Name: retrograde loading of nerves, tracts, and spinal roots with fluorescent dyes
Uploaded: 2012-04-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retrograde Loading of Nerves, Tracts, and Spinal Roots with Fluorescent Dyes at JoVE.com

<p class="jove_content"&gt; Detta arbete stöddes av intramural program National Institutes of Neurological Disorders and Stroke vid National Institutes of Health. Vi vill också tacka Dr George Mentis för sina tidigare bidrag till den metod och de uppgifter som i figur 3.</p

Fluorescerande dextraner har använts som anatomiska verktyg och för avbildning nervaktivitet 1-4. Fields et al, (2009) 4 publicerade ett protokoll för tillämpning av jon-och spänningskänsliga färgämnen för att axonala trakter med fokus på ryggmärgen som modellsystem. Här beskriver vi ett mer detaljerat förfarande för tillämpning av fluorescerande och / eller jon-känslig färg på de skurna ventrala rötterna, bröst rötter eller någon neuronala område av ryggmärgen för...

<ol>
	<li>Nance, D. M., Burns, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+dextrans+as+sensitive+anterograde+neuroanatomical+tracers:+applications+and+pitfalls.">Fluorescent dextrans as sensitive anterograde neuroanatomical tracers: applications and pitfalls.</a> Brain Res. Bull. 25, 139-145 (1990).</li><li>Glover, J. C., Petursdottir, G., Jansen, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+dextran-amines+used+as+axonal+tracers+in+the+nervous+system+of+the+chicken+embryo.">Fluorescent dextran-amines used as axonal tracers in the nervous system of the chicken embryo.</a> J. Neurosci. Methods. 18, 243-254 (1986).</li><li>McPherson, D. R., McClellan, A. D., O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+neuronal+activity+in+tissue+labeled+by+retrograde+transport+of+Calcium+Green+Dextran.">Optical imaging of neuronal activity in tissue labeled by retrograde transport of Calcium Green Dextran.</a> Brain Research Protocols. 1, 157-164 (1997).</li><li>Fields, D. R., Shneider, N., Mentis, G. Z., O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+nervous+system+activity.">Imaging nervous system activity.</a> Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 2, Unit 2.3 (2009).</li><li>O'Donovan, M. J., Ho, S., Sholomenko, G., Yee, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+imaging+of+neurons+retrogradely+and+anterogradely+labelled+with+calcium-sensitive+dyes.">Real-time imaging of neurons retrogradely and anterogradely labelled with calcium-sensitive dyes.</a> J. Neurosci. Methods. 46, 91-106 (1993).</li><li>Wenner, P., Tsau, Y., Cohen, L. B., O'Donovan, M. J., Dan, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-sensitive+dye+recording+using+retrogradely+transported+dye+in+the+chicken+spinal+cord:+staining+and+signal+characteristics.">Voltage-sensitive dye recording using retrogradely transported dye in the chicken spinal cord: staining and signal characteristics.</a> J. Neurosci. Methods. 70, 111-120 (1996).</li><li>Garudadri, S., Gallarda, B., Pfaff, S., Alaynick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+Cord+Electrophysiology+II:+Extracellular+Suction+Electrode+Fabrication.">Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication.</a> J. Vis. Exp. (48), e2580 (2011).</li><li>Smith, J. C., Feldman, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+brainstem-spinal+cord+preparations+for+study+of+motor+systems+for+mammalian+respiration+and+locomotion.">In vitro brainstem-spinal cord preparations for study of motor systems for mammalian respiration and locomotion.</a> J. Neurosci. Methods. 21, 321-333 (1987).</li><li>Meyer, A., Gallarda, B., Pfaff, S., Alaynick, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spinal+Cord+Electrophysiology.">Spinal Cord Electrophysiology.</a> J. Vis. Exp. (35), e1660 (2010).</li><li>Shneider, N. A., Mentis, G. Z., Schustak, J., O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+reduced+sensorimotor+connections+form+with+normal+specificity+despite+abnormal+muscle+spindle+development:+the+role+of+spindle-derived+neurotrophin+3.">Functionally reduced sensorimotor connections form with normal specificity despite abnormal muscle spindle development: the role of spindle-derived neurotrophin 3.</a> J. Neurosci. 29, 4719-4735 (2009).</li><li>Mentis, G. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+functional+impairment+of+sensory-motor+connectivity+in+a+mouse+model+of+spinal+muscular+atrophy.">Early functional impairment of sensory-motor connectivity in a mouse model of spinal muscular atrophy.</a> Neuron. 69, 453-467 (2011).</li><li>Blivis, D., Mentis, Z., O'Donovan, J. M. G., Lev-Tov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+sacral+neurons+involved+in+activation+of+the+lumbar+central+pattern+generator+for+locomotion+in+the+neonatal+rodent+spinal+cord.">Studies of sacral neurons involved in activation of the lumbar central pattern generator for locomotion in the neonatal rodent spinal cord.</a> Soc. Neurosci. Abstr. 564.8, (2009).</li><li>O'Donovan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+the+spatiotemporal+organization+of+neural+activity+in+the+developing+spinal+cord.">Imaging the spatiotemporal organization of neural activity in the developing spinal cord.</a> Dev. Neurobiol. 68, 788-803 (2008).</li><li>Kasumacic, N., Glover, J. C., Perreault, M. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Segmental+patterns+of+vestibular-mediated+synaptic+inputs+to+axial+and+limb+motoneurons+in+the+neonatal+mouse+assessed+by+optical+recording.">Segmental patterns of vestibular-mediated synaptic inputs to axial and limb motoneurons in the neonatal mouse assessed by optical recording.</a> J. Physiol. (Lond). 588, 4905-4925 (2010).</li><li>Szokol, K., Glover, J. C., Perreault, M. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+functional+synaptic+connections+between+medullary+reticulospinal+neurons+and+lumbar+descending+commissural+interneurons+in+the+neonatal+mouse.">Organization of functional synaptic connections between medullary reticulospinal neurons and lumbar descending commissural interneurons in the neonatal mouse.</a> J. Neurosci. 31, 4731-4742 (2011).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt; Vi beskriver här en enkel och kostnadseffektiv protokoll för att införa färgämnen i nervceller, nerver och spinala skrifter. Denna metod är att exponera identifierade anatomiska vägar till en mycket koncentrerad färglösning under hela laddningen processen. Detta resulterar i retrograd märkning av målområdet med lite bakgrundsinformation jämfört med mikroinjektion och bad ansökan och tekniker elektroporation. Emellertid är metoden begränsad till ställen i nervsystemet, där ett område av axoner kan ...

