Name: a quantitative fitness analysis workflow
Uploaded: 2012-08-13T12:00:00
Duration: 11 min 39 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Quantitative Fitness Analysis Workflow at JoVE.com

אנו בתודה להכיר את כל חברי המעבדה שלנו המרכז לביולוגיה מערכת משולבת של הזדקנות ותזונה (CISBAN) עבור תמיכה דיונים מועילים. מחקר זה נתמך על ידי ביוטכנולוגיה ו מחקר מדעי הביולוגיה המועצה (BBSRC) (BB/C008200/1) ואת האמון Wellcome (075294, 093088).

<ol>
	<li>Addinall, S. G., Holstein, E., Lawless, C., Yu, M., Chapman, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Fitness+Analysis+shows+that+NMD+proteins+and+many+other+protein+complexes+suppress+or+enhance+distinct+telomere+cap+defects.">Quantitative Fitness Analysis shows that NMD proteins and many other protein complexes suppress or enhance distinct telomere cap defects.</a> PLoS Genetics. 7 (4), e1001362 (2011).</li><li>Addinall, S. G., Downey, M., Yu, M., Zubko, M. K., Dewar, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genomewide+suppressor+and+enhancer+analysis+of+cdc13-1+reveals+varied+cellular+processes+influencing+telomere+capping+in+Saccharomyces+cerevisiae.">A genomewide suppressor and enhancer analysis of cdc13-1 reveals varied cellular processes influencing telomere capping in Saccharomyces cerevisiae.</a> Genetics. 180, 2251-2266 (2008).</li><li>Lawless, C., Wilkinson, D., Young, A., Addinall, S., Lydall, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colonyzer:+automated+quantification+of+micro-organism+growth+characteristics+on+solid+agar.">Colonyzer: automated quantification of micro-organism growth characteristics on solid agar.</a> BMC Bioinformatics. 11, 287-28 (2010).</li><li>Tong, A. H., Evangelista, M., Parsons, A. B., Xu, H., Bader, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+genetic+analysis+with+ordered+arrays+of+yeast+deletion+mutants.">Systematic genetic analysis with ordered arrays of yeast deletion mutants.</a> Science. 294, 2364-2368 (2001).</li><li>Costanzo, M., Baryshnikova, A., Bellay, J., Kim, Y., Spear, E. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetic+landscape+of+a+cell.">The genetic landscape of a cell.</a> Science. 327, 425-431 (2010).</li><li>Blomberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+growth+rate+in+high-throughput+growth+phenotyping.">Measuring growth rate in high-throughput growth phenotyping.</a> Curr. Opin. Biotechnol. 22 (1), 94-102 (2011).</li><li>Maringele, L., Lydall, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EXO1-dependent+single-stranded+DNA+at+telomeres+activates+subsets+of+DNA+damage+and+spindle+checkpoint+pathways+in+budding+yeast+yku70&#916;mutants.">EXO1-dependent single-stranded DNA at telomeres activates subsets of DNA damage and spindle checkpoint pathways in budding yeast yku70&#916;mutants.</a> Genes and Dev. 16 (15), 1919-1933 (2002).</li><li>Warringer, J., Blomberg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+screening+in+environmental+arrays+allows+analysis+of+quantitative+phenotypic+profiles+in+Saccharomyces+cerevisiae.">Automated screening in environmental arrays allows analysis of quantitative phenotypic profiles in Saccharomyces cerevisiae.</a> Yeast. 20, 53-67 (2003).</li><li>Hillenmeyer, M., Fung, E., Wildenhain, J., Pierce, S., Hoon, S., Lee, W., Proctor, M., St. Onge, R., Tyers, M., Koller, D., Altman, R., Davis, R., Nislow, C., Giaever, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemical+genomic+portrait+of+yeast:+uncovering+a+phenotype+for+all+genes.">The chemical genomic portrait of yeast: uncovering a phenotype for all genes.</a> Science. 320 (5874), 362-365 (2008).</li><li>Smith, A. M., Durbic, T., Oh, J., Urbanus, M., Proctor, M., Heisler, L. E., Giaever, G., Nislow, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competitive+Genomic+Screens+of+Barcoded+Yeast+Libraries.">Competitive Genomic Screens of Barcoded Yeast Libraries.</a> J. Vis. Exp. (54), e2864 (2011).</li><li>Lederberg, J., Lederberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replica+plating+and+indirect+selection+of+bacterial+mutants.">Replica plating and indirect selection of bacterial mutants.</a> J. Bacteriol. 63, 399-406 (1952).</li><li>Queller, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioural+ecology:+The+social+side+of+wild+yeast.">Behavioural ecology: The social side of wild yeast.</a> Nature. 456, 589-590 (2008).</li></ol>

אין ניגוד עניינים הצהיר.

