות ניאון במבחנה בתאים חיים 1. תופעה אופטית של השתקפות פנימית מוחלטת מתרחשת כאשר האור עובר מתווך בעל מקדם שבירה גבוה לתוך בינוני עם מקדם שבירה נמוך בזווית גדולה יותר מזווית ביקורתית אופייני (כלומר קרוב יותר להיות במקביל הגבול). למרות כל האור משתקף בחזרה בתנאים כאלה, גל חולף נוצר כי תנועתו ברחבי ולאורך הגבול, אשר דועך אקספוננציאלית עם המרחק, ורק חודר אזורים מדגם כי הם 100-200 ננומטר ליד ממשק 2. בנוסף למתן החלטה צירית מעולה, עירור מופחת מתוך fluorophores מיקוד יוצר אות גבוהה מאוד יחסי רעש ממזער ההשפעות המזיקות של photobleaching 2,3. להיות טכניקה widefield, TIRF גם מאפשר תמונה AC מהר יותרquisition יותר מרוב סריקה setups confocal מבוססות. במבט ראשון, את עומק החדירה הנמוכה של TIRF נראה עולה בקנה אחד עם הדמיה של תאים חיידקיים פטרייתי, אשר מוקף בדרך כלל על ידי קירות התא עבה. נהפוך הוא, מצאנו כי דופן התא של שמרים תאים חיידקיים למעשה לשפר את השימושיות של TIRF ולהגדיל את טווח מבנים נצפים 4-8. תהליכים תאיים רבים ולכן ניתן לגשת ישירות קטנים, תאיים, אשר לעיתים קרובות מציעים עוצמה טכניקות מניפולציה גנטית של TIRF. זה מאפשר לנו לבצע ניסויים ביוכימיה vivo, שבו קינטיקה של אינטראקציות חלבון ופעילות ניתן להעריך באופן ישיר בתאים חיים. נתאר כאן את הצעדים הנדרשים כדי להשיג בודדים TIRF תמונות באיכות גבוהה עבור cerevisiae Saccharomyces או תאים subtilis Bacillus. אנו להצביע על בעיות שונות שיכולות affeCT TIRF ויזואליזציה של בדיקות ניאון בתאים וכן להמחיש את הליך עם דוגמאות של יישומים שונים. לבסוף, אנו מראים כיצד תמונות TIRF ניתן לשפר עוד יותר באמצעות טכניקות מבוססות שיקום התמונה.

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

השתקפות פנימית מוחלטת פלואורסצנטי (TIRF) מיקרוסקופיה היא גישה חזקה כדי לבחון מבנים סמוך לפני השטח של התא על ניגודיות גבוהה ורזולוציה הזמני. אנו מדגימים כיצד TIRF יכול להיות מועסק על מנת ללמוד על הדינמיקה חלבונים בקליפת המוח של קיר סגורים תאים תאים חיידקיים פטרייתי.

ויזואליזציה של קליפת הארגון ואת הדינמיקה של מיקרואורגניזמים, באמצעות Fluorescence סה&quot;כ פנימי מיקרוסקופית השתקפות

TIRF microscopy has emerged as  a powerful imaging technology to study spatio-temporal dynamics of fluorescent molecules  in vitro and in living cells1. ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Visualization of Recombinant DNA and Protein Complexes Using Atomic Force Microscopy

ויזואליזציה של דנ&quot;א רקומביננטי ו קומפלקסים חלבונים באמצעות מיקרוסקופ כוח אטומי

Atomic force microscopy (AFM) allows for the visualizing of individual proteins, DNA molecules, protein-protein complexes, and DNA-protein complexes. On ...

Nanotopology of Cell Adhesion upon Variable-Angle Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy (VA-TIRFM)

Nanotopology of Cell Adhesion upon Variable-Angle Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy VA-TIRFM

Nanotopology של הידבקות תא מיקרוסקופי על משתנה זווית פנימית סה&quot;כ השתקפות פלואורסצנטי (VA-TIRFM)

Surface topology, e.g. of cells growing on a substrate, is determined with nanometer precision by Variable-Angle Total Internal Reflection Fluorescence ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

רזולוציה גבוהה ניתוח Spatiotemporal של קולטן Dynamics ידי המולקולה בודדת מיקרוסקופ פלואורסצנטי

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

3D Orbital מעקב במיקרוסקופ שני פוטונים השתנה: בקשה למעקב של תאיים שלפוחית

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope

מהדמיה מהירה פלואורסצנטי לחוק דיפוזיה מולקולרי בקרום תא חי במיקרוסקופ מסחרי

It has become increasingly evident that the spatial distribution and the motion of membrane components like lipids and proteins are key factors in the ...

Quantifying Microorganisms at Low Concentrations Using Digital Holographic Microscopy (DHM)

Quantifying Microorganisms at Low Concentrations Using Digital Holographic Microscopy DHM

לכימות מיקרואורגניזמים בריכוזים נמוכים באמצעות מיקרוסקופ דיגיטלי הולוגרפי (סוג התושבות שלהם. מופיעים)

Accurately detecting and counting sparse bacterial samples has many applications in the food, beverage, and pharmaceutical processing industries, in ...

Mammalian Cell Division in 3D Matrices via Quantitative Confocal Reflection Microscopy

בתרבית של חלוקת התא במטריצות תלת-ממד באמצעות מיקרוסקופ השתקפות קונאפוקלית כמותיים

The study of how mammalian cell division is regulated in a 3D environment remains largely unexplored despite its physiological relevance and therapeutic ...

Conducting Multiple Imaging Modes with One Fluorescence Microscope

ניצוח מספר מצבי הדמיה עם מיקרוסקופ זריחה אחת

Fluorescence microscopy is a powerful tool to detect biological molecules in situ and monitor their dynamics and interactions in real-time. In addition to ...

Visualizing Adhesion Formation in Cells by Means of Advanced Spinning Disk-Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

להמחיש אדהזיה היווצרות בתאים באמצעות מתקדם ספינינג מיקרוסקופ פלורסצנטיות השתקפות פנימית דיסק-סיכום

In living cells, processes such as adhesion formation involve extensive structural changes in the plasma membrane and the cell interior. In order to ...

Visualization of Germinosomes and the Inner Membrane in Bacillus subtilis Spores

Visualization of Germinosomes and the Inner Membrane in Bacillus subtilis Spores

ויזואליזציה של Germinosomes, את הקרום הפנימי בנבגים Bacillus subtilis

The small size of spores and the relatively low abundance of germination proteins, cause difficulties in their microscopic analyses using epifluorescence ...