Name: analysis of pulmonary dendritic cell maturation and migration during allergic airway inflammation
Uploaded: 2012-07-23T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av CIHR og CF Canada tilskudd til Dr. Jim Hu og med en PhD studentship tildelt Rahul Kushwah av CF Canada.

1. Sensibilisering av Mus med ovalbumin <ol><li> Forbered en løsning av OVA (klasse V, Sigma, MO) i steril PBS i en konsentrasjon på 1 mg / ml (Løsningen kan oppbevares ved -80 ° C). </li><li> For å forberede OVA-Alum blandingen, ta Alum i et rør og legge OVA løsning i en dropwise mote mens virvling røret i forholdet 1:1. Rør blandingen i 30 minutter og bruk med en gang etter blanding. </li><li> Bruk en 1 ml sprøyte, injisere 0,2 ml av blandingen i musen bukhulen og gjenta injeksjon igjen etter 2 uker. </li>...

<ol>
	<li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+dendritic+cells+in+the+induction+of+regulatory+T+cells.">Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells.</a> Cell Biosci. 20, (2011).</li><li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complexity+of+dendritic+cell+subsets+and+their+function+in+the+host+immune+system.">Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system.</a> Immunology. 133, 409-419 (2011).</li><li>Lambrecht, B. N., Hammad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+our+breath+away:+dendritic+cells+in+the+pathogenesis+of+asthma.">Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma.</a> Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).</li><li>Hammad, H., Lambrecht, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+and+epithelial+cells:+linking+innate+and+adaptive+immunity+in+asthma.">Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).</li><li>Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerizing+allergic+responses+in+the+lung.">Tolerizing allergic responses in the lung.</a> Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).</li><li>Herz, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relevance+of+murine+animal+models+to+study+the+development+of+allergic+bronchial+asthma.">The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma.</a> Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).</li><li>Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+animal+models+to+study+the+central+role+of+T+cells+in+immediate-type+hypersensitivity+responses.">Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).</li><li>Nakae, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+can+contribute+to+multiple+features+of+ovalbumin-induced+allergic+inflammation+of+the+airways+in+mice.">TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).</li><li>Guth, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+environment+determines+unique+phenotype+of+alveolar+macrophages.">Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).</li><li>Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+pulmonary+T+cell+response+to+helper-dependent+adenoviral+vectors+following+intranasal+delivery.">Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery.</a> J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).</li><li>Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+dendritic+cells+induce+tolerance+in+mice+through+suppression+of+dendritic+cell+maturation+and+induction+of+antigen-specific+regulatory+T+cells.">Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells.</a> J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).</li></ol>

Metoden som presenteres her tilbyr en flowcytometri tilnærming for å analysere lunge DCS, basert på leveranse av OVA-FITC for luftveier utfordring. Dette åpner for selektiv overvåkning av lunge DCS, som tar opp OVA-FITC og derfor DC populasjoner, som overvåkes er effektivt de som deltar i luftveiene immunrespons i løpet av OVA-indusert allergisk Airway betennelse. I kontroll mus, i fravær av allergisk luftveiene betennelse, antall trekkende DCS (OVA-FITC + DCS) identifisert i MLN er tegn på basaldoser av DC mig...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagensen </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td></tr><tr><td> Ovalbumin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5503 </td></tr><tr><td> Alum </td><td> Thermo Scientific </td><td> 77161 </td></tr><tr><td> OVA-FITC </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9771 </td></tr><tr><td> Collagenase D </td><td> Roche </td><td> 11088858001 </td></tr><tr><td> Antistoffer </td><td> e-Biovitenskap </td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of pulmonary dendritic cell maturation and migration during allergic airway inflammation

Dendrittiske celler (DCS) er de sentrale aktørene som er involvert i initiering av adaptive immunresponsen ved å aktivere antigen-spesifikke T celler. Utviklingsland er til stede i perifere vev i steady state, men som svar på antigen stimulering, DCS ta opp antigenet og raskt vandrer til drenering lymfeknuter hvor de setter i gang T-celle respons mot antigen 1,2. I tillegg, DCS også spille en nøkkelrolle i å initiere autoimmune samt allergisk immunrespons tre. Utviklingsland spiller en vesentlig rolle både initiering av immunrespons og induksjon av toleranse i innstillingen av lunge miljø 4. Lung miljø er i stor grad tolerogenic, på grunn av eksponering for stort utvalg av miljømessige antigener 5. Men i enkelte individer er det en pause i toleranse, noe som fører til induksjon av allergi og astma. I denne studien, beskriver vi en strategi som kan brukes til å overvåke luftveiene DC modning og MIGrasjon i respons på antigen brukes for sensibilisering. Måling av luftveier DC modning og migrasjon åpner for vurdering av kinetikken av immunrespons i luftveiene allergisk betennelse og også bistår i å forstå omfanget av den påfølgende immunresponsen sammen med de underliggende mekanismene. Vår strategi er basert på bruk av ovalbumin som allergifremkallende middel. Ovalbumin-indusert allergisk astma er en mye brukt modell for å reprodusere luftveiene eosinofili, lunge betennelse og forhøyede IgE funnet under astma 6,7. Etter allergi, er mus utfordret av intranasal levering av FITC merket ovalbumin, som gir mulighet for spesifikk merking av luftveiene utviklingsland som opptak ovalbumin. Deretter bruker flere DC spesifikke markører, kan vi vurdere modningen av disse DCS og kan også vurdere sin vandring til de drenerende lymfeknutene ved å ansette flowcytometri.

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation at JoVE.com

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Vi beskriver en strategi for å overvåke modning og migrasjon av lunge dendrittiske celler som reaksjon på ovalbumin i innstillingen av ovalbumin indusert allergisk Airway betennelse. Denne strategien kan endres for å vurdere migrasjon av pulmonale dendrittiske celler i innstillingene for infeksjon.

Analyse av Pulmonal dendrittiske celle modning og migrasjon under Allergisk Airway betennelse

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

In vivo avbildning metode for å skille akutte og kroniske betennelser

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

En optimalisert metode for å isolere og utvide Invariant Natural Killer T-celler fra mus Spleen

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Isolasjon, karakterisering og Funksjonell Undersøkelse av Gingival immun Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administrasjon av<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; I musemodeller for å studere Airway betennelse

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

En CFSE basert analyse for å studere migrasjon av murine Skin dendrittiske celler i Tømming lymfeknuter Under infeksjon med<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacille Calmette-Guérin

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Precision-kutt Mouse Lung Slices å visualisere Live-lunge dendrittiske celler

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...