Name: visualization of cortex organization and dynamics in microorganisms, using total internal reflection fluorescence microscopy
Uploaded: 2012-05-01T12:03:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Bu çalışma Max Planck toplum tarafından finanse edildi.

1. Numune Hazırlama <ol class="lalpha"><li> Kapak slipleri hazırlanması TIRF coverslip (Şekil 1A, Movie 1) kaynaklanan arka sinyaller karşı hassas olduğu için lameller toz parçacıkları temizlenmelidir. <ol><li> Kapaklı bir seramik tutucu forseps yere kapak fişleri kullanma. </li><li> 1 M NaOH (birden çok kez tekrar edilebilir) ile cam kap doldurun. </li><li> Yavaş sürekli dönme (çalkalamalı) altında 2 saat süreyle inkübe edin. Aşırı inkübasyon (&gt; 8 saat) opak kapak ...

<ol>
	<li>Axelrod, D., Thompson, N. L., Burghardt, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+internal+inflection+fluorescent+microscopy.">Total internal inflection fluorescent microscopy.</a> J. Microsc. 129, 19-28 (1983).</li><li>Axelrod, D., Omann, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combinatorial+microscopy.">Combinatorial microscopy.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 944-952 (2006).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+imaging+of+surface+fluorescence+with+very+high+aperture+microscope+objectives.">Selective imaging of surface fluorescence with very high aperture microscope objectives.</a> J. Biomed. Opt. 6, 6-13 (2001).</li><li>Dominguez-Escobar, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processive+movement+of+MreB-associated+cell+wall+biosynthetic+complexes+in+bacteria.">Processive movement of MreB-associated cell wall biosynthetic complexes in bacteria.</a> Science. 333, 225-228 (2011).</li><li>Sparkes, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bleach+it,+switch+it,+bounce+it,+pull+it:+using+lasers+to+reveal+plant+cell+dynamics.">Bleach it, switch it, bounce it, pull it: using lasers to reveal plant cell dynamics.</a> J. Exp. Bot. 62, 1-7 (2011).</li><li>Uchida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+synthesis+and+absolute+configuration+of+avenolide,+extracellular+factor+in+Streptomyces+avermitilis.">Total synthesis and absolute configuration of avenolide, extracellular factor in Streptomyces avermitilis.</a> J. Antibiot. (Tokyo). , (2011).</li><li>Yu, H., Wedlich-Soldner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+actin+dynamics:+Generating+randomness+by+formin(g)+and+moving.">Cortical actin dynamics: Generating randomness by formin(g) and moving.</a> Bioarchitecture. 1, 165-168 (2011).</li><li>Yu, J. H., Crevenna, A. H., Bettenbuhl, M., Freisinger, T., Wedlich-Soldner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+actin+dynamics+driven+by+formins+and+myosin+V.">Cortical actin dynamics driven by formins and myosin V.</a> J. Cell. Sci. 124, 1533-1541 (2011).</li><li>Berchtold, D., Walther, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TORC2+plasma+membrane+localization+is+essential+for+cell+viability+and+restricted+to+a+distinct+domain.">TORC2 plasma membrane localization is essential for cell viability and restricted to a distinct domain.</a> Mol. Biol. Cell. 20, 1565-1575 (2009).</li><li>Vizcay-Barrena, G., Webb, S. E., Martin-Fernandez, M. L., Wilson, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subcellular+and+single-molecule+imaging+of+plant+fluorescent+proteins+using+total+internal+reflection+fluorescence+microscopy+(TIRFM).">Subcellular and single-molecule imaging of plant fluorescent proteins using total internal reflection fluorescence microscopy (TIRFM).</a> J. Exp. Bot. 62, 5419-5428 (2011).</li></ol>

