Name: directed differentiation of induced pluripotent stem cells towards t lymphocytes
Uploaded: 2012-05-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes at JoVE.com

אנו מודים לד&quot;ר Shinya יאמאנאקה (אוניברסיטת קיוטו) למתן iPS-MEF-NG-20D-17 תאים בשורה, ד&quot;ר דריו Vignali (בית החולים למחקר סנט ג&#39;וד ילדים) לתמיכה OT1-2A • pMig השנייה מבנה, ד&quot;ר חואן קרלוס Zuniga-Pflucker (המחלקה לאימונולוגיה, אוניברסיטת טורונטו) על תמיכתה קו OP9-DL1 התא, וד&quot;ר קנט E Vrana (המחלקה לפרמקולוגיה, פן סטייט קולג&#39; לרפואה) על העזרה את העיצוב של מחקר זה. פרויקט זה ממומן, תחת מענקים עם מספר גרנט K18CA151798 מן המכון הלאומי לסרטן, אמון Barsumian ואת קרן מחקר מלנומה (שיר ג&#39;).

1. תא תרבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנת תאים מזין מוקרן SNL76 / 7 (irSNL76 / 7) עבור התרבות. SNL76 / 7 תאים נשמרים בדרך כלל סרום 10% שור עוברית (FBS) שינוי Dulbecco הנשרים בינוני (DMEM) התקשורת. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מנה תרבות או הבקבוק י...

<ol>
	<li>Brenner, M. K., Heslop, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+T+cell+therapy+of+cancer.">Adoptive T cell therapy of cancer.</a> Curr. Opin. Immunol. 22, 251-257 (2010).</li><li>Hataye, J., Moon, J. J., Khoruts, A., Reilly, C., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+and+memory+CD4++T+cell+survival+controlled+by+clonal+abundance.">Naive and memory CD4+ T cell survival controlled by clonal abundance.</a> Science. 312, 114-116 (2006).</li><li>Seki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7/STAT5+cytokine+signaling+pathway+is+essential+but+insufficient+for+maintenance+of+naive+CD4+T+cell+survival+in+peripheral+lymphoid+organs.">IL-7/STAT5 cytokine signaling pathway is essential but insufficient for maintenance of naive CD4 T cell survival in peripheral lymphoid organs.</a> J. Immunol. 178, 262-270 (2007).</li><li>Stemberger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+naive+CD8++T+cell+precursor+can+develop+into+diverse+effector+and+memory+subsets.">A single naive CD8+ T cell precursor can develop into diverse effector and memory subsets.</a> Immunity. 27, 985-997 (2007).</li><li>Siewert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-driven+development:+effector/memory-like+alphaE+Foxp3++regulatory+T+cells+originate+from+both+naive+T+cells+and+naturally+occurring+naive-like+regulatory+T+cells.">Experience-driven development: effector/memory-like alphaE+Foxp3+ regulatory T cells originate from both naive T cells and naturally occurring naive-like regulatory T cells.</a> J. Immunol. 180, 146-155 (2008).</li><li>Wang, L. X., Plautz, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-primed,+in+vitro-activated+CD4++effector+T+cells+establish+long-term+memory+without+exogenous+cytokine+support+or+ongoing+antigen+exposure.">Tumor-primed, in vitro-activated CD4+ effector T cells establish long-term memory without exogenous cytokine support or ongoing antigen exposure.</a> J. Immunol. 184, 5612-5618 (2010).</li><li>Hinrichs, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+effector+CD8++T+cells+derived+from+naive+rather+than+memory+subsets+possess+superior+traits+for+adoptive+immunotherapy.">Human effector CD8+ T cells derived from naive rather than memory subsets possess superior traits for adoptive immunotherapy.</a> Blood. 117, 808-814 (2011).</li><li>Alajez, N. M., Schmielau, J., Alter, M. D., Cascio, M., Finn, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+a+tumor-specific,+MHC-unrestricted+T-cell+receptor+expressed+on+effector+cells+of+the+innate+and+the+adaptive+immune+system+through+bone+marrow+transduction+and+immune+reconstitution.">Therapeutic potential of a tumor-specific, MHC-unrestricted T-cell receptor expressed on effector cells of the innate and the adaptive immune system through bone marrow transduction and immune reconstitution.</a> Blood. 105, 4583-4589 (2005).</li><li>Yang, L., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+in+vivo+provision+of+antigen-specific+T+cell+immunity+by+programming+hematopoietic+stem+cells.">Long-term in vivo provision of antigen-specific T cell immunity by programming hematopoietic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 4518-4523 (2005).</li><li>Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrathymic+generation+of+tumor-specific+T+cells+from+genetically+engineered+human+hematopoietic+stem+cells+via+Notch+signaling.">Extrathymic generation of tumor-specific T cells from genetically engineered human hematopoietic stem cells via Notch signaling.</a> Cancer Res. 67, 2425-2429 (2007).</li><li>Boztug, K., Med, N. .. E. n. g. l. .. J. .. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-cell+gene+therapy+for+the+Wiskott-Aldrich+syndrome.">Stem-cell gene therapy for the Wiskott-Aldrich syndrome.</a> N. Engl. J. Med. 363, 1918-1927 (2010).</li><li>Peerani, R., Zandstra, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enabling+stem+cell+therapies+through+synthetic+stem+cell-niche+engineering.">Enabling stem cell therapies through synthetic stem cell-niche engineering.</a> J. Clin. Invest. 120, 60-70 (2010).</li><li>Mendez-Ferrer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+and+haematopoietic+stem+cells+form+a+unique+bone+marrow+niche.">Mesenchymal and haematopoietic stem cells form a unique bone marrow niche.</a> Nature. 466, 829-834 (2010).</li><li>Daley, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+the+generation+of+patient-specific+pluripotent+stem+cells+for+combined+gene+and+cell+therapy+of+hematologic+disorders.">Towards the generation of patient-specific pluripotent stem cells for combined gene and cell therapy of hematologic disorders.</a> Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program. , 17-22 (2007).</li><li>Boitano, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aryl+hydrocarbon+receptor+antagonists+promote+the+expansion+of+human+hematopoietic+stem+cells.">Aryl hydrocarbon receptor antagonists promote the expansion of human hematopoietic stem cells.</a> Science. 329, 1345-1348 (2010).</li><li>Himburg, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotrophin+regulates+the+expansion+and+regeneration+of+hematopoietic+stem+cells.">Pleiotrophin regulates the expansion and regeneration of hematopoietic stem cells.</a> Nat. Med. 16, 475-482 (2010).</li><li>Tanigaki, K., Honjo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+lymphocyte+development+by+Notch+signaling.">Regulation of lymphocyte development by Notch signaling.</a> Nature immunology. 8, 451-456 (2007).</li><li>Zhao, T., Zhang, Z. N., Rong, Z., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Immunogenicity of induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 474, 212-215 (2011).</li></ol>

