Name: preparing t cell growth factor from rat splenocytes
Uploaded: 2007-10-31T22:24:33
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes at JoVE.com

<ol><li> Ta Lewis råtta mjälte (råtta mellan 160-200g är bäst). Dilacerate på is i en petriskål med PBS + antibiotika (PBS-PS) med en cell sil. Sätt i en 50 ml tub. Fyll med PBS-PS. </li><li> Spin i 10 min vid 4 ° C till pellets cellerna. </li><li> Tvätta cellerna två gånger. </li><li> Återsuspendera pelleten i NH 4 Cl 0,15 Mkr (5 ml per mjälte). Blanda försiktigt och kontinuerligt med en pipett i 3 min på is för att lysera erytrocyterna. Fyll röret med mediet. </li><li> Spin i 10 min vid 4 ° C til...

<ol>
	<li>Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -. M., Gola, M., Sabatier, J. -. M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+blocking+of+voltage-gated+K++channels+treats+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+inhibits+T-cell+activation.">Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation.</a> J. Immunol. 166, 936-944 (2001).</li><li>Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+blockade+of+T+lymphocyte+K++channels+ameliorates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis,+a+model+for+multiple+sclerosis.">Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis.</a> Proc. Natl. Acad. 98, 13942-13947 (2001).</li><li>Mor, F., Cohen, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+of+Lewis+rat+encephalitogenic+T+cell+lines:+T-cell-growth-factor+is+superior+to+recombinant+IL-2.">Propagation of Lewis rat encephalitogenic T cell lines: T-cell-growth-factor is superior to recombinant IL-2.</a> J. Neuroimmunol. 123, 76-82 (2002).</li></ol>

Vi förbereder TCGF från Lewis råtta splenocytes eftersom vi regelbundet euthanize naiva råttor från denna stam till skörd serum och Thymi att stimulera Lewis råtta T-cellinjer in vitro. Detta TCGF kan användas för att främja tillväxt och överlevnad av T-cellinjer från andra råtta stammar. TCGF kan också framställas av andra stammar av råttor.

För att förbereda kompletta odlingsmediet lägga till följande till en 500 ml flaska RPMI 1640 och steril-filter: 10% FCS, 1 flaska med PSG, 5 ml RPMI vitaminer, 5 ml natriumklorid pyruvat, 5 ml icke-essentiella aminosyror, 50 um beta-merkaptoetanol, 2 ug / ml Concanavalin A.

preparing t cell growth factor from rat splenocytes

Underhåll av antigen-specifika linjer T-cell eller kloner i kultur kräver rundor av antigen-inducerad aktivering separerade med faser av cellens tillväxt 1,2. Tillägg av interleukin 2 till kultur media under expansionsfasen är nödvändiga för att förhindra celldöd och räcker för att hålla korta rader T-cell, men har visat sig öka Th1 polarisering 3. Byte av interleukin 2 av T cell growth factor (TCGF) som innehåller en blandning av cytokiner är mer effektivt än interleukin 2 för att bibehålla långsiktiga linjer T-cell in vitro 3. Dessutom kan TCGF enkelt beredas i stora mängder i laboratorium och är mycket billigare än rekombinant interleukin 2. Här visar vi hur man förbereder TCGF från råtta splenocyte kultur supernatanterna. För detta förfarande, skördar vi mjälte från naiva Lewis råttor avlivas för bräss och blod samling. Vi förbereder encelliga suspensioner från mjälte, Lyze de röda blodkropparna genom osmotisk chock, och utsäde till splenocytes i odlingsmedium. Cellerna stimuleras med concanavalin A, en mitogen att icke-selektivt alla lymfocyter råtta T aktiveras, förmå produktionen av cytokiner. Kulturen supernantant samlas 48 timmar senare andexcess concanavalin A är bundet till alfa-metyl mannoside att förhindra den från att aktivera T-cellinjer som TCGF tillkommer. Den TCGF är då steril-filtreras, alikvoteras och förvaras vid -20 ° C.

Watch this Scientific Journal Video about Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes at JoVE.com

Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes

Vi beskriver förberedelserna av T-cell tillväxtfaktor som används för in vitro-expansionen av antigen-specifika råtta T-lymfocyter linjer.

Förbereda T Factor Cell Tillväxt från Rat Splenocytes

Maintenance of antigen-specific T cell lines or clones in culture requires rounds of antigen-induced activation separated by phases of cell expansion 1,2. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

Growth Factor-Coated Bead Placering på ryggfenan framhjärnan explants

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

Förbereda E18 kortikala Råtta Nervceller för uppdelning i en mikroflödessystem enhet

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Placering Growth Factor-Coated Pärlor på tidiga embryon Stage Kyckling

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronal cellkulturer från Aplysia för högupplöst avbildning av tillväxt Kottar

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

Protokoll för odling sympatiska nervceller från Rat Superior Cervikal Ganglia (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish

Bildproduktion för cell Extrudering från överhuden av utvecklingsländer Zebrafish

Homeostatic maintenance of epithelial tissues requires the continual removal of damaged cells without disrupting barrier function.  Our studies have found ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

Modifierad jäst-Two-Hybrid System för att identifiera proteiner Interagera med Growth Factor Progranulin

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Framställning av individuella Drosophila Egg Chambers för Live Imaging

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Kinematic Analysis of Cell Division and Expansion: Quantifying the Cellular Basis of Growth and Sampling Developmental Zones in Zea mays Leaves

Kinematic Analysis of Cell Division and Expansion: Quantifying the Cellular Basis of Growth and Sampling Developmental Zones in Zea mays Leaves

Kinematisk analys av celldelning och Expansion: kvantifiera Cellular grundval av tillväxt och provtagning Develop zoner i<em&gt; Zea mays</em&gt; blad

Growth analyses are often used in plant science to investigate contrasting genotypes and the effect of environmental conditions. The cellular aspect of ...

Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-&#946; Signaling

Molecular Analysis of Endothelial-mesenchymal Transition Induced by Transforming Growth Factor-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² Signaling

Molekylär analys av Endothelial-mesenkymala övergången induceras av Transforming Growth Factor-β signalering

Phenotypic plasticity of endothelial cells underlies cardiovascular system development, cardiovascular diseases, and various conditions associated with ...