TIRF mikroskopi görüntü periferik proteinleri tercih edilen tekniktir. Yiten alan düşük penetrasyon derinliği gürültü oranı çok iyi bir sinyal yol açar ve yüksek kare hızları, ya da çok zayıf ifade proteinlerin görüntüleme ile veri toplama sağlar odaklanma ışık, dışı en aza indirir. Yüksek kontrast ve yüksek kare oranı ile TIRF mikroskopi kortikal lokalize proteinlerin görüntüleme uzay-zamansal dinamiği için mükemmel bir araçtır. İlginçtir bir çok mikroorganizma çevreleyen kal?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Aracı / reaktif Adı </td><td> Tip </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Orbital Çalkalayıcı </td><td> Araç </td><td> UniEquip </td><td> UNITWIST 3-D YÖNLÜ SHAKER </td></tr><tr><td> TIRF mikroskop </td><td> Kadar </td><td></td><td> Özelleştirilmiş kurulum </td></tr><tr><td> Cam kabı </td><td> Araç </td><td> VITLAB </td><td> 340-232880353 </td></tr><tr><td> Seramik boyama raf </td><td> Araç </td><td> Thomas Sci. </td><td> 8542E40 </td></tr><tr><td> Concanavalin A </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> L7647 </td></tr><tr><td> Lameller # 1 (18 x 18 mm) </td><td> Mikroskop </td><td> Menzel Gläser </td><td> BB018018A1 </td></tr><tr><td> Mikroskop Slaytlar </td><td> Mikroskop </td><td> Menzel Glazer </td><td> AA00000102E </td></tr><tr><td> Immersion Yağı </td><td> Mikroskop </td><td> Zeiss </td><td> Imersol 518F </td></tr><tr><td> Agaroz </td><td> Reaktif </td><td> Invitrogen </td><td> 16500-500 </td></tr><tr><td> FluoSpheres </td><td> Reaktif </td><td> Invitrogen </td><td> F8795 </td></tr></tbody></table>

visualization of cortex organization and dynamics in microorganisms, using total internal reflection fluorescence microscopy

TIRF mikroskopi in vitro floresan moleküllerin uzay-zamansal dinamiklerini incelemek için güçlü bir görüntüleme teknolojisi olarak ve hücrelerin 1 canlı ortaya çıkmıştır. Hafif karakteristik bir kritik açı (yani yakın sınır paralel olmaya) daha büyük bir açıyla düşük kırılma endeksi ile orta içine yüksek refraktif indeksi ile orta geçerken toplam iç yansıma optik olayı oluşur. Tüm ışık bu koşullar altında geri yansıtılmasına karşın, bir fani dalga oluşturulduğunu genelinde ve mesafe ile katlanarak bozunmaları ve sadece arayüz 2 civarındaki 100-200 nm örnek alanlar nüfuz sınır boyunca yayılır. Üstün aksiyal çözünürlük sağlamasının yanı sıra, odak florofor dışı düşük uyarılma gürültü oranı çok yüksek bir sinyal oluşturur ve 2,3 photobleaching zararlı etkilerini en aza indirir. Geniş açılı bir tekniği olan TIRF da daha hızlı görüntü ac veriyortemelli konfokal kurulumları tarama çoğundan daha quisition. İlk bakışta, TIRF düşük penetrasyon derinliği genellikle kalın hücre duvarları ile çevrilidir bakteriyel ve mantar hücreleri, görüntüleme ile uyumlu görünmektedir. Aksine, maya ve bakteriyel hücre hücre duvarları aslında TIRF kullanışlılığını iyileştirmek ve gözlemlenebilir yapılar 4-8 aralığında artış olduğunu bulduk. Pek çok hücresel süreçleri bu nedenle doğrudan çoğu zaman güçlü genetik manipulasyon teknikleri sunan küçük, tek hücreli mikroorganizmalar, içinde TIRF tarafından erişilebilir. Bu bize protein etkileşimleri ve faaliyetlerin kinetiği doğrudan canlı hücreler içerisinde değerlendirilebilir vivo biyokimya deneyler, içinde gerçekleştirmenizi sağlar. Biz burada Saccharomyces cerevisiae veya Bacillus subtilis hücreleri için yüksek kaliteli TIRF görüntüler elde etmek için gerekli adımları tek tek açıklayın. Biz Affe çeşitli sorunlara işaretct TIRF hücrelerinde floresan probların görselleştirme ve çeşitli uygulama örnekleri ile işlem göstermektedir. Son olarak, TIRF görüntüleri daha köklü görüntü restorasyon teknikleri kullanılarak artırılabilir nasıl gösterilmektedir.

