Name: planarian immobilization, partial irradiation, and tissue transplantation
Uploaded: 2012-08-06T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Planarian Immobilization, Partial Irradiation, and Tissue Transplantation at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות Chiyoko קוביאשי ו Kiyokazu אגתה עבור עצות מועילות על השתלת planarian כמו גם חברים בעבר ובהווה של המעבדה סאנצ לדיונים יסולא בפז במהלך הפיתוח של טכניקות אלה. עבודה זו נתמכה על ידי NIH הדרכה גרנט (5T32 HD0791) כדי OCG ו NIH R37GM057260 את אס&quot;א. אס&quot;א הוא הווארד יוז חוקר רפואי במכון.

הערה: פרוטוקול זה מצביע על שימוש בחומרים העלולים להיות מסוכנים (עופרת chloretone). לרכוש, לקרוא, ופעל MSDS עבור כל החומרים העלולים להיות מסוכנים. 1. התרבות בעלי חיים, בחירה ולאחר הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction...

<ol>
	<li>Morgan, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+studies+of+the+regeneration+of+Planaria+maculata.">Experimental studies of the regeneration of Planaria maculata.</a> Arch. Entw. Mech. Org. 7, 364-397 .</li><li>Reddien, P. W., Sanchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamentals+of+planarian+regeneration.">Fundamentals of planarian regeneration.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 20, 725-757 (2004).</li><li>Randolph, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+regeneration+of+the+tail+in+lumbriculus.">The regeneration of the tail in lumbriculus.</a> J. Morphol. 7, 317-344 .</li><li>Wagner, D. E., Wang, I. E., Reddien, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonogenic+neoblasts+are+pluripotent+adult+stem+cells+that+underlie+planarian+regeneration.">Clonogenic neoblasts are pluripotent adult stem cells that underlie planarian regeneration.</a> Science. 332, 811-816 (2011).</li><li>Santos, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+transplantation+in+planaria.">Studies on transplantation in planaria.</a> Biological Bulletin. 57, 188-197 (1929).</li><li>Morgan, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+grafted+pieces+of+planarians.">Regeneration of grafted pieces of planarians.</a> J. Exp. Zo&#246;l. 3, 269-294 (1906).</li><li>Dubois, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+&#225;+l+'&#232;tude+de+la+migration+des+cellules+de+règènèration+chez+les+Planaires+dulcicoles.">Contribution &#225; l '&#232;tude de la migration des cellules de règènèration chez les Planaires dulcicoles.</a> Bull. Biol. Fr. Belg. 83, 213-283 (1949).</li><li>Purton, L. E., Scadden, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Limiting+factors+in+murine+hematopoietic+stem+cell+assays.">Limiting factors in murine hematopoietic stem cell assays.</a> Cell Stem Cell. 1, 263-270 (2007).</li><li>Cebria, F., Newmark, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Planarian+homologs+of+netrin+and+netrin+receptor+are+required+for+proper+regeneration+of+the+central+nervous+system+and+the+maintenance+of+nervous+system+architecture.">Planarian homologs of netrin and netrin receptor are required for proper regeneration of the central nervous system and the maintenance of nervous system architecture.</a> Development. , 132-3691 (2005).</li><li>Newmark, P. A., S&#225;nchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bromodeoxyuridine+specifically+labels+the+regenerative+stem+cells+of+planarians.">Bromodeoxyuridine specifically labels the regenerative stem cells of planarians.</a> Dev. Biol. 220, 142-153 (2000).</li><li>Miller, W., Kennedy, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=X-ray+attenuation+in+lead,+aluminum,+and+concrete+in+the+range+275+to+525+kilovolts.">X-ray attenuation in lead, aluminum, and concrete in the range 275 to 525 kilovolts.</a> Radiology. 65, 920-925 (1955).</li><li>Pearson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formaldehyde-based+whole-mount+in+situ+hybridization+method+for+planarians.">Formaldehyde-based whole-mount in situ hybridization method for planarians.</a> Dev. Dyn. 238, 443-450 (2009).</li><li>Hayashi, T., Asami, M., Higuchi, S., Shibata, N., Agata, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+planarian+X-ray-sensitive+stem+cells+by+fluorescence-activated+cell+sorting.">Isolation of planarian X-ray-sensitive stem cells by fluorescence-activated cell sorting.</a> Dev. Growth Differ. 48, 371-380 (2006).</li><li>Reddien, P. W., Oviedo, N. J., Jennings, J. R., Jenkin, J. C., S&#225;nchez Alvarado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SMEDWI-2+is+a+PIWI-like+protein+that+regulates+planarian+stem+cells.">SMEDWI-2 is a PIWI-like protein that regulates planarian stem cells.</a> Science. 310, 1327-1330 (2005).</li><li>St&#233;phan-Dubois, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Les+cellules+de+r&#233;g&#233;n&#233;ration+chez+la+planaire+Dendrocoleum+lacteum.">Les cellules de r&#233;g&#233;n&#233;ration chez la planaire Dendrocoleum lacteum.</a> Bulletin de la Société Zooologique de France. 86, 172-185 (1961).</li><li>Gurley, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+secreted+Wnt+pathway+components+reveals+unexpected+complexity+of+the+planarian+amputation+response.">Expression of secreted Wnt pathway components reveals unexpected complexity of the planarian amputation response.</a> Dev. Biol. 347, 24-39 (2010).</li><li>Salvetti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adult+stem+cell+plasticity:+neoblast+repopulation+in+non-lethally+irradiated+planarians.">Adult stem cell plasticity: neoblast repopulation in non-lethally irradiated planarians.</a> Dev. Biol. 328, 305-314 (2009).</li></ol>