QFA הוא במובנים רבים ישירה צאצא של שלושה הספסל בקנה מידה שנקבעו טכניקות מיקרוביולוגיות: דילול תרבות ספוט סדרת בדיקות 9, עקומת גדילה נחישות תרבויות נוזל סודה 9 ו 13 ציפוי העתק. שלוש שיטות אלו מסוכמים ולעומת QFA אחרים תפוקה גבוהה טכניקות בטבלה 2. בעוד סדרת בדיקות דילול ספוט להגדיר הכושר של זן כפי יכולתו ליצור מושבות בסדרה של התרבויות שצמחו מתוך מגוון רחב של דילולים הבידוד, QFA אמצעים כושר זן ידי תצפיות חוזרות ונשנות של תרבות אחת על מנת לבנות עקומת גדילה. לכימות כושר מתרבויות יחיד מאפשר זנים רבים יותר כדי לבחון בעת ​​ובעונה אחת, בתנאים זהים. מערכים משכפלים של תרבויות מאפשר בדיקות חוזרות ונשנות של אוספים מתח, המועילה ביותר כאשר בודקים כושר הבדלים תרבות בסביבות שונות או רקע גנטי. פרוטוקול QFA הציגכאן משתמשת בציוד רובוטי יקר לשכפל, מחסן, לדגור צלחות אגר התמונה, המתאים לצפייה הצמיחה של אלפי תרבויות עצמאיות (QFA רובוטית, לוח 2). עם זאת, מאז QFA מבוסס על טכניקות מסורתיות מבוססות המעבדה, זה גם יכול להתבצע הרבה יותר בזול על ידי החלפת סיוע רובוט בצעדים ידנית (ידנית QFA, טבלה 2). מדריך QFA כרוך שכפול חיסון של תרבויות על גבי צלחות אגר באמצעות כלי סיכה ידני העברת ידנית של צלחות וממנה חממה לצילום. העבודה באותו ניתוח חישובית ניתן ליישם כדי ליצור עקומות גדילה של עיצוב או ניסיוני. QFA הערכות כושר נראה מדויק יחסית. באיור 4, fitnesses הממוצע של ארבעה אשכולות לדוגמה תפקודית של מחיקות גנים הקשורים מודגשים. בסמיכות של בני המעמד גן פונקציונלי כל הקשור independ 2אף אוזן גרון רקע גנטי (ura3Δ ו cdc13-1) מציין את שחזור של הערכות QFA כושר. למשל, רק 3 מחיקות גנים (מתוך 4300 אפשרי) להפריד בין שלושה מבני מורכב MRX משומר. תפוקה גבוהה חלופות QFA לבדיקת מאפייני הגידול של זני חיידקים כוללים SGA 5,6, מסכי התחרות בספריות המינימרקטים 11,12 ומסכי לכידת קינטיקה צפיפות אופטית של הקוראים צלחת spectrophotometric 10 אשר סיכם בטבלה 2 ותיאר באופן מלא יותר במקום אחר 8 . QFA וצלחות SGA, שבו תרבויות הגדלים על משטחים מוצקים אגר (שיטות המבוססות על אגר, טבלה 2) ניתן לטפל בקלות ובמהירות על ידי רובוט. מוצקים פני תרבויות אגר הם מאוורר היטב ברחבי צמיחה התאים יכולים לגדול בתרבויות קבועים, ומאפשר חיידקים חברותיים לגדול בקהילה 14. נותר בשלמותו, קהילות מיקרוביאלי כמהffect שלהם מיקרו סביבות הפרשת רעלים, כמו אתנול, ואולי איתות בין תאים. עם זאת, ערבוב רציף של תרבויות נוזלי, הדרושים כדי להשיג אוורור הולם, משבש באופן מלאכותי קהילות מיקרוביאלי וסביבות מיקרו שלהם אשר עשוי להשפיע על מצבי שלהם של צמיחה. חוצה זיהום הוא פחות דאגה בשיטות אגר מוצק שכן יש פחות הזדמנויות עבור כתמים נוזליים שנשאו תאים בין תרבויות. אם הזיהום מתרחש בדרך האוויר שמקורן בחיידקים זרים מבחני אגר מוצק, היא לעתים קרובות ניתן להבחין באמצעות בדיקה ויזואלית של צלחות אגר מוצק היוו או להסירו. התפוקה QFA גבוה באופן משמעותי מזה של שיטות נוזלי מקבילים בשתי דרכים. קודם כל, על QFA (ו SGA) צלחות, תרבויות מחוסן ארוזים יחד יותר בצפיפות, נותן תרבויות עצמאיות יותר בכל צלחת. ב QFA יש בדרך כלל 308 תרבויות, לא כולל הלא ניסיוניים תרבויות מתקדמות (איור 1) comבשורה התחתונה, שטיין במקביל בתרבויות נוזלי עם 96 או 100 תרבויות בכל צלחת. שנית, ניסויים QFA וניתן לשנותם למספר הרבה יותר גדול של צלחות. בעוד מספר הצלחות ניתח בניסוי QFA אחת מוגבל רק על ידי השטח הזמין בחדר חממה או חם, לכידת המינימום המותר בתדירות התמונה בתדירות מקסימלית לכידת השגה, מספר הצלחות בניסוי גידול נוזלי