<html> עבור ACT מבוססי טיפולים, בדור חוץ גופית של מספרים גדולים הפערים תגובתי Ag ספציפית בתאי T עבור in vivo מחדש עירוי היא גישה אופטימלית. אמנם שיטה במבחנה שלנו מעורר של תאים T תפקודית של תאים iPS, מספרים גדולים של שב&quot;ס תאים שמקורם בתאי למות ארבעה שבועות, במיוחד ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> C57BL/6J עכברים </td><td> ג&#39;קסון מעבדה </td><td> 000664 </td></tr><tr><td> B6.129S7-Rag1 tm1Mom / J </td><td> ג&#39;קסון מעבדה </td><td> 002216 </td></tr><tr><td> Anti-CD3 (2C11) נוגדן </td><td> BD PharMingen </td><td> 553058 </td></tr><tr><td> Anti-CD28 (37.51) נוגדן </td><td> BD PharMingen </td><td> 553295 </td></tr><tr><td> Anti-CD3 (17A2) נוגדן </td><td> BioLegend </td><td> 100202 </td></tr><tr><td> אנטי CD4 (GK1.5) נוגדן </td><td> BioLegend </td><td> 100417 </td></tr><tr><td> Anti-CD8 (53-6.7) נוגדן </td><td> BioLegend </td><td> 100714 </td></tr><tr><td> Anti-CD25 (3C7) נוגדן </td><td> BioLegend </td><td> 101912 </td></tr><tr><td>TI-CD44 (1M7) נוגדן </td><td> BioLegend </td><td> 103012 </td></tr><tr><td> Anti-CD117 (2B8) נוגדן </td><td> BioLegend </td><td> 105812 </td></tr><tr><td> Anti-TCR-β (H57597) נוגדן </td><td> BioLegend </td><td> 109220 </td></tr><tr><td> Anti-IL-2 (JES6-5H4) נוגדן </td><td> BioLegend </td><td> 503810 </td></tr><tr><td> Anti-IFN-γ (XMG1.2) נוגדן </td><td> BioLegend </td><td> 505822 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> ABCD1234 </td></tr><tr><td> α-MEM </td><td> Invitrogen </td><td> A10490-01 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> HyClone </td><td> SH3007.01 </td></tr><tr><td> Brefeldin </td><td> סיגמא </td><td> B7651 </td></tr><tr><td> Polybrene </td><td> סיגמא </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> GeneJammer </td><td> משולב למדעי </td><td> 204130 </td></tr><tr><td> RNA ערכת &lt;/ Td&gt; <td> Qiagen </td><td> 74104 </td></tr><tr><td> ערכת ה-DNA </td><td> Qiagen </td><td> 69504 </td></tr><tr><td> ערכת בידוד CD8 </td><td> Miltenyi BIOTEC </td><td> 130-095-236 </td></tr><tr><td> תמוגה ACK חיץ </td><td> Lonza </td><td> 10-548E </td></tr><tr><td> mFlt-3L </td><td> PeproTech </td><td> 250-31L </td></tr><tr><td> MIL-7 </td><td> PeproTech </td><td> 217-17 </td></tr><tr><td> ג&#39;לטין </td><td> סיגמא </td><td> G9391 </td></tr><tr><td> FITC אנטי-OVA נוגדן </td><td> רוקלנד Immunochemicals </td><td> 200-4233 </td></tr><tr><td> Permeabilization חיץ </td><td> Biolegend </td><td> 421002 </td></tr><tr><td> BSA </td><td> סיגמא </td><td> A7906 </td></tr><tr><td> פורמלדהיד </td><td> סיגמא </td><td> F8775 </td></tr><tr><td> 0.4 מיקרומטר סינון </td><td> Millipore </td><td></td></tr><tr><td&gt; Moflo סדרן Cell </td><td> Dake Cytomation </td><td></td></tr><tr><td> Calibur Cytometer Flow </td><td> BD </td><td></td></tr><tr><td> LSR II Cytometer Flow </td><td> BD </td><td></td></tr><tr><td> עכבר עוצר </td><td> Braintree Scientific </td><td></td></tr></tbody></table>

