Name: polymerase chain reaction: basic protocol plus troubleshooting and optimization strategies
Uploaded: 2012-05-22T12:00:00
Duration: 9 min
Description: Watch this Scientific Journal Video about Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies at JoVE.com

شكر خاص لكريس Reddi في جامعة كاليفورنيا لإقامة الكواشف والمواد الهلامية وتتدفق إلى ايرين ساندرز في جامعة كاليفورنيا للإلهام والتوجيه، والدعم، وتصحيح التجارب المطبعية المخطوطة. وأود أيضا أن جيانكارلو بفضل Costaguta وغريغوري S. باين لتوريد الحمض النووي الجيني الخميرة والاشعال لتضخيم الجين GAL3. وأود أيضا أن أشكر Bhairav ​​شاه لالتقاط الصور من المعدات المخبرية والكواشف المستخدمة لجعل الشكلين 2 - 4. وقدمت التمويل لهذا المشروع من قبل HHMI (HHMI منحة رقم 52006944).

<ol>
	<li>Albert, J., Fenyo, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+sensitive,+and+specific+detection+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+in+clinical+specimens+by+polymerase+chain+reaction+with+nested+primers.">Simple sensitive, and specific detection of human immunodeficiency virus type 1 in clinical specimens by polymerase chain reaction with nested primers.</a> J. Clin. Microbiol. 28, 1560-1564 (1990).</li><li>Baskaran, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uniform+amplification+of+a+mixture+of+deoxyribonucleic+acids+with+varying+GC+content.">Uniform amplification of a mixture of deoxyribonucleic acids with varying GC content.</a> Genome Res. 6, 633-638 (1996).</li><li>Blanchard, M. M., Taillon-Miller, P., Nowotny, P., Nowotny, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR+buffer+optimization+with+uniform+temperature+regimen+to+facilitate+automation.">PCR buffer optimization with uniform temperature regimen to facilitate automation.</a> PCR Methods Appl. 2, 234-240 (1993).</li><li>Borer, P. N., Dengler, B., Tinoco, I., Uhlenbeck, O. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stability+of+ribonucleic+acid+double-stranded+helices.">Stability of ribonucleic acid double-stranded helices.</a> J. Mol. Biol. 86, 843-853 (1974).</li><li>Breslauer, K. J., Frank, R., Blocker, H., Marky, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+DNA+duplex+stability+from+the+base+sequence.">Predicting DNA duplex stability from the base sequence.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 83, 3746-3750 (1986).</li><li>Chou, Q., Russell, M., Birch, D. E., Raymond, J., Bloch, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+pre-PCR+mis-priming+and+primer+dimerization+improves+low-copy-number+amplifications.">Prevention of pre-PCR mis-priming and primer dimerization improves low-copy-number amplifications.</a> Nucleic Acids Res. 20, 1717-1723 (1992).</li><li>Coleman, W. B., Tsongalis, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diagnostics for the clinical laboration. , (2005).</li><li>D'Aquila, R. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximizing+sensitivity+and+specificity+of+PCR+by+pre-amplification+heating.">Maximizing sensitivity and specificity of PCR by pre-amplification heating.</a> Nucleic Acids Res. 19, 3749 (1991).</li><li>Dieffenbach, C. W., Lowe, T. M., Dveksler, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=General+concepts+for+PCR+primer+design.">General concepts for PCR primer design.</a> PCR Methods Appl. 3, S30-S37 (1993).</li><li>Don, R. H., Cox, P. T., Wainwright, B. J., Baker, K., Mattick, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term='Touchdown'+PCR+to+circumvent+spurious+priming+during+gene+amplification.">'Touchdown' PCR to circumvent spurious priming during gene amplification.</a> Nucleic Acids Res. 19, 4008 (1991).</li><li>Erlich, H. A., Gelfand, D., Sninsky, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+the+polymerase+chain+reaction.">Recent advances in the polymerase chain reaction.</a> Science. 252, 1643-1651 (1991).</li><li>Frey, U. H., Bachmann, H. S., Peters, J., Siffert, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PCR-amplification+of+GC-rich+regions:+'slowdown+PCR.">PCR-amplification of GC-rich regions: 'slowdown PCR.</a> Nat. Protoc. 3, 1312-1317 (2008).</li><li>Haqqi, T. M., Sarkar, G., David, C. S., Sommer, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+amplification+with+PCR+of+a+refractory+segment+of+genomic+DNA.">Specific amplification with PCR of a refractory segment of genomic DNA.</a> Nucleic Acids Res. 16, 11844 (1988).</li><li>Henke, W., Herdel, K., Jung, K., Schnorr, D., Loening, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Betaine+improves+the+PCR+amplification+of+GC-rich+DNA+sequences.">Betaine improves the PCR amplification of GC-rich DNA sequences.</a> Nucleic Acids Res. 25, 3957-3958 (1997).</li><li>Innis, M. A., Gelfand, D. H., Sninsky, J. J., White, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> PCR Protocols: A guide to methods and applications. , (1990).</li><li>King, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Molecular Biology. 630, (2010).</li><li>Kleppe, K., Ohtsuka, E., Kleppe, R., Molineux, I., Khorana, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+polynucleotides.+XCVI.+Repair+replications+of+short+synthetic+DNA's+as+catalyzed+by+DNA+polymerases.">Studies on polynucleotides. XCVI. Repair replications of short synthetic DNA's as catalyzed by DNA polymerases.</a> J. Mol. Biol. 56, 341-361 (1971).