הוא מוגבל מאוד לפי נפח את הקורא הצלחת (בדרך כלל אחת או שתיים הצלחות), או של מערם מחובר הקורא את הצלחת (בדרך כלל 25-50 לוחיות). ביצענו לאחרונה את הניסוי אוטומטי לחלוטין QFA על 123 צלחות, כל אחד עם 308 בתרבויות ניסיוניות, נותן 37,884 תרבויות בו זמנית. אנו מעריכים כי המספר המרבי של השגה תרבויות עצמאיות הגדלים נוזלי היא 96 (תרבויות / צלחת) x 50 (צלחות / מערם) = 4800, שזה בערך פי 10 פחות מאשר התפוקה QFA שלנו. אלטרנטיבי מסכי תרבות נוזלי הוא לנצל רבים אוטומטי Groמכשירים wth במקביל (טבלה 1 מביקורת על ידי Blomberg 8), כל אחד בעל קיבולת של אחד או 2 צלחות. בקרת הטמפרטורה במכשיר זה הוא עצמאי, ולכן התנאים אינם זהים, אבל בהנחה שהם, זרימת עבודה זו תדרוש לפחות 190 מכשירים כאלה כדי להתאים את התפוקה QFA (בהנחה 200 תרבויות נוזלי לכל מכשיר). לסיכום, QFA היא עבודה באיכות גבוהה שניתן להחיל מועילה לאסוף פנוטיפים צמיחה כמותיים בשני ניסויים קטנים ממוקד לגודל תפוקה גבוהה מסכים. היא גמישה מספיק כדי ליישם ביעילות עם דרישות שונות עבור ציוד רובוטי. מרכיב חישובית של זרימת העבודה QFA מבוסס על הקוד, זמין בחינם קוד פתוח.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> העתק Plater </td><td> סיגמא </td><td> R-2508 </td><td> 96 פינים ידנית pintool עם 1/8 &quot;בקוטר סיכות </td></tr><tr><td> מערבבים Mate </td><td> Eppendorf </td><td> 5353 000.014 </td><td></td></tr><tr><td> Biomek FX </td><td> Beckman </td><td> A31842 </td><td></td></tr><tr><td> Teleshake </td><td> Thermo Scientific </td><td> 50095890 </td><td> מותקן Biomek FX </td></tr><tr><td> BM3-SC </td><td> S &amp; P רובוטיקה בע&quot;מ </td><td> BM3-SC </td><td> 192 קרוסלה מסתובבת המדף </td></tr><tr><td> spImager </td><td> S &amp; P רובוטיקה בע&quot;מ </td><td> spImager </td><td> הדמיה ברזולוציה גבוהה ידנית </td></tr><tr><td> spImager עם Cytomליד </td><td> S &amp; P רובוטיקה בע&quot;מ </td><td> מנהג </td><td> טמפרטורה מבוקרת ברזולוציה גבוהה הדמיה אוטומטית </td></tr><tr><td> Cytomat 6001 עם מחליף חום </td><td> Thermo Scientific </td><td> 51022222 </td><td> מצורף spImager </td></tr><tr><td> Ecoline RE207 </td><td> יתירה מאונ </td><td> RE207 </td><td> מצורף Cytomat </td></tr><tr><td> spImager עם קרוסלה </td><td> S &amp; P רובוטיקה בע&quot;מ </td><td> מנהג </td><td> אוטומטי ברזולוציה גבוהה הדמיה </td></tr><tr><td> כלי רובוט PIN אביזר עבור FP12pins </td><td> V &amp; P מדעי </td><td> AFIX96FP12 </td><td> N / A </td></tr><tr><td> 96 x FP12 סיכות </td><td> V &amp; P מדעי </td><td> FP12 </td><td> 50.4 מ&quot;מ אורך, 17 מ&quot;מ אורך חשיפה סיכה </td></tr><tr><td> תחנת עגינה עבור כלי פין </td><td> V &amp; P מדעי </td><td> VP425 </td><td> בסיס תחנת עגינה להסיר כדי לאפשר ייבוש המאוורר של סיכות </td></tr><tr><td>הצמד מברשת ניקוי </td><td> V &amp; P מדעי </td><td> VP425 </td><td> N / A </td></tr><tr><td> העתק Plater </td><td> סיגמא </td><td> R-2508 </td><td> סיכה ידני כלי </td></tr><tr><td> Nunc OmniTray עם מכסה </td><td> Nunc </td><td> 734-0490 </td><td> N / A </td></tr><tr><td> 96 לוחות קלקר סטריליים גם </td><td> גריינר BioOne </td><td> 655161 </td><td> N / A </td></tr><tr><td> 96 פוליסטירן סטריליים מכסים היטב </td><td> גריינר BioOne </td><td> 656171 </td><td> N / A </td></tr></tbody></table> לוח 3. חומרים כימיים ספציפיים וציוד.