directed differentiation of induced pluripotent stem cells towards t lymphocytes

העברת תא המאמצת (ACT) של אנטיגן ספציפי CD8 + לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיים (ההרג) הוא טיפול מבטיח עבור מגוון רחב של מחלות ממאירות 1. ההרג יכול לזהות תאים ממאירים על ידי אינטראקציה אנטיגנים סרטניים עם קולטני תא ה-T (TCR) ו cytotoxins השחרור, כמו גם ציטוקינים להרוג תאים ממאירים. ידוע כי פחות מובחן ומרכז זיכרון (כמו שמכונה תגובתי) ההרג הם האוכלוסייה האופטימלי עבור חיסוני ACT מבוסס, כי ההרג האלה יש פוטנציאל שגשוג גבוהה, נוטים פחות אפופטוזיס מאשר תאים מובחנים יותר יש יכולת גבוהה יותר להגיב ציטוקינים homeostatic 2-7. עם זאת, בשל קשיים בהשגת מספר רב של ההרג של חולים כאלה, יש צורך דחוף למצוא גישה חדשה ליצירת תגובתי Ag-ספציפיים ההרג עבור ACT מבוססי טיפולים מוצלחים. TCR התמרה של גזע עצמית מתחדשתתאים עבור הכינון מחדש החיסון יש פוטנציאל תרפויטי בטיפול במחלות 8-10. עם זאת, הגישה להשיג תאים עובריים (ESCs) מן החולים הוא לא ריאלי. למרות השימוש בתאי גזע hematopoietic (HSCs) למטרות טיפוליות הוחל נרחב במרפאה 11-13, HSCs צמצמו בידול יכולות שגשוג, ו HSCs קשה להתרחב ב תרבית תאים במבחנה 14-16. הטכנולוגיה iPS האחרונה התא ופיתוח במערכת במבחנה למסירה גן מסוגלים לייצר תאים iPS מחולים ללא כל גישה ניתוחית. בנוסף, כמו ESCs, תאים iPS בעלי יכולת שגשוג בלתי מוגבלת במבחנה, הוכחו להתמיין לתאי היווצרות הדם. לכן, תאים iPS יש פוטנציאל גדול לשימוש חיסוני ACT מבוסס לעומת ESCs או HSCs. כאן, אנו מציגים שיטות לייצור T lymphocytes מתאי שב&quot;ס במבחנה, בתכנות vivo של אנטיגן ספציפי ההרג של התאים iPS לקידום מעקב סרטן החיסונית. גירוי במבחנה עם ליגנד Notch מניע התמיינות תאים מתאי T IPS, ו - התמרה TCR תוצאות גנים בתאים שב&quot;ס הבחנה לתוך אנטיגן ספציפי בתאי T in vivo, אשר מונע את צמיחת הגידול. לכן, אנחנו מדגימים אנטיגן ספציפי התמיינות תאים מתאי T שב&quot;ס. המחקרים שלנו לספק גישה פוטנציאל יעיל יותר להפקת אנטיגנים ספציפיים ההרג עבור ACT טיפולים מבוססי ולאפשר פיתוח של אסטרטגיות טיפוליות למחלות.