</li><li>Korbie, D. J., Mattick, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Touchdown+PCR+for+increased+specificity+and+sensitivity+in+PCR+amplification.">Touchdown PCR for increased specificity and sensitivity in PCR amplification.</a> Nat. Protoc. 3, 1452-1456 (2008).</li><li>Kramer, M. F., Coen, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+amplification+of+DNA+by+PCR:+standard+procedures+and+optimization.">Enzymatic amplification of DNA by PCR: standard procedures and optimization.</a> Curr. Protoc. Toxicol. Appendix 3, 1-14 (2001).</li><li>Kramer, M. F., Coen, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+polymerase+chain+reaction.">The polymerase chain reaction.</a> Curr. Protoc. Protein Sci. Appendix 4, Appendix 4J (2002).</li><li>Kreader, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relief+of+amplification+inhibition+in+PCR+with+bovine+serum+albumin+or+T4+gene+32+protein.">Relief of amplification inhibition in PCR with bovine serum albumin or T4 gene 32 protein.</a> Appl. Environ. Microbiol. 62, 1102-1106 (1996).</li><li>Kwok, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+immunodeficiency+virus+sequences+by+using+in+vitro+enzymatic+amplification+and+oligomer+cleavage+detection.">Identification of human immunodeficiency virus sequences by using in vitro enzymatic amplification and oligomer cleavage detection.</a> J. Virol. 61, 1690-1694 (1987).</li><li>McConlogue, L., Brow, M. A., Innis, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure-independent+DNA+amplification+by+PCR+using+7-deaza-2'-deoxyguanosine.">Structure-independent DNA amplification by PCR using 7-deaza-2'-deoxyguanosine.</a> Nucleic Acids Res. 16, 9869 (1988).</li><li>Mullis, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unusual+origin+of+the+polymerase+chain+reaction.">The unusual origin of the polymerase chain reaction.</a> Sci. Am. 262, 56-65 (1990).</li><li>Mullis, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+amplification+for+DNA+analysis+by+the+polymerase+chain+reaction.">Target amplification for DNA analysis by the polymerase chain reaction.</a> Ann. Biol. Clin. (Paris). 48, 579-582 (1990).</li><li>Mullis, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+polymerase+chain+reaction+in+an+anemic+mode:+how+to+avoid+cold+oligodeoxyribonuclear+fusion).">The polymerase chain reaction in an anemic mode: how to avoid cold oligodeoxyribonuclear fusion).</a> PCR Methods Appl. 1, 1-4 (1991).</li><li>Mullis, K. B., Faloona, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+synthesis+of+DNA+in+vitro+via+a+polymerase-catalyzed+chain+reaction.">Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-catalyzed chain reaction.</a> Methods Enzymol. 155, 335-350 (1987).</li><li>Paabo, S., Gifford, J. A., Wilson, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+DNA+sequences+from+a+7000-year+old+brain.">Mitochondrial DNA sequences from a 7000-year old brain.</a> Nucleic Acids Res. 16, 9775-9787 (1988).</li><li>Rees, W. A., Yager, T. D., Korte, J., von Hippel, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Betaine+can+eliminate+the+base+pair+composition+dependence+of+DNA+melting.">Betaine can eliminate the base pair composition dependence of DNA melting.</a> Biochemistry. 32, 137-144 (1993).</li><li>Roux, K. H., Hecker, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-step+optimization+using+touchdown+and+stepdown+PCR.">One-step optimization using touchdown and stepdown PCR.</a> Methods Mol. Biol. 67, 39-45 (1997).</li><li>Rychlik, W., Spencer, W. J., Rhoads, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+annealing+temperature+for+DNA+amplification+in+vitro.">Optimization of the annealing temperature for DNA amplification in vitro.</a> Nucleic Acids Res. 18, 6409-6412 (1990).</li><li>Saiki, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primer-directed+enzymatic+amplification+of+DNA+with+a+thermostable+DNA+polymerase.">Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase.</a> Science. 239, 487-491 (1988).</li><li>Saiki, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+amplification+of+beta-globin+genomic+sequences+and+restriction+site+analysis+for+diagnosis+of+sickle+cell+anemia.">Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia.</a> Science. 230, 1350-1354 (1985).</li><li>Sambrook, J. A. R., David, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cloning A Laboratory Manual. 2, (2001).</li><li>Sarkar, G., Kapelner, S., Sommer, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formamide+can+dramatically+improve+the+specificity+of+PCR.">Formamide can dramatically improve the specificity of PCR.</a> Nucleic Acids Res. 18, 7465 (1990).</li><li>Smit, V. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=KRAS+codon+12+mutations+occur+very+frequently+in+pancreatic+adenocarcinomas.">KRAS codon 12 mutations occur very frequently in pancreatic adenocarcinomas.</a> Nucleic Acids Res. 16, 7773-7782 (1988).</li><li>Wilson, I. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+and+facilitation+of+nucleic+acid+amplification.">Inhibition and facilitation of nucleic acid amplification.</a> Appl. Environ. Microbiol. 63, 3741-3751 (1997).</li><li>Wu, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Enzymology. 218, (1993).</li></ol>

