Name: analysis of pulmonary dendritic cell maturation and migration during allergic airway inflammation
Uploaded: 2012-07-23T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation at JoVE.com

Detta arbete har finansierats av CIHR och CF Kanada bidrag till Dr Jim Hu och en doktorand tilldelas Rahul Kushwah av CF Kanada.

1. Sensibilisering av möss med ovalbumin <ol><li> Framställ en lösning av OVA (kvalitet V, Sigma, MO) i steril PBS vid en koncentration av 1 mg / ml (kan lösningen lagras vid -80 ° C). </li><li> För att förbereda OVA-alun blandning, ta Alun i ett rör och tillsätt OVA-lösning på ett droppvis sätt under rotation av röret vid ett förhållande av 1:1. Rör om blandningen under 30 minuter och använd omedelbart efter blandning. </li><li> Användning av en 1 ml spruta, injicera 0,2 ml av blandningen in i mus p...

<ol>
	<li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+dendritic+cells+in+the+induction+of+regulatory+T+cells.">Role of dendritic cells in the induction of regulatory T cells.</a> Cell Biosci. 20, (2011).</li><li>Kushwah, R., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complexity+of+dendritic+cell+subsets+and+their+function+in+the+host+immune+system.">Complexity of dendritic cell subsets and their function in the host immune system.</a> Immunology. 133, 409-419 (2011).</li><li>Lambrecht, B. N., Hammad, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+our+breath+away:+dendritic+cells+in+the+pathogenesis+of+asthma.">Taking our breath away: dendritic cells in the pathogenesis of asthma.</a> Nat Rev Immunol. 3, 994-1003 (2003).</li><li>Hammad, H., Lambrecht, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+and+epithelial+cells:+linking+innate+and+adaptive+immunity+in+asthma.">Dendritic cells and epithelial cells: linking innate and adaptive immunity in asthma.</a> Nat. Rev. Immunol. 8, 193-204 (2008).</li><li>Lloyd, C. M., Murdoch, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerizing+allergic+responses+in+the+lung.">Tolerizing allergic responses in the lung.</a> Mucosal. Immunol. 3, 334-344 (2010).</li><li>Herz, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relevance+of+murine+animal+models+to+study+the+development+of+allergic+bronchial+asthma.">The relevance of murine animal models to study the development of allergic bronchial asthma.</a> Immunol. Cell Biol. 74, 209-217 (1038).</li><li>Herz, U., Lumpp, U., Daser, A., Gelfand, E. W., Renz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+animal+models+to+study+the+central+role+of+T+cells+in+immediate-type+hypersensitivity+responses.">Murine animal models to study the central role of T cells in immediate-type hypersensitivity responses.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 409, 25-32 (1996).</li><li>Nakae, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TNF+can+contribute+to+multiple+features+of+ovalbumin-induced+allergic+inflammation+of+the+airways+in+mice.">TNF can contribute to multiple features of ovalbumin-induced allergic inflammation of the airways in mice.</a> J. Allergy Clin. Immunol. 119, 680-686 (2007).</li><li>Guth, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lung+environment+determines+unique+phenotype+of+alveolar+macrophages.">Lung environment determines unique phenotype of alveolar macrophages.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 296, L936-L946 (2009).</li><li>Kushwah, R., Cao, H., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+pulmonary+T+cell+response+to+helper-dependent+adenoviral+vectors+following+intranasal+delivery.">Characterization of pulmonary T cell response to helper-dependent adenoviral vectors following intranasal delivery.</a> J. Immunol. 180, 4098-4108 (2008).</li><li>Kushwah, R., Oliver, J. R., Zhang, J., Siminovitch, K. A., Hu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+dendritic+cells+induce+tolerance+in+mice+through+suppression+of+dendritic+cell+maturation+and+induction+of+antigen-specific+regulatory+T+cells.">Apoptotic dendritic cells induce tolerance in mice through suppression of dendritic cell maturation and induction of antigen-specific regulatory T cells.</a> J. Immunol. 183, 7104-7118 (2009).</li></ol>

Metoden som presenteras här har en flödescytometri metod för att analysera lung utvecklingsländer, baserat på leverans av OVA-FITC för luftvägarna utmaning. Detta tillåter selektiv kontroll av pulmonella DCS, vilka tar upp OVA-FITC och därför är de DC populationer, som övervakas är ett effektivt de som deltar i luftvägarna immunsvar under loppet av OVA-inducerad allergisk inflammation i luftvägarna. I kontrollmöss, i avsaknad av allergiska inflammationen i luftvägarna, antalet flyttande DCS (OVA-FITC + ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet på reagens </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td></tr><tr><td> Ovalbumin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5503 </td></tr><tr><td> Alun </td><td> Thermo Scientific </td><td> 77.161 </td></tr><tr><td> OVA-FITC </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9771 </td></tr><tr><td> Kollagenas D </td><td> Roche </td><td> 11088858001 </td></tr><tr><td> Antikroppar </td><td> e-Bioscience </td><td></td></tr></tbody></table>

analysis of pulmonary dendritic cell maturation and migration during allergic airway inflammation

