Name: directed differentiation of induced pluripotent stem cells towards t lymphocytes
Uploaded: 2012-05-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes at JoVE.com

نشكر الدكتور شينيا ياماناكا (جامعة كيوتو) لتوفير IPS-NG-MEF-20D-17 خط خلية الدكتور داريو Vignali (مستشفى سانت جود للأطفال للبحوث) لدعم OT1-2A • pMig II بناء، والدكتور خوان كارلوس زونيغا-Pflucker (قسم علم المناعة في جامعة تورونتو) لدعم خط خلية OP9-DL1، والدكتور كينت E Vrana (قسم علم الأدوية، جامعة ولاية بنسلفانيا كلية الطب) لمساعدة تصميم هذه الدراسة. ويتم تمويل هذا المشروع، في إطار المنح مع عدد من المنح K18CA151798 المعهد الوطني للسرطان، صندوق Barsumian والميلانوما مؤسسة البحوث (J. أغنية).

1. خلية ثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الخلايا المغذية المشع SNL76 / 7 (irSNL76 / 7) للثقافة. يتم الاحتفاظ عادة SNL76 / 7 الخلايا في مصل بقري جنيني 10٪ (FBS) في Dulbecco معدلة النسر متوسطة (DMEM) وسائل الاعلام. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl">...

<ol>
	<li>Brenner, M. K., Heslop, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+T+cell+therapy+of+cancer.">Adoptive T cell therapy of cancer.</a> Curr. Opin. Immunol. 22, 251-257 (2010).</li><li>Hataye, J., Moon, J. J., Khoruts, A., Reilly, C., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+and+memory+CD4++T+cell+survival+controlled+by+clonal+abundance.">Naive and memory CD4+ T cell survival controlled by clonal abundance.</a> Science. 312, 114-116 (2006).</li><li>Seki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7/STAT5+cytokine+signaling+pathway+is+essential+but+insufficient+for+maintenance+of+naive+CD4+T+cell+survival+in+peripheral+lymphoid+organs.">IL-7/STAT5 cytokine signaling pathway is essential but insufficient for maintenance of naive CD4 T cell survival in peripheral lymphoid organs.</a> J. Immunol. 178, 262-270 (2007).</li><li>Stemberger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+naive+CD8++T+cell+precursor+can+develop+into+diverse+effector+and+memory+subsets.">A single naive CD8+ T cell precursor can develop into diverse effector and memory subsets.</a> Immunity. 27, 985-997 (2007).</li><li>Siewert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-driven+development:+effector/memory-like+alphaE+Foxp3++regulatory+T+cells+originate+from+both+naive+T+cells+and+naturally+occurring+naive-like+regulatory+T+cells.">Experience-driven development: effector/memory-like alphaE+Foxp3+ regulatory T cells originate from both naive T cells and naturally occurring naive-like regulatory T cells.</a> J. Immunol. 180, 146-155 (2008).</li><li>Wang, L. X., Plautz, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-primed,+in+vitro-activated+CD4++effector+T+cells+establish+long-term+memory+without+exogenous+cytokine+support+or+ongoing+antigen+exposure.">Tumor-primed, in vitro-activated CD4+ effector T cells establish long-term memory without exogenous cytokine support or ongoing antigen exposure.</a> J. Immunol. 184, 5612-5618 (2010).</li><li>Hinrichs, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+effector+CD8++T+cells+derived+from+naive+rather+than+memory+subsets+possess+superior+traits+for+adoptive+immunotherapy.">Human effector CD8+ T cells derived from naive rather than memory subsets possess superior traits for adoptive immunotherapy.</a> Blood. 117, 808-814 (2011).</li><li>Alajez, N. M., Schmielau, J., Alter, M. D., Cascio, M., Finn, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+a+tumor-specific,+MHC-unrestricted+T-cell+receptor+expressed+on+effector+cells+of+the+innate+and+the+adaptive+immune+system+through+bone+marrow+transduction+and+immune+reconstitution.">Therapeutic potential of a tumor-specific, MHC-unrestricted T-cell receptor expressed on effector cells of the innate and the adaptive immune system through bone marrow transduction and immune reconstitution.</a> Blood. 105, 4583-4589 (2005).</li><li>Yang, L., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+in+vivo+provision+of+antigen-specific+T+cell+immunity+by+programming+hematopoietic+stem+cells.">Long-term in vivo provision of antigen-specific T cell immunity by programming hematopoietic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 4518-4523 (2005).</li><li>Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrathymic+generation+of+tumor-specific+T+cells+from+genetically+engineered+human+hematopoietic+stem+cells+via+Notch+signaling.">Extrathymic generation of tumor-specific T cells from genetically engineered human hematopoietic stem cells via Notch signaling.</a> Cancer Res. 67, 2425-2429 (2007).</li><li>Boztug, K., Med, N. .. E. n. g. l. .. J. .. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-cell+gene+therapy+for+the+Wiskott-Aldrich+syndrome.">Stem-cell gene therapy for the Wiskott-Aldrich syndrome.</a> N. Engl. J. Med. 363, 1918-1927 (2010).</li><li>Peerani, R., Zandstra, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enabling+stem+cell+therapies+through+synthetic+stem+cell-niche+engineering.">Enabling stem cell therapies through synthetic stem cell-niche engineering.</a> J. Clin. Invest. 120, 60-70 (2010).</li><li>Mendez-Ferrer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+and+haematopoietic+stem+cells+form+a+unique+bone+marrow+niche.">Mesenchymal and haematopoietic stem cells form a unique bone marrow niche.</a> Nature. 466, 829-834 (2010).</li><li>Daley, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+the+generation+of+patient-specific+pluripotent+stem+cells+for+combined+gene+and+cell+therapy+of+hematologic+disorders.">Towards the generation of patient-specific pluripotent stem cells for combined gene and cell therapy of hematologic disorders.</a> Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program. , 17-22 (2007).</li><li>Boitano, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aryl+hydrocarbon+receptor+antagonists+promote+the+expansion+of+human+hematopoietic+stem+cells.">Aryl hydrocarbon receptor antagonists promote the expansion of human hematopoietic stem cells.</a> Science. 329, 1345-1348 (2010).</li><li>Himburg, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotrophin+regulates+the+expansion+and+regeneration+of+hematopoietic+stem+cells.">Pleiotrophin regulates the expansion and regeneration of hematopoietic stem cells.</a> Nat. Med. 16, 475-482 (2010).</li><li>Tanigaki, K., Honjo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+lymphocyte+development+by+Notch+signaling.">Regulation of lymphocyte development by Notch signaling.</a> Nature immunology. 8, 451-456 (2007).</li><li>Zhao, T., Zhang, Z. N., Rong, Z., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Immunogenicity of induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 474, 212-215 (2011).</li></ol>