ليس لدي ما تكشف.

أصبح أداة لا غنى عنها PCR في ترسانة العلوم البيولوجية. غيرت مجرى PCR العلوم السماح علماء الأحياء لانتاج الطاقة على الجينوم، وجعل الجينات المختلطة مع وظائف جديدة، مما يتيح إجراء تجارب سريرية محددة ودقيقة، والحصول على نظرة ثاقبة الجينوم والتنوع، فضلا عن جينات الاستنساخ ببساطة لتحليل كيميائي حيوي آخر. ويقتصر تطبيق PCR فقط من الخيال للعالم أن يتمتع قوتها. هناك العديد من الكتب والأوراق التي تصف استخدامات متخصصة جديدة من PCR، وسيتم تطوير غيرها الكثير في الجيل القادم من العلوم البيولوجية. ومع ذلك، بغض النظر عن النهج المتوقع، فقد ظل الإطار الأساسي نفسه. PCR، في عظمته كل شيء، هو تطبيق في المختبر لتوليد كميات كبيرة من شريحة محددة من الحمض النووي. تصميم تجربة PCR يتطلب تفكيرا والصبر. النتائج مبين في الشكل 3 مثالا واحدا من الفصل الرئيسيةallenges عند تصميم استراتيجية التحسين لPCR. وهذا هو، كما يتم تغيير معلمة واحدة من PCR، فإنه قد يؤثر آخر. وعلى سبيل المثال، إذا تم تنفيذ PCR الأولي بها في درجة حرارة دون المستوى الأمثل الصلب (58 ° C) مع المغنيسيوم 2 + الأمثل تركيز ملي 2.0، ثم ستكون النتيجة إنتاج مسحة كما رأينا في الشكل 3C. قد محاولة لتشويه تنطوي حل إقامة ظروف PCR مع ردود الفعل التي تحتوي على 2،0 ملم MgCl 2 وضبط درجة حرارة الصلب إلى 61 ° C. ومع ذلك، كما رأينا في الشكل 3A، فإن هذا لن تسفر عن أي منتج. وبالتالي، فإنه من المستحسن أن عاير الكواشف، بدلا من إضافة أحد تركيز على رد فعل واحد، عندما مخرج نتائج زائفة. أيضا، التعديلات الأكثر شيوعا التي مطلوبة من أجل تحسين تجربة PCR هي لتغيير تركيز المغنيسيوم + 2 لتصحيح ودرجات الحرارة الصلب. ومع ذلك، إذا كانت هذه التغييرات لا تلغي أو تقلل نتائج شاذة، المعايرة من additiقد فيس و / أو تغيير بروتوكولات حالة ركوب الدراجات كما هو موضح في الجداول 2-6 التخفيف من المشكلة. إذا فشل كل شيء آخر، إعادة تصميم الاشعال وحاول، حاول مرة أخرى.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> طق Polymeras </td><td> سيجما </td><td> D4545-25UN </td><td></td></tr><tr><td> dNTPs </td><td> QIAGEN </td><td> 201225 </td><td></td></tr><tr><td> 0.2 مل أنابيب PCR رقيقة الجدار أنابيب </td><td> راد الحيوي </td><td> 223-9469 </td><td></td></tr><tr><td> 0.2 مل أنبوب جدار رقيق القبعات </td><td> راد الحيوي </td><td> 223-9472 </td><td></td></tr><tr><td> TE العازلة: </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> EDTA ثنائي الصوديوم ثنائي الماء الملح </td><td> سيجما </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma، حمض الهيدروكلوريك </td><td> سيجما </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> مخصص بالعاثية التمهيدي </td><td> إينفيتروجن </td><td colspan="2"> 25441F_RL6_Contig2_68k TACTGCAACGCGATGTTGCG </td></tr><tr><td> مخصص بالعاثية التمهيدي </td><td> إينفيتروجن </td><td colspan="2"> 26007R_RL6_ Contig2_68k TCACCATCAATCGTGGCGGT </td></tr><tr><td> الخميرة المخصصة التمهيدي </td><td> المتكاملة للتكنولوجيا DNA </td><td colspan="2"> SACI-Gal3 (-256) ACCTGGAGCTCCTATTT TAACATGTGGATTTCTTGAAAGAATGAAATCG </td></tr><tr><td> الخميرة المخصصة التمهيدي </td><td> المتكاملة للتكنولوجيا DNA </td><td colspan="2"> Gal3 (1848)-SACI CGGATGGAGCTCGCGT GAAGGTAATTTTTTTTTATGTCTCCG </td></tr><tr><td> Cycler الحرارية </td><td> راد الحيوي </td><td> 170-9703 </td><td> بلدي Cycler </td></tr><tr><td> الاغاروز </td><td> ISC BioExpress </td><td> E-3120-500 </td><td></td></tr><tr><td> هلام الكهربائي </td><td> Hoeffer أجهزة علمية </td><td> نموذج HE33 </td><td></td></tr><tr><td> 1 KB سلم DNA </td><td> نيو انغلاند Biolabs </td><td> N3232S </td><td></td></tr><tr><td> الحيوي راد السلطة حزمة </td><td> راد الحيوي </td><td> 164-5050 </td><td> PowerPac الأساسية </td></tr><tr><td> هلام الوثيقة النظام </td><td> Fotodyne للإعلام </td><td colspan="2"> FOTO / محلل باحث FX محطة العمل </td></tr></tbody></table>