החשיבות של חוסר תנועה Immobilization הוא ללא ספק השלב הקריטי ביותר על ההשלמה המוצלחת של כל התהליכים האלה. אם planaria הם משותקים באופן לא תקין לפני הקרנה חלקית, הם עלולים לעבור מתחת למגן את ההובלה, ייצור תוצאות לא עקביות ולא בלבול. בנוסף, אם בע?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> כללי העברת מטרת פיפטה </td><td> Samco </td><td> 691 </td></tr><tr><td> צינורות נימי (0.75 מ&quot;מ ID) </td><td> Fhc </td><td> 30-30-0 </td></tr><tr><td> צינורות נימי (OD 0.7 מ&quot;מ) </td><td> Fhc </td><td> 30-50-08 </td></tr><tr><td> Parafilm M </td><td> VWR </td><td> 52858-076 </td></tr><tr><td> Kimwipes 34155 </td><td> VWR </td><td> 500029-891 </td></tr><tr><td> מסנן נייר שחור </td><td> שלייכר &amp; Schuell </td><td> 10310809 </td></tr><tr><td> Whatman # 2 מסנן נייר 1002-055 </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 09-810B </td></tr><tr><td> Whatman # 3 מסנן נייר 1003-185 </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> 09-820E </td></tr><tr><td> סיגריה מתגלגל נייר </td><td> זיג זג, מקורי </td><td> NA </td></tr><tr><td> פטרימנות </td><td> VWR </td><td> 82050-544 </td></tr><tr><td> מלקחיים דומונט, Inox # 5 </td><td> FST </td><td> 11251-20 </td></tr><tr><td> Chloretone </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> 112054 </td></tr><tr><td> קזאין </td><td> סיגמא אולדריץ&#39; </td><td> C3400 </td></tr><tr><td> להוביל שילדס </td><td> אלפא מערכות קורפ, Bluffdale, UT </td><td> עיצוב מותאם אישית </td></tr><tr><td> XRAD-320 ביולוגית Irradiator </td><td> Precision X-Ray, צפון Branford, CT </td><td> NA </td></tr></tbody></table>

planarian immobilization, partial irradiation, and tissue transplantation

Planarian, השטוחה מים מתוקים, הוכיחה להיות מערכת רב עוצמה לנתח התחדשות מטזואניים ו תא גזע 1,2 ביולוגיה. התחדשות Planarian של כל רקמות חסרים או פגומים מתאפשרת על ידי בתאי גזע בוגרים כינה neoblasts 3. למרות אלה בתאי גזע הוכחו בוודאות להיות pluripotent ומסוגלים לשחזר להפליא של כל בעל חיים 4, ההטרוגניות בקרב האוכלוסייה לתאי גזע ואת הדינמיקה של התנהגות הסלולר שלהם נותרו לא פתורות, במידה רבה. בשל ריבוי והפצה רחב של בתאי גזע ברחבי תוכנית הגוף planarian, שיטות מתקדמות של subpopulations מניפולציה בתאי גזע לצורך מחקר מולקולרי ומתפקד in vivo יש צורך. השתלת רקמות הקרנה חלקית שתי שיטות שבו subpopulation בתאי גזע planarian ניתן לבודד למחקר נוסף. הטכניקה לכל אחד יש יתרונות ברורים. Tהשתלת הנושא מאפשר הקדמה של בתאי גזע, לתוך שורה תמימה, כי הם או מטבעו שונה גנטית או טופלו בעבר פרמקולוגית. לחלופין, הקרנה חלקית מאפשר בידוד בתאי גזע בתוך הפונדקאי, זה לצד זה לרקמות ללא בתאי גזע, ללא הקדמה של פצע או עכוז של שלמות רקמות. באמצעות שתי השיטות, ניתן לחקור את הגורמים תאים אוטונומיים ולא אוטונומיים הנובעות בקרת התא פונקציות, כגון התפשטות, בידול, והגירה. הן רקמות להשתלה 5,6 ו חלקית קרינה 7 שימשו היסטורית בהגדרת רבים של שאלות על התחדשות planarian שנותרו תחת מחקר היום. עם זאת, טכניקות אלה נשארו underused בשל אופי מייגע ובלתי עקבית של השיטות הקודמות. הפרוטוקולים המוצגים כאן מייצגים צעד גדול קדימה בהפחתת זמןND המאמץ הנדרש כדי reproducibly לייצר מספר רב של בעלי חיים מורכבים או מוקרן באופן חלקי עם efficacies מתקרב 100 אחוז. אנו מכסים את כל התרבות של בעלי חיים גדולים, חוסר תנועה, לקראת הקרנת חלקית, השתלת רקמות, אופטימיזציה של התאוששות בעלי חיים. יתר על כן, העבודה המתוארת כאן ממחיש את היישום הראשון של שיטת הקרנה חלקית לשימוש עם planarian ביותר למד נרחב, Schmidtea mediterranea. בנוסף, רקמות יעיל השתלת ב planaria פותחת את הדלת לבדיקה תפקודית של subpopulations של בתאי גזע נאיבי או מטופלים מבחני repopulation, אשר כבר זמן רב את שיטת תקן הזהב של מנסה לאמוד את הפוטנציאל למבוגרים בתאי גזע אצל יונקים 8. אימוץ רחב של שיטות אלו יהיה ללא ספק להוביל להבנה טובה יותר של התנהגויות הסלולר של בתאי גזע בוגרים במהלך הומאוסטזיס רקמה והתחדשות.