<html> لACT العلاجات المستندة، والمختبر في توليد أعداد كبيرة من الخلايا غاية محددة حج رد الفعل T في الجسم الحي لإعادة ضخ هو النهج الأمثل. على الرغم من أن أسلوبنا في المختبر من خلايا يثير T الوظيفية من خلايا الجذع، أعداد كبيرة من الخلايا المحفزة المستمدة من ال...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td></tr><tr><td> الفئران C57BL/6J </td><td> جاكسون مختبر </td><td> 000664 </td></tr><tr><td> B6.129S7-Rag1 tm1Mom / J </td><td> جاكسون مختبر </td><td> 002216 </td></tr><tr><td> مكافحة CD3 (2C11) الأجسام المضادة </td><td> BD PharMingen </td><td> 553058 </td></tr><tr><td> مكافحة CD28 (37.51) الأجسام المضادة </td><td> BD PharMingen </td><td> 553295 </td></tr><tr><td> مكافحة CD3 (17A2) الأجسام المضادة </td><td> BioLegend </td><td> 100202 </td></tr><tr><td> مكافحة CD4 (GK1.5) الأجسام المضادة </td><td> BioLegend </td><td> 100417 </td></tr><tr><td> مكافحة CD8 (53-6،7) الأجسام المضادة </td><td> BioLegend </td><td> 100714 </td></tr><tr><td> مكافحة CD25 (3C7) الأجسام المضادة </td><td> BioLegend </td><td> 101912 </td></tr><tr><td> علىTI-CD44 (1M7) الأجسام المضادة </td><td> BioLegend </td><td> 103012 </td></tr><tr><td> مكافحة CD117 (2B8) الأجسام المضادة </td><td> BioLegend </td><td> 105812 </td></tr><tr><td> مكافحة TCR-β (H57597) الأجسام المضادة </td><td> BioLegend </td><td> 109220 </td></tr><tr><td> مكافحة IL-2 (JES6-5H4) الأجسام المضادة </td><td> BioLegend </td><td> 503810 </td></tr><tr><td> مكافحة الإنترفيرون γ (XMG1.2) الأجسام المضادة </td><td> BioLegend </td><td> 505822 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> إينفيتروجن </td><td> ABCD1234 </td></tr><tr><td> α-MEM </td><td> إينفيتروجن </td><td> A10490-01 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> HyClone </td><td> SH3007.01 </td></tr><tr><td> Brefeldin A </td><td> سيجما </td><td> B7651 </td></tr><tr><td> Polybrene </td><td> سيجما </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> GeneJammer </td><td> العلوم المتكاملة </td><td> 204130 </td></tr><tr><td> RNA عدة &lt;/ TD&gt; <td> QIAGEN </td><td> 74104 </td></tr><tr><td> DNA عدة </td><td> QIAGEN </td><td> 69504 </td></tr><tr><td> CD8 عزل كيت </td><td> Miltenyi بيوتيك </td><td> 130-095-236 </td></tr><tr><td> ACK تحلل العازلة </td><td> Lonza </td><td> 10-548E </td></tr><tr><td> mFlt-3L </td><td> PeproTech </td><td> 250-31L </td></tr><tr><td> MIL-7 </td><td> PeproTech </td><td> 217-17 </td></tr><tr><td> الجيلاتين </td><td> سيجما </td><td> G9391 </td></tr><tr><td> FITC مضادة للأجسام المضادة OVA </td><td> Immunochemicals روكلاند </td><td> 200-4233 </td></tr><tr><td> Permeabilization العازلة </td><td> Biolegend </td><td> 421002 </td></tr><tr><td> BSA </td><td> سيجما </td><td> A7906 </td></tr><tr><td> الفورمالديهايد </td><td> سيجما </td><td> F8775 </td></tr><tr><td> 0.4 ميكرومتر تصفية </td><td> ميليبور </td><td></td></tr><tr><td&gt; فارز Moflo الخليوي </td><td> داك Cytomation </td><td></td></tr><tr><td> Calibur تدفق عداد الكريات </td><td> BD </td><td></td></tr><tr><td> LSR عداد الكريات II تدفق </td><td> BD </td><td></td></tr><tr><td> الماوس restrainer </td><td> برينتري العلمية </td><td></td></tr></tbody></table>