polymerase chain reaction: basic protocol plus troubleshooting and optimization strategies

في مجال العلوم البيولوجية كانت هناك التقدم التكنولوجي الذي تحظى من خلالها الانضباط في العصور الذهبية للاكتشاف. على سبيل المثال، تحولت مجال علم الأحياء المجهرية مع ظهور المجهر انطون فان يوينهويك، والتي سمحت للعلماء تصور بدائيات النوى للمرة الأولى. تطوير تفاعل البلمرة سلسلة (PCR) هي واحدة من تلك الابتكارات التي غيرت مجرى العلوم الجزيئية مع تأثيره يمتد subdisciplines لا تعد ولا تحصى في علم الأحياء. وقد ورد في النظرية من عملية Keppe وزملاء العمل في عام 1971، إلا أنها كانت آخر 14 عاما حتى إجراء PCR كاملة وصفت وتطبيقها تجريبيا من قبل كاري موليس مؤسسة قيطس بينما في عام 1985. تقدم الأتمتة وصقل هذه التقنية مع الأخذ البلمرة DNA مستقرة من البكتيريا الحرارية aquaticus المستحرات، بالتالي DNA بوليميراز طق الاسم. PCR هو باورrful تقنية التضخيم التي يمكن أن تولد مخزون وفير من شريحة محددة من الحمض النووي (اي ان يكون AMPLICON) من كمية صغيرة فقط من المواد ابتداء (أي قالب أو تسلسل DNA الهدف). في حين واضحة وعموما خالية من المتاعب، وهناك مطبات التي تعقد رد الفعل تحقيق نتائج زائفة. عندما فشل PCR يمكن أن يؤدي إلى العديد من المنتجات DNA غير محددة ذات أحجام مختلفة التي تظهر سلم أو تشويه من العصابات على المواد الهلامية الاغاروز. في بعض الأحيان لا توجد منتجات تشكل على الإطلاق. وهناك مشكلة أخرى محتملة يحدث عندما يتم تقديمها عن غير قصد الطفرات في amplicons، مما أدى إلى السكان غير متجانسة من المنتجات PCR. يمكن فشل PCR تصبح محبطة ما لم يتم توظيف الصبر واستكشاف الأخطاء وإصلاحها لفرز دقيق وحل المشكلة (ق). هذا البروتوكول يحدد المبادئ الأساسية للPCR، ويقدم منهجية من شأنها أن تؤدي إلى التضخيم من متواليات الأكثر المستهدفة، ويقدم استراتيجيات لتحسين رد فعل. باتباع هذا دليل PCR، وسانتيجب أن تكون قادرة على udents: <ul style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد ردود الفعل وظروف ركوب الدراجات الحرارية لتجربة PCR التقليدية </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فهم وظيفة المكونات المختلفة رد الفعل وتأثيرها الكلي على تجربة PCR </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تصميم وتحسين تجربة PCR لأي قالب DNA </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فشل التجارب استكشاف PCR </li></ul>