a quantitative fitness analysis workflow

ניתוח כמותי כושר (QFA) היא עבודה ניסיונית חישובית להשוואת fitnesses של תרבויות חיידקים הגדלים 1,2,3,4 במקביל. QFA יכול להיות מיושם על תצפיות ממוקד של תרבויות בודדים אך הוא שימושי ביותר עבור אינטראקציה הגנום כולו גנטית או מסכי סמים לחקור עד אלפי תרבויות בלתי תלויים. שיטת הניסוי המרכזי הוא חיסון של עצמאיים, תרבויות לדלל חיידקים נוזלי על גבי צלחות אגר מוצק אשר מודגרת וצילם באופן קבוע. צילומים מנקודת זמן זו מנותחים, ייצור כמותי צפיפות התאים הערכות, המשמשים לבניית עקומות גדילה, המאפשר כושר צעדים כמותיים שניתן להפיק. Fitnesses תרבות אפשר להשוות לכמת ולדרג את נקודות החוזק אינטראקציה גנטיים או רגישויות סמים. ההשפעה על כושר התרבות של טיפולים כלשהם הוסיף לתוך המצע אגר (מולקולות קטנות כגון אנטיביוטיקה או תזונה) או להחיל את לוחות חיצוניתLY (UV למשל קרינה, טמפרטורה) ניתן לכמת ידי QFA. עבודה QFA מייצרת צמיחה מעריך מקביל לאלה שהושגו על ידי מדידת spectrophotometric של תרבויות נוזלי מקבילים קוראים צלחת 96-200-טוב או טוב. חשוב לציין, QFA יש תפוקה גבוהה באופן משמעותי בהשוואה לשיטות כאלה. תרבויות QFA לגדול על פני אגר מוצק ולכן הם מאוורר היטב במהלך הצמיחה ללא צורך לערבב או רועד. התפוקה QFA אינו גבוה כמו זה של מערך גנטי כלשהו סינתטי (SGA) שיטות ההקרנה 5,6. עם זאת, מאז תרבויות QFA הם בדילול בכבדות לפני מחוסן על אגר, QFA יכול ללכוד עקומות גדילה שלם יותר, לרבות מעריכי שלבי הרוויה 3. כך, למשל, עקומת גדילה תצפיות לאפשר הכפלת פעמים תרבות כדי לאמוד באופן ישיר עם דיוק גבוהה, כפי שצוין קודם לכן 1. כאן אנו מציגיםספציפית QFA הפרוטוקול מיושם על אלפי ש &#39; cerevisiae תרבויות אשר טיפל באופן אוטומטי במהלך הדגירה חיסון, והדמיה על ידי רובוטים. כל הפעולות האוטומטיות יכול להיות מוחלף על ידי ההליך, שווה ערך ידנית, עם ירידה קשור התפוקה, ויש לנו גם להציג ידנית נמוך פרוטוקול התפוקה. הכלים אותם QFA התוכנה ניתן להחיל על תמונות שנתפסו בזרימת העבודה או. יש לנו ניסיון רב ביישום QFA לתרבויות של שמרים ניצני ס cerevisiae אך אנו צופים כי QFA יהיה שימושי באותה מידה לבחינת תרבויות של שמרים ביקוע ס pombe ותרבויות חיידקים.