<table border="1"&gt;<tbody&gt;<tr&gt;<td colspan="2"<strong&gt; Materialnamn</strong</td&gt;<td<strong&gt; Företag</strong</td&gt;<td<strong&gt; Katalognummer</strong</td&gt;<td<strong&gt; Kommentarer</strong</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td rowspan="2"&gt; Tubing</td&gt;<td&gt; PE90 (IDxOD: 0,034 &quot;x0.050&quot;; väggen thikness: 0,008 &quot;)</td&gt;<td&gt; Clay Adams Brand Intermedic</td&gt;<td&gt; 427.421</td&gt;<td&gt; För typ I och typ II pipetter</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; NSF-51 (IDxOD: 1/16x1/8; väggen thikness: 1/32)</td&gt;<td&gt; PharMed BPT, Cole-Parmer</td&gt;<td&gt; AY242002</td&gt;<td&gt; För Böjliga slangar och rör</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Spruta</td&gt;<td&gt; 1 ml insulinspruta U-100</td&gt;<td&gt; Becton Dickenson</td&gt;<td&gt; 329.650</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Nål</td&gt;<td&gt; 19G x1-1/2 &quot;Metal Hub Needle</td&gt;<td&gt; Monoject</td&gt;<td&gt; 200.136</td&gt;<td&gt; Ansluta Typ II pipett till sprutan</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt; Alkohol Lampa</td&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt;</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Avstängningskran</td&gt;<td&gt; Trevägskran med Luer Slip Adapter</td&gt;<td&gt; Baxter Healthcare Corp</td&gt;<td&gt; 2C6241</td&gt;<td&gt; Använd med spruta</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td rowspan="3"&gt; Hållare</td&gt;<td&gt; H-1 elektrodhållaren</td&gt;<td&gt; Narishige</td&gt;<td&gt; H-1/12</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Magnet stativ</td&gt;<td&gt; Narishige</td&gt;<td&gt; GJ-8</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Mikromanipulator</td&gt;<td&gt; Narishige</td&gt;<td&gt; M-3333</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;<tr&gt;<td&gt; Pincetter</td&gt;<td&gt; S &amp; T DUMONT Schweiziska 00.632-11</td&gt;<td&gt; DUMONT</td&gt;<td&gt; JF-5 TC</td&gt;<td&gt;</td&gt;</tr&gt;</tbody&gt;</table&gt;<p class="jove_content"&gt; * Det är föreslagna material. Kan ersättas med alla kompatibla produkter</p