Watch this Scientific Journal Video about Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes at JoVE.com

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

הדור של לימפוציטים T מ המושרה גזע pluripotent (שב&quot;ס) תאים נותן גישה חלופית של שימוש בתאי גזע עובריים על חיסוני מבוססי תאים T. השיטה מלמדת כי על ידי ניצול או<em&gt; במבחנה</em&gt; או<em&gt; In vivo</em&gt; מערכת אינדוקציה, תאים iPS מסוגלים להתמיין לימפוציטים מסוג T הן קונבנציונליים אנטיגן ספציפי.

התמיינות מכוונת של המושרה בתאי גזע pluripotent כלפי לימפוציטים-T

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Methods to Assess Beta Cell Death Mediated by Cytotoxic T Lymphocytes

שיטות להעריך מתווכת בטא מוות של תאים על ידי לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיות

Type 1 diabetes (T1D) is a T cell mediated autoimmune disease.  During the pathogenesis, patients become progressively more insulinopenic as 
insulin ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

הרחבת לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיים מדם טבורים שציטומגלווירוס יעד, וירוס אפשטיין באר, וadenovirus

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

דור של מושרה תאים T רגולטוריים של האדם תאים ראשוניים טי נאיביות וזיכרון

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

התמרה adenoviral של CD4 תמימים תאי T ללמוד בידול Treg

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

בידוד ובידול של Th17 הנאיביים T מסוג CD4 לימפוציטים

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

גזירה של תאי T<em&gt; במבחנה</em&gt; מתאי עכבר גזע העובריים

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

במבחנה בידול של האדם CD4 + FOXP3 + מושרה תקינה בתאי T (iTregs) מ נאיבית CD4 + T תאים באמצעות פרוטוקול TGF-β-המכיל

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

Rapid Quantification of Mitogen-induced Blastogenesis in T Lymphocytes for Identifying Immunomodulatory Drugs

כימות מהיר של Blastogenesis mitogen-Induced T לימפוציטים לזיהוי סמים המערכת החיסונית

Lymphocyte proliferation in response to antigenic or mitogenic stimulation is a readily quantifiable phenomenon useful for testing immunomodulatory (i.e., ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

An In Vivo Mouse Model to Measure NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

מודל העכבר In Vivo הפעלת תא T CD4 תמים מידה, התפשטות של בידול Th1 הנגרם על ידי תאים דנדריטים הנגזרות מח עצם

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...

Induced Differentiation of M Cell-like Cells in Human Stem Cell-derived Ileal Enteroid Monolayers

המושרה בידול של תאים כמו תא בתאי גזע האדם-הנגזר הנגזרת מונאואיד Monolayers

M (microfold) cells of the intestine function to transport antigen from the apical lumen to the underlying Peyer&#8217;s patches and lamina propria where ...