Name: directed differentiation of induced pluripotent stem cells towards t lymphocytes
Uploaded: 2012-05-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes at JoVE.com

Biz sağlamak için Dr Shinya Yamanaka (Kyoto Üniversitesi) teşekkür iPS-MEF-Ng-20D-17 hücre hattı, OT1-2A destekleyen Dr Dario Vignali (St Jude Çocuk Araştırma Hastanesi) • pMig II yapı, Dr Juan Carlos PÇ9-DL1 hücre hattı destekleyen Zuniga-Pflucker (İmmünoloji Bölümü, University of Toronto), ve bu çalışmanın tasarımı yardım için Dr Kent E Vrana (Farmakoloji Anabilim Dalı, Tıp Penn State Üniversitesi). Bu proje Ulusal Kanser Enstitüsü, Barsumian Güven ve Melanom Araştırma Vakfı (J. Şarkısı) adlı Hibe Numarası K18CA151798 ile hibe altında finanse edilmektedir.

1. Hücre Kültürü <ol><li> Kültür için (irSNL76 / 7) SNL76 / 7 ışınlanmış besleyici hücrelerin hazırlanması. SNL76 / 7 hücreleri genel olarak% 10 fetal bovin serumu (FBS) Dulbecco Modifiye Eagle Ortamı (DMEM) ortamında muhafaza edilir. <ol><li> Sıvı azot SNL76 / 7 hücreleri kurtarmadan önce 30 dakika süreyle inkübatör; bir kültür çanak veya cam şişe 37% 0,1 jelatin çözeltisi ° C ile kaplı olacaktır. </li><li> SNL76 / 7 hücreler konfluense ulaştığında, hücreler tripsinize ...

<ol>
	<li>Brenner, M. K., Heslop, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+T+cell+therapy+of+cancer.">Adoptive T cell therapy of cancer.</a> Curr. Opin. Immunol. 22, 251-257 (2010).</li><li>Hataye, J., Moon, J. J., Khoruts, A., Reilly, C., Jenkins, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naive+and+memory+CD4++T+cell+survival+controlled+by+clonal+abundance.">Naive and memory CD4+ T cell survival controlled by clonal abundance.</a> Science. 312, 114-116 (2006).</li><li>Seki, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-7/STAT5+cytokine+signaling+pathway+is+essential+but+insufficient+for+maintenance+of+naive+CD4+T+cell+survival+in+peripheral+lymphoid+organs.">IL-7/STAT5 cytokine signaling pathway is essential but insufficient for maintenance of naive CD4 T cell survival in peripheral lymphoid organs.</a> J. Immunol. 178, 262-270 (2007).</li><li>Stemberger, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+naive+CD8++T+cell+precursor+can+develop+into+diverse+effector+and+memory+subsets.">A single naive CD8+ T cell precursor can develop into diverse effector and memory subsets.</a> Immunity. 27, 985-997 (2007).</li><li>Siewert, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-driven+development:+effector/memory-like+alphaE+Foxp3++regulatory+T+cells+originate+from+both+naive+T+cells+and+naturally+occurring+naive-like+regulatory+T+cells.">Experience-driven development: effector/memory-like alphaE+Foxp3+ regulatory T cells originate from both naive T cells and naturally occurring naive-like regulatory T cells.</a> J. Immunol. 180, 146-155 (2008).</li><li>Wang, L. X., Plautz, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-primed,+in+vitro-activated+CD4++effector+T+cells+establish+long-term+memory+without+exogenous+cytokine+support+or+ongoing+antigen+exposure.">Tumor-primed, in vitro-activated CD4+ effector T cells establish long-term memory without exogenous cytokine support or ongoing antigen exposure.</a> J. Immunol. 184, 5612-5618 (2010).</li><li>Hinrichs, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+effector+CD8++T+cells+derived+from+naive+rather+than+memory+subsets+possess+superior+traits+for+adoptive+immunotherapy.">Human effector CD8+ T cells derived from naive rather than memory subsets possess superior traits for adoptive immunotherapy.</a> Blood. 117, 808-814 (2011).</li><li>Alajez, N. M., Schmielau, J., Alter, M. D., Cascio, M., Finn, O. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+potential+of+a+tumor-specific,+MHC-unrestricted+T-cell+receptor+expressed+on+effector+cells+of+the+innate+and+the+adaptive+immune+system+through+bone+marrow+transduction+and+immune+reconstitution.">Therapeutic potential of a tumor-specific, MHC-unrestricted T-cell receptor expressed on effector cells of the innate and the adaptive immune system through bone marrow transduction and immune reconstitution.</a> Blood. 105, 4583-4589 (2005).</li><li>Yang, L., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+in+vivo+provision+of+antigen-specific+T+cell+immunity+by+programming+hematopoietic+stem+cells.">Long-term in vivo provision of antigen-specific T cell immunity by programming hematopoietic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 4518-4523 (2005).</li><li>Zhao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extrathymic+generation+of+tumor-specific+T+cells+from+genetically+engineered+human+hematopoietic+stem+cells+via+Notch+signaling.">Extrathymic generation of tumor-specific T cells from genetically engineered human hematopoietic stem cells via Notch signaling.</a> Cancer Res. 67, 2425-2429 (2007).</li><li>Boztug, K., Med, N. .. E. n. g. l. .. J. .. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem-cell+gene+therapy+for+the+Wiskott-Aldrich+syndrome.">Stem-cell gene therapy for the Wiskott-Aldrich syndrome.</a> N. Engl. J. Med. 363, 1918-1927 (2010).</li><li>Peerani, R., Zandstra, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enabling+stem+cell+therapies+through+synthetic+stem+cell-niche+engineering.">Enabling stem cell therapies through synthetic stem cell-niche engineering.</a> J. Clin. Invest. 120, 60-70 (2010).</li><li>Mendez-Ferrer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+and+haematopoietic+stem+cells+form+a+unique+bone+marrow+niche.">Mesenchymal and haematopoietic stem cells form a unique bone marrow niche.</a> Nature. 466, 829-834 (2010).</li><li>Daley, G. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+the+generation+of+patient-specific+pluripotent+stem+cells+for+combined+gene+and+cell+therapy+of+hematologic+disorders.">Towards the generation of patient-specific pluripotent stem cells for combined gene and cell therapy of hematologic disorders.</a> Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program. , 17-22 (2007).</li><li>Boitano, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aryl+hydrocarbon+receptor+antagonists+promote+the+expansion+of+human+hematopoietic+stem+cells.">Aryl hydrocarbon receptor antagonists promote the expansion of human hematopoietic stem cells.</a> Science. 329, 1345-1348 (2010).</li><li>Himburg, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pleiotrophin+regulates+the+expansion+and+regeneration+of+hematopoietic+stem+cells.">Pleiotrophin regulates the expansion and regeneration of hematopoietic stem cells.</a> Nat. Med. 16, 475-482 (2010).</li><li>Tanigaki, K., Honjo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+lymphocyte+development+by+Notch+signaling.">Regulation of lymphocyte development by Notch signaling.</a> Nature immunology. 8, 451-456 (2007).</li><li>Zhao, T., Zhang, Z. N., Rong, Z., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunogenicity+of+induced+pluripotent+stem+cells.">Immunogenicity of induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 474, 212-215 (2011).</li></ol>

