Name: preparing t cell growth factor from rat splenocytes
Uploaded: 2007-10-31T22:24:33
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes at JoVE.com

<ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> קח spleens לואיס חולדה (חולדות בין 160-200 הם הטובים ביותר). Dilacerate על קרח בצלחת פטרי המכילות PBS + אנטיביוטיקה (PBS-PS) בעזרת מסננת התא. שים בתוך שפופרת 50 מ&quot;ל. מלא עם PBS-PS. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ספין של 10 דקות ב 4 ° C עד גלולה התאים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לשטוף ?...

<ol>
	<li>Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -. M., Gola, M., Sabatier, J. -. M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+blocking+of+voltage-gated+K++channels+treats+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+inhibits+T-cell+activation.">Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation.</a> J. Immunol. 166, 936-944 (2001).</li><li>Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+blockade+of+T+lymphocyte+K++channels+ameliorates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis,+a+model+for+multiple+sclerosis.">Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis.</a> Proc. Natl. Acad. 98, 13942-13947 (2001).</li><li>Mor, F., Cohen, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+of+Lewis+rat+encephalitogenic+T+cell+lines:+T-cell-growth-factor+is+superior+to+recombinant+IL-2.">Propagation of Lewis rat encephalitogenic T cell lines: T-cell-growth-factor is superior to recombinant IL-2.</a> J. Neuroimmunol. 123, 76-82 (2002).</li></ol>

אנחנו מכינים TCGF מ splenocytes לואיס עכברוש מאז שאנחנו בקביעות להרדים חולדות נאיבי מהמאמץ הזה לקצור בסרום thymi לעורר לואיס עכברוש T שורות תאים במבחנה. TCGF זה יכול לשמש כדי לקדם את הצמיחה ואת ההישרדות של שורות תאים T מ זני עכברים אחרים. TCGF יכול גם להיות מוכנים מן זנים אחרים של חולדות.

כדי להכין מדיום תרבות להשלים את הפעולות הבאות כדי להוסיף בקבוק 500 מ&quot;ל של RPMI 1640 וסטרילי, מסנן: FCS 10%; 1 בקבוק סן ז&#39;רמן: 5 מ&quot;ל ויטמינים RPMI; 5 נתרן pyruvate מ&quot;ל, 5 מ&quot;ל שאינם חיוניים חומצות אמינו, 50 אממ בטא mercaptoethanol; 2 UG / ml Concanavalin א

preparing t cell growth factor from rat splenocytes

תחזוקה של אנטיגן ספציפי לערמונית T שורות תאים או שיבוטים בתרבות דורש הפעלת סיבובים של אנטיגן-Induced מופרדות שלבי 1,2 הרחבת התא. תוספת של אינטרלוקין 2 לתקשורת התרבות בשלב ההתרחבות נחוצה כדי למנוע מוות של תאים ו מספיק כדי לשמור לטווח קצר שורות תאים T אבל הוכח להגדיל Th1 קיטוב 3. החלפה של אינטרלוקין 2 בפקטור תא T צמיחה (TCGF) אשר מכיל תערובת של ציטוקינים הוא יעיל יותר מאשר אינטרלוקין 2 בשמירה לטווח ארוך שורות תאים T במבחנה 3. יתר על כן, TCGF יכול בקלות להיות מוכנים בכמויות גדולות במעבדה, והוא הרבה יותר זול מאשר רקומביננטי אינטרלוקין 2. כאן, אנו מראים כיצד להכין TCGF מ supernatants עכברוש splenocyte תרבות. במשך התהליך הזה, שאנחנו קוצרים spleens מ נאיבי חולדות לואיס מורדמים עבור התימוס ואיסוף הדם. אנחנו מכינים תא בודד השעיות מן spleens, lyze את כדוריות הדם האדומות של הלם אוסמוטי, ואת הזרע splenocytes במדיום תרבות. התאים מגורה עם concanavalin, mitogen כי הלא סלקטיבי מפעיל כל T לימפוציטים עכברוש, וישכנע את הייצור של ציטוקינים. Supernantant תרבות נאסף 48 שעות לאחר מכן concanavalin andexcess חייב mannoside מתיל אלפא כדי למנוע את הפעלת הקווים תא T אשר TCGF יתווספו. TCGF אז הוא סטרילי, מסונן, aliquoted, ומאוחסנים ב -20 ° C.

Watch this Scientific Journal Video about Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes at JoVE.com

Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes

אנו מתארים את הכנת גורם תא T צמיחה המשמש הרחבה של מבחנה של אנטיגן ספציפי לערמונית קווי עכברוש T לימפוציטים.

הכנת פקטור T צמיחת תאים מן Splenocytes עכברוש

Maintenance of antigen-specific T cell lines or clones in culture requires rounds of antigen-induced activation separated by phases of cell expansion 1,2. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

פקטור מצופה צמיחה השמה ביד על Explants forebrain הגבי

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

הכנת E18 נוירונים עכברוש קליפתיים עבור מידור בתוך המכשיר microfluidic

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

הצבת פקטור מצופה חרוזים צמיחה על עוברי תרנגולת בשלב מוקדם

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

תא תרבויות העצבית מ Aplysia עבור הדמיה ברזולוציה גבוהה של קונוסים צמיחה

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

פרוטוקול נוירונים culturing הסימפתטית מן הגרעינים עכברוש צוואר הרחם מעולה (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish

הדמיה חיה של שחול Cell מן האפידרמיס של דג הזברה פיתוח

Homeostatic maintenance of epithelial tissues requires the continual removal of damaged cells without disrupting barrier function.  Our studies have found ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

השתנה שמרים-Two-Hybrid System כדי לזהות חלבונים אינטראקציה עם גורם הגדילה Progranulin

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

הכנת הפרט תסיסנית ביצה צ&#39;יימברס הדמיה חיים

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Kinematic Analysis of Cell Division and Expansion: Quantifying the Cellular Basis of Growth and Sampling Developmental Zones in Zea mays Leaves

Kinematic Analysis of Cell Division and Expansion: Quantifying the Cellular Basis of Growth and Sampling Developmental Zones in Zea mays Leaves

ניתוח קינמטית של חטיבה ואת הרחבת תא: כימות הבסיס הנייד של אזורי התפתחותית צמיחת הדגימה<em&gt; Zea Mays</em&gt; מותיר

Growth analyses are often used in plant science to investigate contrasting genotypes and the effect of environmental conditions. The cellular aspect of ...

Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-&#946; Signaling

Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² Signaling

אנליזה מולקולרית של אנדותל-mesenchymal מעבר המושרה על ידי הפיכת גורם גידול-β איתות

Phenotypic plasticity of endothelial cells underlies cardiovascular system development, cardiovascular diseases, and various conditions associated with ...