Watch this Scientific Journal Video about Planarian Immobilization, Partial Irradiation, and Tissue Transplantation at JoVE.com

Planarian Immobilization, Partial Irradiation, and Tissue Transplantation

השיטה יעילה השתלת רקמות בגודל מוגדרת ועקבית בין planaria מתואר. היא כללה גם תיאור של איך להשתמש בטכניקה immobilization להשתלה ניתן להתאים, בשיתוף עם מגן עופרת, הקרנה חלקית של בעלי חיים.

Immobilization Planarian, הקרנה חלקית, השתלת רקמות

The planarian, a freshwater flatworm, has proven to be a powerful system for dissecting metazoan regeneration and stem cell biology1,2. Planarian ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Skin Transplantation

השתלת עור Murine

As one of the most stringent and least technically challenging models, skin transplantation is a standard method to assay host T cell responses to ...

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

אקטין Co-Assay שקיעה, כי ניתוח של חלבון מחייב את ה-F-אקטין

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Generation of Human CD40-activated B cells

הדור של האדם CD40 בתאי B המופעל

CD40-activated B cells (CD40-B cells) have been identified as an alternative source of immuno-stimulatory antigen-presenting cells (APC) for cancer ...

Tissue Targeted Embryonic Chimeras: Zebrafish Gastrula Cell Transplantation

ממוקד רקמות מפלצות עובריים: דג הזברה Gastrula השתלת תאים

Certain fundamental questions in the field of developmental biology can only be answered when cells are placed in novel environments or when small groups ...

Pharmacological and Functional Genetic Assays to Manipulate Regeneration of the Planarian Dugesia japonica

Pharmacological and Functional Genetic Assays to Manipulate Regeneration of the Planarian Dugesia japonica

מבחני גנטית תרופתי ו פונקציונלית לתפעל התחדשות של Planarian Japonica Dugesia</em

Free-living planarian flatworms have a long history of experimental usage owing to their remarkable regenerative abilities1. Small fragments excised from ...

Germ Cell Transplantation and Testis Tissue Xenografting in Mice

נבט השתלת ורקמות testis Xenografting ב עכברים

Germ cell transplantation was developed by Dr. Ralph Brinster and colleagues at the University of Pennsylvania in 19941,2. These ground-breaking studies ...

Rapid Isolation And Purification Of Mitochondria For Transplantation By Tissue Dissociation And Differential Filtration

בידוד מהיר וטיהור של מיטוכונדריה להשתלה על ידי דיסוציאציה רקמות ודיפרנציאל סינון

Previously described mitochondrial isolation methods using differential centrifugation and/or Ficoll gradient centrifugation require 60 to 100 min to ...

Partial Bile Duct Ligation in the Mouse: A Controlled Model of Localized Obstructive Cholestasis

צינור המרה חלקית מצדו העכבר: מודל מבוקרת של מקומי חסימתית לחסימת מרה תוך כבדית

In rodents, complete bile duct ligation (cBDL) of the common bile duct is an established surgical technique for studying obstructive cholestasis and bile ...

A Mouse Model of Intestinal Partial Obstruction

דגם העכבר של חסימת מעיים חלקית

Intestinal obstructions, that impede or block peristaltic movement, can be caused by abdominal adhesions and most gastrointestinal (GI) diseases including ...

Planarian Scrunching as a Quantitative Behavioral Readout for Noxious Stimuli Sensing

התכתוב תכנון כקריאה התנהגותית כמותית עבור חישת גירויים מזיקים

Freshwater planarians normally glide smoothly through ciliary propulsion on their ventral side. Certain environmental conditions, however, can induce ...