Watch this Scientific Journal Video about Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

Toplam İç Yansıma Floresans (TIRF) mikroskopi yakın yüksek kontrast ve zamansal çözünürlükte hücre yüzeyine yapıları gözlemlemek için güçlü bir yaklaşımdır. Biz TIRF hücre duvarı kapalı bakteriyel ve mantar hücreleri kortekste protein dinamiklerini incelemek için istihdam edilebilir göstermek.

Mikroorganizmalarda Cortex Organizasyon ve Dinamiği Görselleştirme, Toplam İç Yansıma Floresan Mikroskobu kullanılarak

TIRF microscopy has emerged as  a powerful imaging technology to study spatio-temporal dynamics of fluorescent molecules  in vitro and in living cells1. ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Visualization of Recombinant DNA and Protein Complexes Using Atomic Force Microscopy

Atomik Kuvvet Mikroskobu kullanılarak Rekombinant DNA ve Protein Kompleksleri Görselleştirme

Atomic force microscopy (AFM) allows for the visualizing of individual proteins, DNA molecules, protein-protein complexes, and DNA-protein complexes. On ...

Nanotopology of Cell Adhesion upon Variable-Angle Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy (VA-TIRFM)

Nanotopology of Cell Adhesion upon Variable-Angle Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy VA-TIRFM

Değişken Açılı Toplam İç Yansıma Floresan Mikroskopi (VA-TIRFM) üzerine Hücre yapışma Nanotopology

Surface topology, e.g. of cells growing on a substrate, is determined with nanometer precision by Variable-Angle Total Internal Reflection Fluorescence ...

High-resolution Spatiotemporal Analysis of Receptor Dynamics by Single-molecule Fluorescence Microscopy

Tek molekül Floresan Mikroskopi Reseptör Dinamiği Yüksek çözünürlüklü Spatiotemporal Analizi

Single-molecule microscopy is emerging as a powerful approach to analyze the behavior of signaling molecules, in particular concerning those aspect (e.g., ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

Modifiye İki foton mikroskop 3D Orbital Takip: Hücre içi veziküllerin İzlemeye Bir Uygulama

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope

Ticari Mikroskop Canlı Hücre Zarları Moleküler Difüzyon Kanunu Hızlı Floresans Görüntüleme Gönderen

It has become increasingly evident that the spatial distribution and the motion of membrane components like lipids and proteins are key factors in the ...

Quantifying Microorganisms at Low Concentrations Using Digital Holographic Microscopy (DHM)

Quantifying Microorganisms at Low Concentrations Using Digital Holographic Microscopy DHM

Mikroorganizmaların düşük konsantrasyonlarda dijital holografik mikroskobu (DHM) kullanarak miktarının

Accurately detecting and counting sparse bacterial samples has many applications in the food, beverage, and pharmaceutical processing industries, in ...

Mammalian Cell Division in 3D Matrices via Quantitative Confocal Reflection Microscopy

Memeli hücre bölünmesi yılında niceliksel Confocal yansıma mikroskobu ile 3D matrisler

The study of how mammalian cell division is regulated in a 3D environment remains largely unexplored despite its physiological relevance and therapeutic ...

Conducting Multiple Imaging Modes with One Fluorescence Microscope

Çoklu görüntüleme modları bir floresan mikroskop ile iletken

Fluorescence microscopy is a powerful tool to detect biological molecules in situ and monitor their dynamics and interactions in real-time. In addition to ...

Visualizing Adhesion Formation in Cells by Means of Advanced Spinning Disk-Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

Hücreleri tarafından seçilmiş adezyon oluşumunda görselleştirme gelişmiş Disk-toplam iç yansıma floresans mikroskobu iplik

In living cells, processes such as adhesion formation involve extensive structural changes in the plasma membrane and the cell interior. In order to ...

Visualization of Germinosomes and the Inner Membrane in Bacillus subtilis Spores

Visualization of Germinosomes and the Inner Membrane in Bacillus subtilis Spores

Görselleştirme Germinosomes ve Bacillus subtilis sporlar iç zar

The small size of spores and the relatively low abundance of germination proteins, cause difficulties in their microscopic analyses using epifluorescence ...