<html> ACT-temelli tedaviler için, in vivo tekrar infüzyon için son derece reaktif Ag-spesifik T hücreleri çok sayıda in vitro nesil optimal bir yaklaşımdır. Bizim in vitro yöntem iPS hücreleri iPS hücre türetilmiş hücreler, özellikle dört hafta sonra, dört hafta içinde ölmek çok sayıda fonksiyonel dan T hücrelerinin yol açmaktadır rağmen. Bu çentik dan hayatta kalma sinyallerini DL1 hem de IL-7 ve FLt3L iPS hücrelerden türetilen ata T hücrelerinin hayatta...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> C57BL/6J fareler </td><td> Jackson Laboratuvarı </td><td> 000664 </td></tr><tr><td> B6.129S7-Rag1 tm1Mom / J </td><td> Jackson Laboratuvarı </td><td> 002216 </td></tr><tr><td> Anti-CD3 (2C11) antikoru </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553058 </td></tr><tr><td> Anti-CD28 (37,51) adı geçen antikor </td><td> BD Pharmingen </td><td> 553295 </td></tr><tr><td> Anti-CD3 (17A2) antikoru </td><td> BioLegend </td><td> 100202 </td></tr><tr><td> Anti-CD4 (GK1.5) antikoru </td><td> BioLegend </td><td> 100417 </td></tr><tr><td> Anti-CD8 (53-6,7) antikoru </td><td> BioLegend </td><td> 100714 </td></tr><tr><td> Anti-CD25 (3C7) antikoru </td><td> BioLegend </td><td> 101912 </td></tr><tr><td> Anti-CD44 (1M7) antikoru </td><td> BioLegend </td><td> 103012 </td></tr><tr><td> Anti-CD117 (2B8) antikoru </td><td> BioLegend </td><td> 105812 </td></tr><tr><td> Anti-TCR-β (H57597) antikoru </td><td> BioLegend </td><td> 109220 </td></tr><tr><td> Anti-IL-2 (JES6-5H4) antikoru </td><td> BioLegend </td><td> 503810 </td></tr><tr><td> Anti-IFN-γ (XMG1.2) antikoru </td><td> BioLegend </td><td> 505822 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Invitrogen </td><td> ABCD1234 </td></tr><tr><td> α-MEM </td><td> Invitrogen </td><td> A10490-01 </td></tr><tr><td> FBS </td><td> HyClone </td><td> SH3007.01 </td></tr><tr><td> Bir Brefeldin </td><td> Sigma </td><td> B7651 </td></tr><tr><td> Polybrene </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> GeneJammer </td><td> Entegre Bilimler </td><td> 204130 </td></tr><tr><td> RNA kiti &lt;/ Td&gt; <td> Qiagen </td><td> 74104 </td></tr><tr><td> DNA seti </td><td> Qiagen </td><td> 69504 </td></tr><tr><td> CD8 İzolasyon Kiti </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-095-236 </td></tr><tr><td> ACK lizis tamponu </td><td> Lonza </td><td> 10-548E </td></tr><tr><td> mFlt-3L </td><td> PeproTech </td><td> 250-31L </td></tr><tr><td> MIL-7 </td><td> PeproTech </td><td> 217-17 </td></tr><tr><td> Jelâtin </td><td> Sigma </td><td> G9391 </td></tr><tr><td> FITC-anti-OVA antikor </td><td> Rockland Immunokimyasallar </td><td> 200-4233 </td></tr><tr><td> Permeabilization tampon </td><td> Biolegend </td><td> 421002 </td></tr><tr><td> BSA </td><td> Sigma </td><td> A7906 </td></tr><tr><td> Formaldehit </td><td> Sigma </td><td> F8775 </td></tr><tr><td> 0.4 um bir filtreden </td><td> Millipore </td><td></td></tr><tr><td&gt; Moflo Hücre Sıralayıcısı </td><td> Dake Cytomation </td><td></td></tr><tr><td> Calibur Flow Sitometri </td><td> BD </td><td></td></tr><tr><td> LSR II Akış Sitometresi </td><td> BD </td><td></td></tr><tr><td> Fare süzgeç </td><td> Braintree Bilimsel </td><td></td></tr></tbody></table>