retrograde loading of nerves, tracts, and spinal roots with fluorescent dyes

Retrograd märkning av neuroner är en vanlig metod anatomisk 1,2 som också har använts för att lasta kalcium och spänningskänsliga färgämnen till neuroner 3-6. I allmänhet är de färgämnen som används fasta kristaller eller genom lokal injektion tryck med användning av glaspipetter. Emellertid kan detta resultera i utspädning av färgämnet och reducerad märkning intensitet, särskilt när flera timmar krävs för att färgdiffusion. Här visar vi en enkel och billig teknik för att införa fluorescerande och jon-känsliga färgämnen till neuroner som använder en pipett polyeten sugning fylld med färglösningen. Denna metod erbjuder ett pålitligt sätt för att upprätthålla en hög koncentration av färgämnet är i kontakt med axoner hela laddningsproceduren.

Watch this Scientific Journal Video about Retrograde Loading of Nerves, Tracts, and Spinal Roots with Fluorescent Dyes at JoVE.com

Retrograde Loading of Nerves, Tracts, and Spinal Roots with Fluorescent Dyes

Vi beskriver en enkel och billig teknik för att införa höga koncentrationen av fluorescerande och kalcium-känsligt färgämnen till neuroner eller någon neuronala tract användning av en pipett polyeten sugning.

Retrograd Lastning av nerver, skrifter och spinalrötterna med fluorescerande färgämnen

Retrograde labeling of neurons is a standard anatomical method1,2 that has also been used to load calcium and voltage-sensitive dyes into neurons3-6. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Studying Synaptic Vesicle Pools using Photoconversion of Styryl Dyes

Studera Synaptic Blås Pools hjälp Photoconversion av Styryl Färgämnen

The fusion of synaptic vesicles with the plasma membrane (exocytosis) is a required step in neurotransmitter release and neuronal communication. The ...

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations

Visualisering av Larvernas segment nerver i 3 RD Instar Drosophila Larvernas Förberedelser

Drosophila melanogaster is emerging as a powerful model system for studying the development and function of the nervous system, particularly because of ...

Optical Imaging of Neurons in the Crab Stomatogastric Ganglion with Voltage-sensitive Dyes

Optisk avbildning av nervceller i Crab Stomatogastric Ganglion med spänningskänsliga Färgämnen

Voltage-sensitive dye imaging of neurons is a key methodology for the understanding of how neuronal networks are organised and how the simultaneous ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Bakåtsträvande Fluorescerande märkning Tillåter Riktade Extracellular Single-enhet Inspelning från identifierade nervceller<em&gt; In vivo</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Promotion of Survival and Differentiation of Neural Stem Cells with Fibrin and Growth Factor Cocktails after Severe Spinal Cord Injury

Främjande av överlevnad och differentiering av neurala stamceller med fibrin och tillväxtfaktor Cocktails efter svåra Ryggmärgsskada

Neural stem cells (NSCs) can self-renew and differentiate into neurons and glia. Transplanted NSCs can replace lost neurons and glia after spinal cord ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

Retrograd Märkning av retinal ganglion celler i vuxna zebrafisk med fluorescerande färger

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

In Vivo Electrophysiological Measurements on Mouse Sciatic Nerves

In Vivo Elektro Mätningar på Mouse ischiasnerver

Electrophysiological studies allow a rational classification of various neuromuscular diseases and are of help, together with neuropathological ...

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

A Procedure for Implanting a Spinal Chamber for Longitudinal In Vivo Imaging of the Mouse Spinal Cord

Ett förfarande för att implantera en Spinal avdelningen för Längs<em&gt; In Vivo</em&gt; Avbildning av Mouse Spinal Cord

Studies in the mammalian neocortex have enabled unprecedented resolution of cortical structure, activity, and response to neurodegenerative insults by ...

Imaging Membrane Potential with Two Types of Genetically Encoded Fluorescent Voltage Sensors

Imaging membranpotential med två typer av genetiskt kodade fluorescerande Spänningssensorer

Genetically encoded voltage indicators (GEVIs) have improved to the point where they are beginning to be useful for in vivo recordings. While the ultimate ...

Retrograde Neuroanatomical Tracing of Phrenic Motor Neurons in Mice

Retrograd neuroanatomiska spårning av Phrenic motoriska nervceller hos möss

Phrenic motor neurons are cervical motor neurons originating from C3 to C6 levels in most mammalian species. Axonal projections converge into phrenic ...