Name: retrograde loading of nerves, tracts, and spinal roots with fluorescent dyes
Uploaded: 2012-04-19T13:00:00
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<p class="jove_content"&gt; Este trabalho foi financiado pelo programa intramural do Instituto Nacional de Distúrbios Neurológicos e Derrame no National Institutes of Health. Gostaríamos também de agradecer ao Dr. George Mentis por suas contribuições anteriores para o método e os dados da Figura 3.</p

Dextranos fluorescentes têm sido utilizados como ferramentas de anatómicos e para geração de imagens actividade neuronal 1-4. Campos et al, (2009) 4 publicou um protocolo para aplicação de íons e sensíveis à tensão corantes tratos axonais com um foco sobre a medula espinhal como um sistema modelo. Descrevemos aqui um procedimento mais detalhado para a aplicação de corante fluorescente e / ou iões de sensível para as raízes de corte ventral, raízes dorsais ou qualquer tracto...

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	<li>Nance, D. M., Burns, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+dextrans+as+sensitive+anterograde+neuroanatomical+tracers:+applications+and+pitfalls.">Fluorescent dextrans as sensitive anterograde neuroanatomical tracers: applications and pitfalls.</a> Brain Res. Bull. 25, 139-145 (1990).</li><li>Glover, J. C., Petursdottir, G., Jansen, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+dextran-amines+used+as+axonal+tracers+in+the+nervous+system+of+the+chicken+embryo.">Fluorescent dextran-amines used as axonal tracers in the nervous system of the chicken embryo.</a> J. Neurosci. Methods. 18, 243-254 (1986).</li><li>McPherson, D. R., McClellan, A. D., O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+neuronal+activity+in+tissue+labeled+by+retrograde+transport+of+Calcium+Green+Dextran.">Optical imaging of neuronal activity in tissue labeled by retrograde transport of Calcium Green Dextran.</a> Brain Research Protocols. 1, 157-164 (1997).</li><li>Fields, D. R., Shneider, N., Mentis, G. Z., O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+nervous+system+activity.">Imaging nervous system activity.</a> Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 2, Unit 2.3 (2009).</li><li>O'Donovan, M. J., Ho, S., Sholomenko, G., Yee, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+neurons+retrogradely+and+anterogradely+labelled+with+calcium-sensitive+dyes.">Real-time imaging of neurons retrogradely and anterogradely labelled with calcium-sensitive dyes.</a> J. Neurosci. Methods. 46, 91-106 (1993).</li><li>Wenner, P., Tsau, Y., Cohen, L. B., O'Donovan, M. J., Dan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-sensitive+dye+recording+using+retrogradely+transported+dye+in+the+chicken+spinal+cord:+staining+and+signal+characteristics.">Voltage-sensitive dye recording using retrogradely transported dye in the chicken spinal cord: staining and signal characteristics.</a> J. Neurosci. Methods. 70, 111-120 (1996).</li><li>Garudadri, S., Gallarda, B., Pfaff, S., Alaynick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+Cord+Electrophysiology+II:+Extracellular+Suction+Electrode+Fabrication.">Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication.</a> J. Vis. Exp. (48), e2580 (2011).</li><li>Smith, J. C., Feldman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+brainstem-spinal+cord+preparations+for+study+of+motor+systems+for+mammalian+respiration+and+locomotion.">In vitro brainstem-spinal cord preparations for study of motor systems for mammalian respiration and locomotion.</a> J. Neurosci. Methods. 21, 321-333 (1987).</li><li>Meyer, A., Gallarda, B., Pfaff, S., Alaynick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+Cord+Electrophysiology.">Spinal Cord Electrophysiology.</a> J. Vis. Exp. (35), e1660 (2010).</li><li>Shneider, N. A., Mentis, G. Z., Schustak, J., O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+reduced+sensorimotor+connections+form+with+normal+specificity+despite+abnormal+muscle+spindle+development:+the+role+of+spindle-derived+neurotrophin+3.">Functionally reduced sensorimotor connections form with normal specificity despite abnormal muscle spindle development: the role of spindle-derived neurotrophin 3.</a> J. Neurosci. 29, 4719-4735 (2009).</li><li>Mentis, G. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+functional+impairment+of+sensory-motor+connectivity+in+a+mouse+model+of+spinal+muscular+atrophy.">Early functional impairment of sensory-motor connectivity in a mouse model of spinal muscular atrophy.</a> Neuron. 69, 453-467 (2011).</li><li>Blivis, D., Mentis, Z., O'Donovan, J. M. G., Lev-Tov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+sacral+neurons+involved+in+activation+of+the+lumbar+central+pattern+generator+for+locomotion+in+the+neonatal+rodent+spinal+cord.">Studies of sacral neurons involved in activation of the lumbar central pattern generator for locomotion in the neonatal rodent spinal cord.</a> Soc. Neurosci. Abstr. 564.8, (2009).</li><li>O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+spatiotemporal+organization+of+neural+activity+in+the+developing+spinal+cord.">Imaging the spatiotemporal organization of neural activity in the developing spinal cord.</a> Dev. Neurobiol. 68, 788-803 (2008).</li><li>Kasumacic, N., Glover, J. C., Perreault, M. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segmental+patterns+of+vestibular-mediated+synaptic+inputs+to+axial+and+limb+motoneurons+in+the+neonatal+mouse+assessed+by+optical+recording.">Segmental patterns of vestibular-mediated synaptic inputs to axial and limb motoneurons in the neonatal mouse assessed by optical recording.</a> J. Physiol. (Lond). 588, 4905-4925 (2010).</li><li>Szokol, K., Glover, J. C., Perreault, M. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+functional+synaptic+connections+between+medullary+reticulospinal+neurons+and+lumbar+descending+commissural+interneurons+in+the+neonatal+mouse.">Organization of functional synaptic connections between medullary reticulospinal neurons and lumbar descending commissural interneurons in the neonatal mouse.</a> J. Neurosci. 31, 4731-4742 (2011).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt; Descrevemos aqui um protocolo simples e de baixo custo para a introdução de corantes em neurônios, nervos e tratos espinhais. Este método envolve a exposição identificados vias anatómicas a uma solução altamente concentrada de corante para a duração do processo de carregamento. Isso resulta em marcação retrógrada do site de destino com fundo pouco em comparação com microinjeções, aplicação de banho e técnicas de eletroporação. No entanto, o método é limitado aos locais no sistema nervoso, ond...