directed differentiation of induced pluripotent stem cells towards t lymphocytes

Antijen-spesifik CD8 + sitotoksik T lenfositler (CTL) ve evlatlık hücre transferi (ACT) maligniteleri 1 çeşitliliği için umut verici bir tedavi yöntemidir. CTL&#39;leri Malign hücreleri öldürmek için T hücre reseptörleri (TCR) ve serbest sitotoksin gibi sitokinler ile tümör antijenleri etkileşim suretiyle habis hücrelerin tanıyabilirsiniz. Bu CTL&#39;leri yüksek proliferatif potansiyeli var çünkü, az diferansiye ve merkezi-bellek gibi (yüksek derecede reaktif adlandırılır) CTL&#39;leri ACT tabanlı immünoterapi için optimal nüfus olduğu bilinmektedir, daha farklılaşmış hücreler daha apoptoz daha az yatkındır ve sahip bir homeostatik sitokin 2-7 yanıt yüksek yeteneği. Ancak, hastaların bu tür CTL&#39;leri yüksek bir sayı elde zorluklar nedeniyle, başarılı ACT-temelli tedaviler için son derece reaktif Ag spesifik CTL oluşturmak için yeni bir yaklaşım bulmak için acil bir ihtiyaç vardır. Kendini yenilenebilir kök TCR transdüksiyonimmün sulandırma için hücre hastalıkların 8-10 tedavisi için terapötik bir potansiyele sahiptir. Ancak, hastaların embriyonik kök hücreler (EKH) elde etmek için bir yaklaşım mümkün değildir. Tedavi amaçlı hematopoetik kök hücrelerin kullanımı (HKH&#39;lerin) yaygın klinik 11-13 uygulanmış olmasına rağmen, HKH&#39;lerin farklılaşma ve proliferatif kapasiteleri azalmış ve HKH&#39;lerin in vitro hücre kültürleri 14-16 in genişletmek için zordur. Son iPS hücre teknolojisi ve gen aktarımı için in vitro bir sistem içinde bir gelişme, herhangi bir cerrahi yaklaşım olmadan hastaların iPS hücreleri oluşturma yeteneğine sahiptirler. Buna ek olarak, EKH gibi iPS hücreleri, in vitro olarak belirsiz proliferatif kapasitesine sahip olması, ve hematopoietik hücrelerin farklılaşması için gösterilmiştir. Böylece, iPS hücreleri EKH veya HKH&#39;lerin ile karşılaştırıldığında ACT-tabanlı immünoterapi kullanılmak üzere, daha büyük bir potansiyele sahiptir. Burada, T lenfosit üretimi için yöntemler mevcutin vitro iPS hücrelerden cytes, kanser ve immün gözetim teşvik etmek için iPS hücreleri antijen-spesifik CTL in vivo programlama. Bir Çentik ligand ile in vitro olarak uyarılması iPS hücrelerden T-hücresi farklılaşması sürücüler ve tümör büyümesini engelleyen in vivo antijen-spesifik T hücrelerinin içine ayırt iPS hücreleri içinde TCR gen transdüksiyonu ile sonuçlanır. Böylece, iPS hücreleri antijen-spesifik T hücre farklılaşmasını göstermektedir. Çalışmalarımız ACT-temelli tedaviler için antijen spesifik CTL oluşturmak için bir potansiyel olarak daha verimli bir yaklaşım sağlamak ve hastalıklar için tedavi stratejilerinin geliştirilmesini kolaylaştırmak.

