Name: analysis of pulmonary dendritic cell maturation and migration during allergic airway inflammation
Uploaded: 2012-07-23T12:00:00
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Ce travail a été financé par des subventions des IRSC et des FC au Canada au Dr Jim Hu et par une bourse de doctorat décerné à Rahul Kushwah par CF Canada.

1. Sensibilisation des souris avec de l&#39;ovalbumine <ol><li> Préparer une solution d&#39;OVA (grade V; Sigma, MO) dans du PBS stérile à une concentration de 1 mg / ml (solution peut être conservée à -80 ° C). </li><li> Afin de préparer OVA-Alum mélange, prendre alun dans un tube et ajouter la solution d&#39;OVA dans un goutte à goutte tout en vortex le tube à un ratio de 1:1. Remuer le mélange pendant 30 minutes et utiliser tout de suite après le mélange. </li><li> En utilisant une seringue de 1 ml, i...

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	<li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+dendritic+cells+in+the+induction+of+regulatory+T+cells.">Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells.</a> Cell Biosci. 20, (2011).</li><li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complexity+of+dendritic+cell+subsets+and+their+function+in+the+host+immune+system.">Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system.</a> Immunology. 133, 409-419 (2011).</li><li>Lambrecht, B. N., Hammad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+our+breath+away:+dendritic+cells+in+the+pathogenesis+of+asthma.">Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma.</a> Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).</li><li>Hammad, H., Lambrecht, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+and+epithelial+cells:+linking+innate+and+adaptive+immunity+in+asthma.">Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).</li><li>Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerizing+allergic+responses+in+the+lung.">Tolerizing allergic responses in the lung.</a> Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).</li><li>Herz, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relevance+of+murine+animal+models+to+study+the+development+of+allergic+bronchial+asthma.">The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma.</a> Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).</li><li>Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+animal+models+to+study+the+central+role+of+T+cells+in+immediate-type+hypersensitivity+responses.">Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).</li><li>Nakae, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+can+contribute+to+multiple+features+of+ovalbumin-induced+allergic+inflammation+of+the+airways+in+mice.">TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).</li><li>Guth, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+environment+determines+unique+phenotype+of+alveolar+macrophages.">Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).</li><li>Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+pulmonary+T+cell+response+to+helper-dependent+adenoviral+vectors+following+intranasal+delivery.">Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery.</a> J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).</li><li>Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+dendritic+cells+induce+tolerance+in+mice+through+suppression+of+dendritic+cell+maturation+and+induction+of+antigen-specific+regulatory+T+cells.">Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells.</a> J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).</li></ol>

La méthode présentée ici propose une approche basée sur la cytométrie de flux pour analyser les PED pulmonaires, basées sur la livraison d&#39;OVA-FITC pour le défi des voies respiratoires. Ceci permet la surveillance sélective des PED pulmonaires, qui prennent OVA-FITC et par conséquent, les populations de DC, qui sont contrôlés sont effectivement ceux qui participent à la réponse immunitaire des voies respiratoires au cours de l&#39;inflammation induite par OVA allergique des voies respiratoires. Chez les...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Ovalbumin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5503 </td></tr><tr><td> Alun </td><td> Thermo Scientific </td><td> 77161 </td></tr><tr><td> OVA-FITC </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9771 </td></tr><tr><td> Collagénase D </td><td> Roche </td><td> 11088858001 </td></tr><tr><td> Anticorps </td><td> e-Bioscience </td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of pulmonary dendritic cell maturation and migration during allergic airway inflammation