Dendritiska celler (DC) är de viktigaste aktörerna inom initiering av adaptiva immunsvaret genom att aktivera antigen-specifika T-celler. DC: er är närvarande i perifera vävnader i stationärt tillstånd, men som svar på antigen stimulering, DC: er tar upp antigenet och snabbt migrera till de dränerande lymfkörtlarna där de initierar T-cellsvar mot antigenet 1,2. Dessutom utvecklingsländer spelar också en viktig roll i att initiera autoimmun samt allergiska immunsvar 3. DC spelar en viktig roll i både initiering av immunsvar och induktion av tolerans i fastställandet av lungan miljön 4. Lung miljön är i stort sett tolerogena, på grund av exponering för stora utbud av miljö-antigener 5. Emellertid, i vissa individer finns ett brott i tolerans, vilket leder till induktion av allergi och astma. I denna studie beskriver vi en strategi som kan användas för att övervaka luftvägarna DC mognad och MIGranson som svar på antigen som används för sensibilisering. Mätning av luftvägarna DC mognad och migration möjliggör en bedömning av kinetiken av immunsvaret under luftvägarna allergisk inflammation och även hjälper till att förstå omfattningen av den efterföljande immunsvaret tillsammans med de bakomliggande mekanismerna. Vår strategi är baserad på användningen av ovalbumin som en sensibiliserande agent. Ovalbumin-inducerad allergisk astma är en allmänt använd modell för att återskapa luftvägarna eosinofili, lunginflammation och förhöjda IgE-nivåer som konstaterades under astma 6,7. Efter sensibilisering, möss utmanas av intranasal leverans av FITC-märkt ovalbumin, vilket möjliggör för specifik märkning av luftvägarna utvecklingsländer som upptag ovalbumin. Därefter använder flera DC specifika markörer, kan vi utvärdera mognaden hos dessa DCs och kan också utvärdera deras migrering till de dränerande lymfkörtlarna genom användning av flödescytometri.

Watch this Scientific Journal Video about Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation at JoVE.com

Analysis of Pulmonary Dendritic Cell Maturation and Migration during Allergic Airway Inflammation

Vi beskriver en strategi för att övervaka mognad och migration av pulmonella dendritiska celler som svar på ovalbumin i inställningen av ovalbumin-inducerad allergisk inflammation i luftvägarna. Denna strategi kan ändras för att bedöma migration av pulmonell dendritiska celler i inställningarna för infektion.

Analys av Pulmonell mognad av dendritiska celler och migration under Allergisk luftvägsinflammation

Dendritic cells (DCs) are the key players involved in initiation of adaptive immune response by activating antigen-specific T cells. DCs are present in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Humana T-lymfocyter Isolering, Kultur och analys av migration In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Optimized Protocol for Efficient Transfection of Dendritic Cells without Cell Maturation

Optimerade protokoll för effektiv Transfektion av dendritiska celler utan cellmognaden

Dendritic cells (DCs) can be considered sentinels of the immune system which play a critical role in its initiation and response to infection1. Detection ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Flödescytometrisk analys av immunceller Inom Murine artärer

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Övervakning dendritceller Migration hjälp<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Magnetic Resonance Imaging

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

In vivo Imaging för att skilja akut och kronisk inflammation

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

En optimerad metod för att isolera och utöka Invariant Natural Killer T-celler från musmjälte

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Isolation, Characterization and Functional Examination of the Gingival Immune Cell Network

Isolering, karakterisering och funktionella Undersökning av tandkötts Immune Cell Network

Immune cell networks in tissues play a vital role in mediating local immunity and maintaining tissue homeostasis, yet little is known of the resident ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intratrakeal administration<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; I musmodeller för att studera Airway Inflammation

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-Gu&#233;rin

A CFSE-based Assay to Study the Migration of Murine Skin Dendritic Cells into Draining Lymph Nodes During Infection with Mycobacterium bovis Bacille Calmette-GuÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â©rin

En CFSE-baserad analys för att studera migration av dendritiska Murin hudceller i dränerande lymfkörtlar under infektion med<em&gt; Mycobacterium bovis</em&gt; Bacille Calmette-Guerin

Dendritic cells (DCs) are important for initiating immune responses, in part through their ability to acquire and shuttle antigen to the draining lymph ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Precision-cut Mouse Lung skivor att visualisera Live Pulmonary dendritiska celler

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...