Watch this Scientific Journal Video about Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies at JoVE.com

Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies

وقد برزت PCR وتقنية شائعة في العديد من المختبرات البيولوجيا الجزيئية. المقدمة هنا هو دليل سريع لعدة بروتوكولات PCR التقليدية. لأن كل رد فعل هو تجربة فريدة من نوعها، والظروف المثلى المطلوبة لتوليد منتج تختلف. وفهم المتغيرات في رد فعل يعزز إلى حد كبير كفاءة استكشاف الأخطاء وإصلاحها، وبالتالي زيادة فرصة للحصول على النتيجة المرجوة.

تفاعل البلمرة سلسلة: البروتوكول الأساسي زائد استراتيجيات حل المشكلات والتحسين

In the biological sciences there have been technological advances that catapult the discipline into golden ages of discovery. For example, the field of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Optimization of the Ugi Reaction Using Parallel Synthesis and Automated Liquid Handling

الأمثل للتفاعل UGI طريق تجميع ومعالجة وبالتوازي السائل الآلي

The optimization of a Ugi reaction involving the mixing of furfurylamine, benzaldehyde, boc-glycine and t-butylisocyanide is described.  Triplicate runs ...

Elevated Plus Maze for Mice

زائد المتاهة مرتفعة على الفئران

Although the mouse genome is now completely sequenced, the functions of most of the genes expressed in the brain are not known. The influence of a given ...

Noninvasive In Vivo Small Animal MRI and MRS: Basic Experimental Procedures

Noninvasive In Vivo Small Animal MRI and MRS: Basic Experimental Procedures

موسع في فيفو الحيوانات الصغيرة التصوير بالرنين المغناطيسي وMRS : الإجراءات التجريبية الأساسية

Small animal Magnetic Resonance (MR) research has emerged as an important element of modern biomedical research due to its non-invasive nature and the ...

Multiplexed Fluorometric ImmunoAssay Testing Methodology and Troubleshooting

اختبار المقايسة المناعية المضاعفة فلوروميتريك المنهجية واستكشاف الأخطاء وإصلاحها

To ensure the quality of animal models used in biomedical research we have developed a number of diagnostic testing strategies and methods to determine if ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

الأساسية<em&gt; Caenorhabditis ايليجانس</em&gt; طرق: التزامن والمراقبة

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

A Guide to Modern Quantitative Fluorescent Western Blotting with Troubleshooting Strategies

دليل لمودرن الكمية نيون الغربية التنشيف مع استراتيجيات استكشاف الأخطاء وإصلاحها

The late 1970s saw the first publicly reported use of the western blot, a technique for assessing the presence and relative abundance of specific proteins ...

Subcloning Plus Insertion (SPI) - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

Subcloning Plus Insertion SPI - A Novel Recombineering Method for the Rapid Construction of Gene Targeting Vectors

استنساخ فرعي زائد الإدراج (SPI) - رواية الطريقة Recombineering عن البناء السريع للجين استهداف ناقلات

Gene targeting refers to the precise modification of a genetic locus using homologous recombination. The generation of novel cell lines and transgenic ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

بروتوكول الآلي السريع لالعضلات تحليل الألياف السكان في الجرذ العضلات المقاطع العرضية عن طريق سلسلة الميوسين الثقيلة المناعية

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

Procedure and Key Optimization Strategies for an Automated Capillary Electrophoretic-based Immunoassay Method

إجراءات واستراتيجيات التحسين الرئيسية لأسلوب الآلي المناعة شعرية المستندة إلى الغرواني الكهربي

New technologies that utilize capillary-based immunoassays promise faster and more quantitative protein assessment compared to traditional immunoassays. ...

Optimization of Crystal Growth for Neutron Macromolecular Crystallography

تحسين النمو البلوري للبلورات النيوترونية الجزيئية

The use of neutron macromolecular crystallography (NMX) is expanding rapidly with most structures determined in the last decade thanks to new NMX ...