Les cellules dendritiques (CD) sont les principaux acteurs impliqués dans l&#39;initiation de la réponse immunitaire adaptative en activant les cellules T spécifiques de l&#39;antigène. PED sont présents dans les tissus périphériques à l&#39;état d&#39;équilibre, mais en réponse à une stimulation antigénique, les CD prennent de l&#39;antigène et rapidement migrer vers les ganglions lymphatiques drainant où ils initient la réponse des cellules T contre l&#39;antigène 1,2. En outre, les PED jouent également un rôle clé dans le déclenchement auto-immune ainsi que la réponse immunitaire allergique 3. PED jouer un rôle essentiel dans l&#39;initiation de la réponse immunitaire et l&#39;induction de la tolérance dans le cadre de 4 environnement du poumon. L&#39;environnement du poumon est largement tolérogène, en raison de l&#39;exposition à la vaste gamme d&#39;antigènes de l&#39;environnement 5. Toutefois, chez certaines personnes il ya une rupture de la tolérance, ce qui conduit à l&#39;induction de l&#39;allergie et l&#39;asthme. Dans cette étude, nous décrivons une stratégie, qui peut être utilisé pour surveiller des voies respiratoires DC maturation et migration en réponse à l&#39;antigène utilisé pour la sensibilisation. La mesure de la maturation des voies respiratoires DC et de la migration permet d&#39;évaluer la cinétique de la réponse immunitaire au cours de l&#39;inflammation allergique des voies respiratoires et aide aussi à comprendre l&#39;ampleur de la réponse immunitaire subséquente ainsi que les mécanismes sous-jacents. Notre stratégie est basée sur l&#39;utilisation de l&#39;ovalbumine comme un agent sensibilisant. Ovalbumin induite par l&#39;asthme allergique est un modèle largement utilisé pour reproduire l&#39;éosinophilie des voies aériennes, l&#39;inflammation pulmonaire et une élévation des taux d&#39;IgE trouvés lors de l&#39;asthme 6,7. Après la sensibilisation, les souris sont contestés par l&#39;administration intranasale d&#39;ovalbumine marquée FITC, ce qui permet d&#39;étiquetage spécifique des PED voies respiratoires ovalbumine absorption qui. Ensuite, en utilisant plusieurs marqueurs spécifiques DC, nous pouvons évaluer la maturation de ces pays en développement et peuvent également évaluer leur migration vers les ganglions lymphatiques drainant en employant la cytométrie en flux.

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Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Nous décrivons une stratégie pour surveiller la maturation et la migration des cellules dendritiques pulmonaires en réponse à l&#39;ovalbumine dans le cadre de l&#39;inflammation induite par l&#39;ovalbumine allergique des voies respiratoires. Cette stratégie peut être modifié afin d&#39;évaluer la migration des cellules dendritiques pulmonaires dans les paramètres de l&#39;infection.

L&#39;analyse de la maturation des cellules dendritiques pulmonaire et de la migration au cours de l&#39;inflammation allergique des voies respiratoires

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T isolement des lymphocytes, de la Culture et de l&#39;analyse des migrations In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Recherche

Immunologie et infection

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

Protocole optimisé pour une transfection efficace des cellules dendritiques, sans maturation cellulaire

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Débit analyse par cytométrie de cellules immunitaires dans aortes murin

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

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La migration des cellules dendritiques de surveillance utilisant l&#39;imagerie par résonance 19F / 1H magnétique

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

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In vivo méthode d&#39;imagerie à distinguer inflammation aiguë et chronique

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

Un procédé optimisé pour isoler et expansion Invariant Cellules T Tueuses Naturelles de Spleen souris

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Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

L&#39;isolement, la caractérisation et de l&#39;examen fonctionnel du Réseau de cellules gingivale immunitaire

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

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Administration intra-trachéale de<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; Dans les modèles de souris pour étudier Airway Inflammation

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

Generation of Immature, Mature and Tolerogenic Dendritic Cells with Differing Metabolic Phenotypes

Génération de Immature, d&#39;âge mûr et tolérogène cellules dendritiques avec Metabolic Différentes phénotypes

Immune response results from a complex interplay between the antigen non-specific innate immune system and the antigen specific adaptive immune system. ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

Un test basé CFSE pour étudier la migration de la peau murine cellules dendritiques dans les ganglions lymphatiques de drainage lors de l&#39;infection avec<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacille Calmette-Guérin

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...