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td colspan="2"<strong&gt; Nome do material</strong</td&gt;<td<strong&gt; Empresa</strong</td&gt;<td<strong&gt; Número de catálogo</strong</td&gt;<td<strong&gt; Comentários</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td rowspan="2"&gt; Tubulação</td&gt;<td&gt; PE90 (DIxDE: 0,034 &quot;x0.050&quot;; Thikness Wall: 0,008 &quot;)</td&gt;<td&gt; Clay Adams Marca Intermedic</td&gt;<td&gt; 427421</td&gt;<td&gt; Por Tipo I e Tipo II pipetas</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; NSF-51 (DIxDE: 1/16x1/8; parede Thikness: 1/32)</td&gt;<td&gt; PharMed BPT, Cole-Parmer</td&gt;<td&gt; AY242002</td&gt;<td&gt; Para Tubos flexíveis</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Seringa</td&gt;<td&gt; Seringa de insulina 1ml U-100</td&gt;<td&gt; Becton Dickenson</td&gt;<td&gt; 329650</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Agulha</td&gt;<td&gt; 19G x1-1/2 &quot;Needle Hub metal</td&gt;<td&gt; Monoject</td&gt;<td&gt; 200136</td&gt;<td&gt; Conexão Tipo II pipeta para seringa</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt; Álcool Lâmpada</td&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Torneira</td&gt;<td&gt; Torneira de três vias com adaptador Luer Deslizamento Masculino</td&gt;<td&gt; Baxter Healthcare Corp</td&gt;<td&gt; 2C6241</td&gt;<td&gt; Use com seringa</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td rowspan="3"&gt; Titular</td&gt;<td&gt; Titular H-1 eletrodo</td&gt;<td&gt; Narishige</td&gt;<td&gt; H-1/12</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Estande Magnet</td&gt;<td&gt; Narishige</td&gt;<td&gt; GJ-8</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Micromanipulador</td&gt;<td&gt; Narishige</td&gt;<td&gt; M-3333</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Pinças</td&gt;<td&gt; S &amp; T DUMONT suíço 00632-11</td&gt;<td&gt; DUMONT</td&gt;<td&gt; JF-5 TC</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table&gt;<p class="jove_content"&gt; * Esses são materiais sugeridos. Pode ser substituído com quaisquer produtos compatíveis</p

retrograde loading of nerves, tracts, and spinal roots with fluorescent dyes

Marcação retrógrada de neurónios é um método padrão 1,2 anatómica que também tem sido utilizado para carregar o cálcio e sensíveis à voltagem corantes em neurónios 3-6. Geralmente, os corantes são aplicados na forma de cristais sólidos ou por injecção sob pressão local usando pipetas de vidro. No entanto, isto pode resultar na diluição da intensidade de rotulagem de corante e reduzida, particularmente quando são necessárias várias horas para a difusão do corante. Aqui demonstramos uma técnica simples e de baixo custo para a introdução de corantes fluorescentes e de iões de sensível em neurónios utilizando uma pipeta de sucção de polietileno cheio com a solução de corante. Este método oferece uma maneira fiável para a manutenção de uma elevada concentração do corante em contacto com axónios em todo o procedimento de carga.

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Retrograde Loading of Nerves, Tracts, and Spinal Roots with Fluorescent Dyes

Nós descrevemos uma técnica simples e de baixo custo para a introdução de elevada concentração de corantes fluorescentes e de cálcio sensíveis em neurónios ou qualquer tracto neuronal, utilizando uma pipeta de sucção de polietileno.

Carregando retrógrado de Nervos, folhetos, e raízes nervosas com corantes fluorescentes

Retrograde labeling of neurons is a standard anatomical method1,2 that has also been used to load calcium and voltage-sensitive dyes into neurons3-6. ...

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