Name: analysis of pulmonary dendritic cell maturation and migration during allergic airway inflammation
Uploaded: 2012-07-23T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation at JoVE.com

Эта работа финансировалась CIHR и CF грантов Канады д-р Джим Ху и студенческие кандидат награжден Rahul Kushwah на CF Канаде.

1. Сенсибилизация мышей с Ovalbumin <ol><li> Приготовьте раствор OVA (класс В; Sigma, MO) в стерильном PBS в концентрации 1 мг / мл (раствор можно хранить при температуре -80 ° С). </li><li> Для того чтобы подготовить OVA-алюм смесь, возьмите Квасцы в трубку и добавить OVA решение в моде в то время как по каплям встр?...

<ol>
	<li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+dendritic+cells+in+the+induction+of+regulatory+T+cells.">Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells.</a> Cell Biosci. 20, (2011).</li><li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complexity+of+dendritic+cell+subsets+and+their+function+in+the+host+immune+system.">Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system.</a> Immunology. 133, 409-419 (2011).</li><li>Lambrecht, B. N., Hammad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+our+breath+away:+dendritic+cells+in+the+pathogenesis+of+asthma.">Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma.</a> Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).</li><li>Hammad, H., Lambrecht, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+and+epithelial+cells:+linking+innate+and+adaptive+immunity+in+asthma.">Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).</li><li>Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerizing+allergic+responses+in+the+lung.">Tolerizing allergic responses in the lung.</a> Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).</li><li>Herz, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relevance+of+murine+animal+models+to+study+the+development+of+allergic+bronchial+asthma.">The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma.</a> Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).</li><li>Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+animal+models+to+study+the+central+role+of+T+cells+in+immediate-type+hypersensitivity+responses.">Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).</li><li>Nakae, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+can+contribute+to+multiple+features+of+ovalbumin-induced+allergic+inflammation+of+the+airways+in+mice.">TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).</li><li>Guth, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+environment+determines+unique+phenotype+of+alveolar+macrophages.">Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).</li><li>Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+pulmonary+T+cell+response+to+helper-dependent+adenoviral+vectors+following+intranasal+delivery.">Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery.</a> J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).</li><li>Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+dendritic+cells+induce+tolerance+in+mice+through+suppression+of+dendritic+cell+maturation+and+induction+of+antigen-specific+regulatory+T+cells.">Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells.</a> J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).</li></ol>

Метод, представленные здесь предлагается проточной цитометрии подход, основанный на анализе легочной РС, основанные на поставку OVA-FITC для отвода дыхательных путей. Это позволяет выборочный мониторинг легких домена, которые занимают OVA-FITC и, следовательно, постоянного населения, которы...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> Ovalbumin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5503 </td></tr><tr><td> Квасцы </td><td> Thermo Scientific </td><td> 77161 </td></tr><tr><td> OVA-FITC </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9771 </td></tr><tr><td> Коллагеназы D </td><td> Roche </td><td> 11088858001 </td></tr><tr><td> Антитела </td><td> E-биологических наук </td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of pulmonary dendritic cell maturation and migration during allergic airway inflammation

Дендритные клетки (ДК) являются ключевыми игроками участвуют в инициации иммунного ответа, активируя антиген-специфических Т-клеток. ДК присутствуют в периферических тканях, в установившемся режиме, однако в связи с антигенной стимуляции, ДК занимает антиген и быстро перейти на дренаж лимфатических узлов, где они инициируют Т-клеточного ответа против антигенов 1,2. Кроме того, контроллеры домена также играют ключевую роль в инициации аутоиммунных и аллергических иммунных реакций 3. ДК играет важную роль как в начале иммунного ответа и индукции толерантности в условиях легкого среды 4. Легкие среды в значительной степени вызывающий иммунологическую толерантность, в связи с воздействием широкого спектра экологических антигенов 5. Тем не менее, у некоторых людей есть перерыв в терпимости, что приводит к индукции аллергии и астмы. В этом исследовании мы опишем стратегию, которая может быть использована для контроля дыхательных путей постоянного созревания и миграцион в ответ на антиген для сенсибилизации. Измерение постоянного тока дыхательных путей созревания и миграции позволяет для оценки кинетики иммунного ответа в течение аллергического воспаления дыхательных путей, а также помогает в понимании масштабов последующего иммунного ответа, а также основные механизмы. Наша стратегия основана на использовании в качестве овальбумина сенсибилизирующего агента. Ovalbumin вызванного аллергической астмы является широко используемой модели, чтобы воспроизвести дыхательных путях эозинофилов, воспаления легких и повышенный уровень IgE, найденные во время астмы 6,7. После сенсибилизации мышей оспорено интраназального доставки FITC помечены овальбумина, который позволяет для конкретных маркировки дыхательных путей домена который поглощение овальбумина. Далее, используя несколько DC специфических маркеров, мы можем оценить созревания этих контроллеров домена, а также может оценить их миграции в дренаж лимфатических узлов, используя проточной цитометрии.

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation at JoVE.com

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Мы описываем стратегии для контроля созревания и миграции легких дендритные клетки в ответ на овальбумина в условиях овальбумина индуцированного аллергического воспаления дыхательных путей. Эта стратегия может быть изменена для оценки миграции легких дендритных клеток в условиях заражения.

Анализ легких созревание дендритных клеток и миграции в течение аллергического воспаления дыхательных путей

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Человеческий Т-лимфоцитов изоляции, культуры и анализ миграции In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

Оптимизированный протокол для эффективной трансфекции дендритных клеток без сотового Созревание

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Проточной цитометрии анализа иммунных клеток мышей В аорты

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Мониторинг дендритных клеток с использованием миграции<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Магнитно-резонансная томография

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

Метод В естественных изображений отличить острого и хронического воспаления

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

Оптимизированная метод выделения и расширение Инвариантные естественных киллеров Т-клеток из селезенки мыши

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Выделение, характеристика и функциональное обследование сотовый сети десен иммунной

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-трахеи Администрация<em&gt; Гемофильной</em&gt; В мышиные модели для изучения Воспаление дыхательных путей

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

Пробирного CFSE основе для изучения миграции мышиной кожи дендритных клеток в Опорожнение лимфатических узлов во время инфекции с<em&gt; Mycobacterium Bovis</em&gt; Кальметта-Герена

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Точность резки Мышь легких Кусочки визуализировать в прямом легочная дендритные клетки

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...