Watch this Scientific Journal Video about Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes at JoVE.com

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

Indüklenmiş pluripotent kök (iPS) hücrelerden T lenfositlerin Nesil T hücre tabanlı immünoterapi için embriyonik kök hücreler kullanarak alternatif bir yaklaşım verir. Yöntem kullanılarak ya da göstermektedir<em&gt; In vitro</em&gt; Veya<em&gt; In vivo</em&gt; Indüksiyon sistemi, iPS hücreleri konvansiyonel ve antijen spesifik hem T lenfositlerin içine ayırt edebiliyoruz.

T Lenfositler doğru İsteyerek Pluripotent Kök Hücrelerinin Yönetmen Farklılaşma

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Methods to Assess Beta Cell Death Mediated by Cytotoxic T Lymphocytes

Sitotoksik T Lenfositler Beta Hücre Ölümü aracılığı ile değerlendirin yöntemleri

Type 1 diabetes (T1D) is a T cell mediated autoimmune disease.  During the pathogenesis, patients become progressively more insulinopenic as 
insulin ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

Kordon Kanı adlı Sitotoksik T lenfositler genişletilmesi olduğunu Hedef Sitomegalovirüs, Epstein-Barr Virus ve Adenovirüs

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

İlköğretim İnsan naif ve Bellek T Hücreleri gelen İsteyerek Düzenleyici T Hücreleri Üretimi

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

Adenoviral Transduction of Naive CD4 T Cells to Study Treg Differentiation

Naif CD4 adenoviral İletimi Treg Farklılaşma Eğitim Hücreler T

Regulatory T cells (Tregs) are essential to provide immune tolerance to self as well as to certain foreign antigens. Tregs can be generated from naive CD4 ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

İzolasyon ve naif CD4 T Lenfositler Th17 Farklılaşma

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

T hücrelerinin türetilmesi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Fare Embriyonik Kök Hücreleri

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

Bir TGF-β-içeren Protokolü kullanılarak naif CD4 + T hücrelerinden insan CD4 + FoxP3 + Bağlı regülatör T hücreleri (iTregs) in vitro ayrımında

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

Rapid Quantification of Mitogen-induced Blastogenesis in T Lymphocytes for Identifying Immunomodulatory Drugs

Bağışıklık ilaçlarının tanımlanmasında T lenfositlerinde mitojen kaynaklı blastojenez hızlı bir şekilde belirlenmesini

Lymphocyte proliferation in response to antigenic or mitogenic stimulation is a readily quantifiable phenomenon useful for testing immunomodulatory (i.e., ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

An In Vivo Mouse Model to Measure NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

Vivo fare modeli ölçü saf CD4 T Hücre aktivasyonu, yayılması ve kemik iliği türevi dendritik hücreler tarafından indüklenen Th1 farklılaşma

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...

Induced Differentiation of M Cell-like Cells in Human Stem Cell-derived Ileal Enteroid Monolayers

Insan kök hücresinde M hücre benzeri hücrelerin kaynaklı farklılaşma-türev ıleal Enteroid Monolayers

M (microfold) cells of the intestine function to transport antigen from the apical lumen to the underlying Peyer&#8217;s patches and lamina propria where ...