directed differentiation of induced pluripotent stem cells towards t lymphocytes

بالتبني نقل الخلية (ACT) من الخلايا الليمفاوية T مستضد CD8 + محددة السامة للخلايا (CTLs) هو علاج واعد لمجموعة متنوعة من الأورام الخبيثة 1. يمكن التعرف CTLs الخلايا الخبيثة من خلال التفاعل مستضدات الأورام مع مستقبلات الخلايا T (TCR)، وإطلاق سراح cytotoxins وكذلك السيتوكينات لقتل الخلايا الخبيثة. من المعروف أن أقل متباينة، ووسط الذاكرة تشبه (وهو ما يسمى شديدة التفاعل) CTLs هي الأمثل لسكان ACT المستندة إلى العلاج المناعي، وذلك لأن هذه CTLs له قدرة عالية التكاثري، هي أقل عرضة للموت الخلايا المبرمج من الخلايا أكثر تمايزا ولها أعلى قدرة على الاستجابة لالسيتوكينات استتبابي 2-7. ولكن نظرا لصعوبة الحصول على عدد كبير من المرضى من هذه CTLs، هناك حاجة ملحة لإيجاد نهج جديد لتوليد شديدة التفاعل حج محددة CTLs لعلاجات ناجحة ACT القائم. TCR تنبيغ من الجذعية الذاتية المتجددةخلايا المناعة لإعادة لديها امكانات علاجية لعلاج أمراض 8-10. ومع ذلك، فإن النهج للحصول على خلايا جذعية جنينية (المجالس الاقتصادية والاجتماعية) من المرضى غير ممكن. على الرغم من استخدام الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) لأغراض علاجية تطبق على نطاق واسع في العيادة 11-13، خفضت HSCs التمايز والقدرات التكاثري، وHSCs يصعب التوسع في زراعة الخلايا في المختبر في 14-16. تكنولوجيا خلايا الجذع الأخيرة ووضع نظام في المختبر لتوصيل الجينات هي قادرة على توليد خلايا الجذع من المرضى دون أي نهج الجراحية. وبالإضافة إلى ذلك، مثل المجالس الاقتصادية والاجتماعية، وخلايا الجذع لديها القدرة التكاثري إلى أجل غير مسمى في المختبر، ولقد تبين أن تفرق في الخلايا المكونة للدم. وهكذا، خلايا الجذع لديك إمكانات أكبر لاستخدامها في العلاج المناعي القائم على ACT مقارنة المجالس الاقتصادية والاجتماعية أو HSCs. هنا، نقدم طرق لتوليد اللمف Tcytes من خلايا الجذع في المختبر، والبرمجة في الجسم الحي من المستضد محددة CTLs من خلايا الجذع لتعزيز مراقبة السرطان المناعي. التحفيز في المختبر مع يجند الشق يدفع تمايز الخلايا T من خلايا الجذع، والنتائج TCR تنبيغ الجينات في خلايا الجذع في التفريق مستضد محددة الخلايا T في الجسم الحي، والذي يمنع نمو الأورام. وهكذا، علينا أن نبرهن مستضد محددة الخلايا T تمايز الخلايا من IPS. دراساتنا توفير نهج أكثر كفاءة يحتمل لتوليد مستضد محددة CTLs لACT العلاجات المستندة وتيسير وضع استراتيجيات علاجية للأمراض.

