Name: directed differentiation of induced pluripotent stem cells towards t lymphocytes
Uploaded: 2012-05-14T13:00:00
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我々は、OT1-2A•pMig II構造、博士はファンをサポートするためのIPS-MEF-NG-20D-17細胞株は、博士ダリオVignali（セントジュード小児研究病院）を提供するための博士山中伸弥（京都大学）に感謝本研究の設計を支援するためのカルロスOP9-DL1のセルラインをサポートするためのスニガ-Pflucker（免疫学教室、トロント大学）、博士ケントEブラーナ（薬理学教室医学のペンシルベニア州立大学）。このプロジェクトは、国立がん研究所、Barsumian信頼とメラノーマ研究財団（J.の歌）からのグラント番号K18CA151798の助成のもと、運営されている。

1。細胞培養<ol><li>培養のための（irSNL76 / 7）SNL76 / 7照射フィーダー細胞の調製。 SNL76 / 7細胞は、一般的に10％ウシ胎児血清（FBS）を添加したダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）培地中で維持されます。 <ol><li>液体窒素からSNL76 / 7細胞を回収する前に30分間インキュベーター、培養皿またはフラスコを、37の0.1％ゼラチン溶液°Cで被覆されています。 </li><li> SNL76 / 7細胞がコンフルエント...

<ol>
	<li>Brenner, M. K., Heslop, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+T+cell+therapy+of+cancer.">Adoptive T cell therapy of cancer.</a> Curr. Opin. Immunol. 22, 251-257 (2010).</li><li>Hataye, J., Moon, J. J., Khoruts, A., Reilly, C., Jenkins, M. 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<html> ACT-ベースの治療のために、in vivoでの再注入のための反応性の高い銀特異的T細胞の多数の in vitro生成の最適なアプローチです。私たちのin vitro法では、iPS細胞、iPS細胞由来の細胞は、特に4週目、4週間で死亡し、多数のより機能的なT細胞の増加を与えるが。我々は、ノッチからの生存信号がDL1と同様にIL-7とFLt3LがiPS細胞由来の前駆T細胞の生存を維持する...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td> C57BL/6Jマウス</td><td>ジャクソン研究所</td><td> 000664 </td></tr><tr><td> B6.129S7-RAG1 tm1Mom / J </td><td>ジャクソン研究所</td><td> 002216 </td></tr><tr><td>抗CD3（2C11）抗体</td><td> BD PharMingen社</td><td> 553058 </td></tr><tr><td>抗CD28（37.51）抗体</td><td> BD PharMingen社</td><td> 553295 </td></tr><tr><td>抗CD3（17A2）抗体</td><td> BioLegend </td><td> 100202 </td></tr><tr><td>抗CD4（GK1.5）抗体</td><td> BioLegend </td><td> 100417 </td></tr><tr><td>抗CD8（53から6.7）抗体</td><td> BioLegend </td><td> 100714 </td></tr><tr><td>抗CD25（3C7）抗体</td><td> BioLegend </td><td> 101912 </td></tr><tr><td>不定冠詞TI-CD44（1M7）抗体</td><td> BioLegend </td><td> 103012 </td></tr><tr><td>抗CD117（2B8）抗体</td><td> BioLegend </td><td> 105812 </td></tr><tr><td>抗TCR-β（H57597）抗体</td><td> BioLegend </td><td> 109220 </td></tr><tr><td>抗IL-2（JES6-5H4）抗体</td><td> BioLegend </td><td> 503810 </td></tr><tr><td>抗IFN-γ（XMG1.2）抗体</td><td> BioLegend </td><td> 505822 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td>インビトロジェン</td><td> ABCD1234 </td></tr><tr><td> α-MEM </td><td>インビトロジェン</td><td> A10490-01 </td></tr><tr><td> FBS </td><td>ハイクローン</td><td> SH3007.01 </td></tr><tr><td>ブレフェルジン</td><td>シグマ</td><td> B7651 </td></tr><tr><td>ポリブレン</td><td>シグマ</td><td> 107689 </td></tr><tr><td> GeneJammer </td><td>統合された科学</td><td> 204130 </td></tr><tr><td> RNAキット&lt;/ TD&gt; <td>キアゲン</td><td> 74104 </td></tr><tr><td> DNAキット</td><td>キアゲン</td><td> 69504 </td></tr><tr><td> CD8アイソレーションキット</td><td>ミルテニーバイオテク</td><td> 130-095-236 </td></tr><tr><td> ACK溶解緩衝液</td><td>ロンザ</td><td> 10-548E </td></tr><tr><td> mFlt-3L </td><td>ぺプロ</td><td> 250-31L </td></tr><tr><td> MIL-7 </td><td>ぺプロ</td><td> 217から17 </td></tr><tr><td>ゼラチン</td><td>シグマ</td><td> G9391 </td></tr><tr><td> FITC-抗OVA抗体</td><td>ロックランドのImmunochemicals </td><td> 200-4233 </td></tr><tr><td>透過バッファ</td><td> Biolegend </td><td> 421002 </td></tr><tr><td> BSA </td><td>シグマ</td><td> A7906 </td></tr><tr><td>ホルムアルデヒド</td><td>シグマ</td><td> F8775 </td></tr><tr><td> 0.4μmのフィルター</td><td>ミリポア</td><td></td></tr><tr><td&gt; Mofloセルソーター</td><td>岳サイトメー</td><td></td></tr><tr><td>ソウルキャリバーフローサイトメーター</td><td> BD </td><td></td></tr><tr><td> LSR IIフローサイトメーター</td><td> BD </td><td></td></tr><tr><td>マウス制止する</td><td>トリーサイエンティフィック</td><td></td></tr></tbody></table>