Watch this Scientific Journal Video about A Quantitative Fitness Analysis Workflow at JoVE.com

A Quantitative Fitness Analysis Workflow

ניתוח כמותי כושר (QFA) היא סדרה משלימה של שיטות ניסיוניות חישובית לאומדן fitnesses התרבות חיידקים. QFA מעריך את ההשפעה של מוטציות גנטיות, תרופות או טיפולים אחרים החלים על הצמיחה חיידק. ניסויים דרוג מניתוח מרוכז של תרבויות בודדות לאלפי תרבויות מקבילות יכול להיות מתוכנן.

כושר ניתוח כמותי של זרימת עבודה

Quantitative Fitness Analysis (QFA) is an experimental and computational workflow for comparing fitnesses of microbial cultures grown in parallel1,2,3,4. ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

עצב Astrocyte שותף תרבות Assay לניתוח תכולה גבוהה של neurotoxicity

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Quantitative Phosphoproteomics in Fatty Acid Stimulated Saccharomyces cerevisiae

Phosphoproteomics כמותיים חומצת שומן מגורה Saccharomyces cerevisiae</em

This protocol describes the growth and stimulation, with the fatty acid oleate, of isotopically heavy and light S. cerevisiae cells. Cells are ground ...

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-cell Imaging and Quantitative Analysis of Embryonic Epithelial Cells in Xenopus laevis

Live-תא הדמיה וניתוח כמותי של תאים אפיתל עובריים ב Xenopus laevis</em

Embryonic epithelial cells serve as an ideal model to study morphogenesis where multi-cellular tissues undergo changes in their geometry, such as changes ...

Quantitative Live Cell Fluorescence-microscopy Analysis of Fission Yeast

כמותי תא חי פלואורסצנטי, מיקרוסקופ ניתוח של שמרים ביקוע

Several microscopy techniques are available today that can detect a specific protein within the cell. During the last decade live cell imaging using ...

Quantitative Analysis of Random Migration of Cells Using Time-lapse Video Microscopy

ניתוח כמותי של הגירה אקראית של תאים באמצעות זמן לשגות מיקרוסקופית וידאו

Cell migration is a dynamic process, which is important for embryonic development, tissue repair, immune system function, and tumor invasion 1, 2. During ...

Quantitative Analysis of Autophagy using Advanced 3D Fluorescence Microscopy

ניתוח כמותי של Autophagy באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי 3D מתקדם

Prostate cancer is the leading form of malignancies among men in the U.S. While surgery carries a significant risk of impotence and incontinence, ...

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

Visualization and Analysis of mRNA Molecules Using Fluorescence In Situ Hybridization in Saccharomyces cerevisiae

הדמיה וניתוח של מולקולות ה-mRNA באמצעות הקרינה<em&gt; באתרו</em&gt; הכלאה ב<em&gt; Cerevisiae Saccharomyces</em

The Fluorescence in situ Hybridization (FISH) method allows one to detect nucleic acids in the native cellular environment. Here we provide a protocol for ...

A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

Assay עקידת התפוקה גבוה MHC II לניתוח כמותי של פפטיד אפיטופים

Biochemical assays with recombinant human MHC II molecules can provide rapid, quantitative insights into immunogenic epitope identification, deletion, or ...

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

טכניקה חדשה לניתוח כמותי של נשירת שיער בעכברים באמצעות ניתוח גווני אפור

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and ...

Complete Workflow for Analysis of Histone Post-translational Modifications Using Bottom-up Mass Spectrometry: From Histone Extraction to Data Analysis

Workflow השלם עבור ניתוח שלאחר translational שינויים היסטון שימוש מלמטה למעלה ספקטרומטריית מסה: מתוך הפקת היסטון כדי ניתוח נתונים

Nucleosomes are the smallest structural unit of chromatin, composed of 147 base pairs of DNA wrapped around an octamer of histone proteins. Histone ...