Name: analysis of pulmonary dendritic cell maturation and migration during allergic airway inflammation
Uploaded: 2012-07-23T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door CIHR-en CF-Canada subsidies aan Dr Jim Hu en door een PhD studententijd toegekend aan Rahul Kushwah door CF Canada.

1. Sensibilisatie van muizen met ovalbumine <ol><li> Een oplossing van OVA (graad V, Sigma, MO) in steriele PBS in een concentratie van 1 mg / ml (oplossing kan worden bewaard bij -80 ° C). </li><li> Om OVA-aluin-mengsel te bereiden te aluin in een buis en voeg OVA oplossing druppelsgewijze terwijl vortexen de buis in een verhouding van 1:1. Roeren gedurende 30 minuten gebruikt direct na het mengen. </li><li> Met behulp van een 1 ml spuit, injecteer 0,2 ml van het mengsel in de muis peritoneale holte en herhaal de in...

<ol>
	<li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+dendritic+cells+in+the+induction+of+regulatory+T+cells.">Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells.</a> Cell Biosci. 20, (2011).</li><li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complexity+of+dendritic+cell+subsets+and+their+function+in+the+host+immune+system.">Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system.</a> Immunology. 133, 409-419 (2011).</li><li>Lambrecht, B. N., Hammad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+our+breath+away:+dendritic+cells+in+the+pathogenesis+of+asthma.">Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma.</a> Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).</li><li>Hammad, H., Lambrecht, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+and+epithelial+cells:+linking+innate+and+adaptive+immunity+in+asthma.">Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).</li><li>Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerizing+allergic+responses+in+the+lung.">Tolerizing allergic responses in the lung.</a> Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).</li><li>Herz, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relevance+of+murine+animal+models+to+study+the+development+of+allergic+bronchial+asthma.">The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma.</a> Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).</li><li>Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+animal+models+to+study+the+central+role+of+T+cells+in+immediate-type+hypersensitivity+responses.">Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).</li><li>Nakae, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+can+contribute+to+multiple+features+of+ovalbumin-induced+allergic+inflammation+of+the+airways+in+mice.">TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).</li><li>Guth, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+environment+determines+unique+phenotype+of+alveolar+macrophages.">Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).</li><li>Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+pulmonary+T+cell+response+to+helper-dependent+adenoviral+vectors+following+intranasal+delivery.">Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery.</a> J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).</li><li>Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+dendritic+cells+induce+tolerance+in+mice+through+suppression+of+dendritic+cell+maturation+and+induction+of+antigen-specific+regulatory+T+cells.">Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells.</a> J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).</li></ol>

De hier gepresenteerde methode biedt een flowcytometrie gebaseerde benadering voor het analyseren van pulmonale DC&#39;s, gebaseerd op levering van de OVA-FITC voor de luchtwegen uitdaging. Hierdoor selectieve controle van de pulmonale DCs, die nemen OVA-FITC en dus de DC populaties, die worden bewaakt effectief degenen die in de luchtweg immuunrespons deel tijdens OVA-geïnduceerde allergische luchtweg. In controlemuizen, in afwezigheid van allergische luchtweginflammatie, het aantal trekkende DCs (OVA-FITC + DC) die i...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Ovalbumine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5503 </td></tr><tr><td> Aluin </td><td> Thermo Scientific </td><td> 77161 </td></tr><tr><td> OVA-FITC </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9771 </td></tr><tr><td> Collagenase D </td><td> Roche </td><td> 11088858001 </td></tr><tr><td> Antilichamen </td><td> e-bio- </td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of pulmonary dendritic cell maturation and migration during allergic airway inflammation

Dendritische cellen (DC&#39;s) zijn de hoofdrolspelers die betrokken zijn bij aanvang van de adaptieve immuunrespons door het activeren van antigeen-specifieke T-cellen. DC&#39;s zijn aanwezig in de perifere weefsels in steady-state, maar in reactie op antigeen stimulatie, DC&#39;s nemen het antigeen en snel migreren naar de drainerende lymfeklieren, waar ze T-cel respons te leiden tegen het antigeen 1,2. Daarnaast DC&#39;s spelen ook een belangrijke rol in het initiëren van auto-immune en allergische immuunrespons 3. DC&#39;s spelen een essentiële rol in zowel de aanvang van de immuunrespons en inductie van tolerantie in de setting van long-omgeving 4. Lung omgeving grotendeels tolerogeen wegens de blootstelling aan enorme hoeveelheid milieu antigenen 5. In sommige individuen is een breuk in tolerantie, die leidt tot de inductie van allergie en astma. In deze studie beschrijven we een strategie die kan worden luchtwegen DC rijping en mig controlerenverhouding in reactie op het antigeen voor sensibilisering. De meting van de luchtwegen DC rijping en migratie maakt voor beoordeling van de kinetica van immuunrespons in de luchtwegen allergische ontsteking en helpt het begrijpen van de grootte van de volgende immuunrespons met de mechanismen. De strategie is gebaseerd op het gebruik van ovalbumine als sensibilisator. Ovalbumine geïnduceerde allergische astma is een veel gebruikt model om de luchtwegen eosinofilie, longontsteking en verhoogde IgE-gehaltes gevonden tijdens astma 6,7 reproduceren. Na sensibilisatie, worden muizen uitgedaagd door intranasale levering van FITC gelabeld ovalbumine, die het mogelijk maakt voor specifieke etikettering van luchtweg DCs die opname ovalbumine. Vervolgens met behulp van verschillende DC specifieke markers, kunnen we beoordelen de rijping van deze DC&#39;s en kunnen hun migratie ook te beoordelen naar de drainerende lymfeklieren door het gebruik van flowcytometrie.

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation at JoVE.com

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

We beschrijven een strategie om de rijping en migratie van pulmonale dendritische cellen te volgen in reactie op ovalbumine in de setting van ovalbumine geïnduceerde allergische luchtwegontsteking. Deze strategie kan worden aangepast aan de migratie van pulmonale dendritische cellen te beoordelen in de instellingen van de infectie.

Analyse van de pulmonale dendritische cel maturatie en migratie tijdens de allergische luchtwegontsteking

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T-lymfocyt Isolatie, Cultuur en Analyse van de migratie In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

Geoptimaliseerd protocol voor Efficiënte Transfectie van dendritische cellen zonder Cell Rijping

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Flowcytometrie-analyse van de immuuncellen Binnen Murine aorta

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritische cel-migratie met behulp van<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Magnetic Resonance Imaging

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

In vivo beeldvorming methode om acute en chronische ontsteking Onderscheid

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

Een geoptimaliseerde werkwijze voor het isoleren en Expanding Invariant Natural Killer T-cellen van Mouse Spleen

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Isolatie, karakterisering en functionele onderzoek van het tandvlees Immune Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intratracheale toediening van<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; In muismodellen om te studeren luchtwegontsteking

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

A-CFSE gebaseerde test om de migratie van de huid van muizen dendritische cellen Onderzoek naar drainerende lymfeklieren tijdens infectie met<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacille Calmette-Guérin

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Precisie-cut Mouse Lung Slices Live Pulmonary visualiseren van dendritische cellen

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...