directed differentiation of induced pluripotent stem cells towards t lymphocytes

抗原特異的CD8 +細胞傷害性Tリンパ球（CTL）の養子細胞移植（ACT）は、悪性腫瘍の1様々な有望な治療法です。 CTLは、悪性細胞を殺すためにT細胞受容体（TCR）、およびリリース毒素だけでなく、サイトカインと腫瘍抗原を作用することにより悪性腫瘍細胞を認識することができます。これは、これらのCTLは、高い増殖能を持っているより分化した細胞よりもアポトーシスが少ない傾向があると持っているのであまり差別化（ 高反応性と呼ばれる）は、中央メモリのようなCTLは、ACT-ベースの免疫療法に最適な集団であることが知られている恒常性サイトカイン2-7に応答する能力が高い。しかし、患者からこのようなCTLの高い数値を得ることが困難なため、成功したACT-ベースの治療のために反応性の高い銀特異的CTLを生成するための新しいアプローチを見つけることが急務である。 自己再生幹細胞のTCR伝達免疫再構築のための細胞が病気8月10日の治療のための治療可能性を秘めています。しかし、患者から胚性幹細胞（ESCは）を取得するためのアプローチは現実的ではありません。治療目的のための造血幹細胞（HSC）の使用は広くクリニック11-13に適用されていますが、造血幹細胞は、分化と増殖能力が低下していると、造血幹細胞は 、in vitro細胞培養14-16で展開することが困難である。最近のiPS細胞技術と遺伝子送達のためのin vitro系の開発は、すべての外科的アプローチせずに患者からiPS細胞を生成することができる。さらに、ESCのように、iPS細胞は 、in vitro で無限増殖能を有しており、造血細胞に分化することが示されている。このように、iPS細胞は、ESCのまたは造血幹細胞に比べ、ACTベースの免疫療法で使用される大きな可能性を持っています。 ここでは、Tリンパ球を生成するための方法を提示in vitroで 、やiPS細胞からの抗原特異的CTL の in vivoでのプログラミングにおける癌免疫監視を促進するためのiPS細胞からcytes。 Notchリガンドのin vitroでの刺激は、iPS細胞からT細胞分化を駆動し、腫瘍の増殖を防ぐことが生体内で抗原特異的T細胞に分化するiPS細胞のTCR遺伝子導入の結果。したがって、私たちは、iPS細胞からの抗原特異的T細胞の分化を示しています。我々の研究では、ACT-ベースの治療のための抗原特異的CTLを生成するための潜在的に、より効率的なアプローチを提供し、疾患の治療戦略の開発を容易にします。

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Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

人工多能性幹（iPS）細胞からTリンパ球の生成は、T細胞ベースの免疫療法のために胚性幹細胞を使用する代替アプローチを提供します。メソッドは、どちらを利用することによってことを示しています<em&gt; in vitroで</em&gt;または<emin vivoでの&gt;</em&gt;誘導システムでは、iPS細胞は従来、抗原特異的Tリンパ球の両方に分化することができます。

Tリンパ球に向かって誘導多能性幹細胞の分化の指示

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Methods to Assess Beta Cell Death Mediated by Cytotoxic T Lymphocytes

傷害性Tリンパ球によって媒介ベータ細胞死を評価するための方法

Type 1 diabetes (T1D) is a T cell mediated autoimmune disease.  During the pathogenesis, patients become progressively more insulinopenic as 
insulin ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

臍帯血から細胞傷害性Tリンパ球の拡大をそのターゲットサイトメガロウイルス、エプスタイン - バーウイルス、およびアデノウイルス

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

初代ヒトナイーブおよびメモリーT細胞から誘導した調節性T細胞の生成

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

ナイーブCD4のアデノウイルス形質導入Tregの分化を研究するためにT細胞

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

離とナイーブCD4 Tリンパ球のTh17分化

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

T細胞の導出<em&gt;体外</em&gt;マウス胚性幹細胞からの

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

TGF-βを含むプロトコルを使用したナイーブCD4 + T細胞からのヒトCD4 + FOXP3 +誘導された調節性T細胞（iTregs）のインビトロ分化における

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

Rapid Quantification of Mitogen-induced Blastogenesis in T Lymphocytes for Identifying Immunomodulatory Drugs

免疫調節薬を同定するためのTリンパ球におけるマイトジェン誘導性の幼若の迅速定量

Lymphocyte proliferation in response to antigenic or mitogenic stimulation is a readily quantifiable phenomenon useful for testing immunomodulatory (i.e., ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

An In Vivo Mouse Model to Measure NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

メジャー ナイーブ cd4 陽性 T 細胞の活性化、増殖と骨髄由来樹状細胞による th1 細胞分化をIn Vivoマウス モデル

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...

Induced Differentiation of M Cell-like Cells in Human Stem Cell-derived Ileal Enteroid Monolayers

ヒト幹細胞由来腸腸単層におけるM細胞様細胞の誘導分化

M (microfold) cells of the intestine function to transport antigen from the apical lumen to the underlying Peyer&#8217;s patches and lamina propria where ...