Watch this Scientific Journal Video about Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes at JoVE.com

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

جيل من الخلايا الليمفاوية T من الخلايا المحفزة التي يسببها (آي بي إس) الجذعية يعطي نهجا بديلا من استخدام الخلايا الجذعية الجنينية لعلاج مناعي خلية القاعدة T. أسلوب يدل على أن إما عن طريق استخدام<em&gt; في المختبر</em&gt; أو<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; نظام التعريفي، وخلايا الجذع قادرة على التمايز إلى الخلايا الليمفاوية T التقليدية ومستضد محددة.

توجه التمييز بين الخلايا الجذعية المحفزة المستحثة نحو الخلايا اللمفية تي

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Methods to Assess Beta Cell Death Mediated by Cytotoxic T Lymphocytes

طرق لتقييم موت الخلايا بيتا وساطة من قبل الخلايا اللمفاوية التائية السامة

Type 1 diabetes (T1D) is a T cell mediated autoimmune disease.  During the pathogenesis, patients become progressively more insulinopenic as 
insulin ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

توسيع الخلايا اللمفاوية T السامة للخلايا من دم الحبل السري أن الفيروس المضخم للخلايا الهدف، فيروس ابشتاين بار، واتش

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

جيل من الخلايا المستحثة تي التنظيمية من المرحلة الابتدائية الإنسان خلايا T ساذجة والذاكرة

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

تنبيغ الفيروسة الغدانية من CD4 الخلايا التائية ساذج لدراسة التمايز Treg

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

العزلة والتمايز TH17 من السذاجة CD4 T الخلايا اللمفاوية

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

اشتقاق خلايا T<em&gt; في المختبر</em&gt; من الفأر الجنينية الخلايا الجذعية

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

التمايز في المختبر من خلايا CD4 الإنسان + FOXP3 + المستحثة تنظيم الخلايا التائية (iTregs) من خلايا CD4 + T السذاجة باستخدام بروتوكول تحتوي على TGF-β-

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

Rapid Quantification of Mitogen-induced Blastogenesis in T Lymphocytes for Identifying Immunomodulatory Drugs

الكمي السريع لمأرمي يسببها Mitogen في اللمفاويات التائية لتحديد الأدوية المناعية

Lymphocyte proliferation in response to antigenic or mitogenic stimulation is a readily quantifiable phenomenon useful for testing immunomodulatory (i.e., ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

An In Vivo Mouse Model to Measure NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

نموذج ماوس في فيفو إلى تدبير السذاجة CD4 تي خلية التنشيط وانتشارها والتمايز Th1 الناجمة عن الخلايا الجذعية المشتقة من نخاع العظام

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...

Induced Differentiation of M Cell-like Cells in Human Stem Cell-derived Ileal Enteroid Monolayers

التمايز المستحث للخلايا الشبيهة بالخلايا M في الطبقات الأحادية المعوية اللفائفية المشتقة من الخلايا الجذعية البشرية

M (microfold) cells of the intestine function to transport antigen from the apical lumen to the underlying Peyer&#8217;s patches and lamina propria where ...