Name: intraductal injection of lps as a mouse model of mastitis: signaling visualized via an nf-&kappa;b reporter transgenic
Uploaded: 2012-09-04T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-ÃŽÂºB Reporter Transgenic at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door NIH subsidie ​​CA113734 toegekend aan F Yull en het Department of Veterans Affairs (TS Blackwell).

Alle dierproeven werden goedgekeurd door de Vanderbilt University Institutional Animal Care en gebruik Comite. 1. Voorbereiden transgene muizen <ol><li> Vrouwelijke muizen positief voor het NGL (N F-kB-G FP-L uciferase) reporter transgen (hiervoor beschreven 1) worden gebruikt voor deze procedure. Wanneer vrouwtjes zijn ten minste 6 weken oud, paren ze met een FVB wild type man. Harem breeding kan worden gebruikt (tot 4 vrouwtjes in een kooi met 1 man). (Let op:...

<ol>
	<li>Everhart, M. B., Han, W., Sherrill, T. P., Arutiunov, M., Polosukhin, V. V., Burke, J. R., Sadikot, R. T., Christman, J. W., Yull, F. E., Blackwell, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duration+and+intensity+of+NF-&#954;B+activity+determine+the+severity+of+endotoxin-induced+acute+lung+injury.">Duration and intensity of NF-&#954;B activity determine the severity of endotoxin-induced acute lung injury.</a> The Journal of Immunology. 176, 4995-5005 (2006).</li><li>Notebaert, S., Carlsen, H., Janssen, D., Vandenabeele, P., Blomhoff, R., Meyer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+NF-&#206;&#186;B+activity+during+Escherichia+coli-induced+mammary+gland+infection.">In vivo imaging of NF-&#206;&#186;B activity during Escherichia coli-induced mammary gland infection.</a> Cellular Microbiology. 10, 1249-1258 (2008).</li><li>Elazar, S., Gonen, E., Livneh-Kol, A., Rosenshine, I., Shpigel, N. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+recruitment+in+endotoxin-induced+murine+mastitis+is+strictly+dependent+on+mammary+alveolar+macrophages.">Neutrophil recruitment in endotoxin-induced murine mastitis is strictly dependent on mammary alveolar macrophages.</a> Veterinary Research. 41, 10 (2010).</li><li>Connelly, L., Barham, W., Pigg, R., Sait-Jean, L., Sherrill, T., Cheng, D. S., Chodosh, L. A., Blackwell, T. S., Yull, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+nuclear+factor+kappaB+in+mammary+epithelium+promotes+milk+loss+during+mammary+development+and+infection.">Activation of nuclear factor kappaB in mammary epithelium promotes milk loss during mammary development and infection.</a> J. Cell. Physiol. 222, 73-81 (2010).</li><li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injections+in+mice.">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animal. 40, 155-160 (2011).</li><li>Plante, I., Stewart, M. K., Laird, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+mammary+gland+development+and+function+in+mouse+models.">Evaluation of mammary gland development and function in mouse models.</a> J. Vis. Exp. (21), e2828 (2011).</li><li>Behbod, F., Kittrell, F. S., LaMarca, H., Edwards, D., Kerbawy, S., Heestand, J. C., Young, E., Mukhopadhyay, P., Yeh, H., Allred, D. C., Hu, M., Polyak, K., Rosen, J. M., Medina, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intraductal+human-in-mouse+transplantation+model+mimics+the+subtypes+of+ductal+carcinoma+in+situ.">An intraductal human-in-mouse transplantation model mimics the subtypes of ductal carcinoma in situ.</a> Breast Cancer Research. 11, R66 (2009).</li><li>Zheng, J., Watson, A. D., Kerr, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+expression+analysis+of+lipopolysaccharide-induced+mastitis+in+a+mouse+model.">Genome-wide expression analysis of lipopolysaccharide-induced mastitis in a mouse model.</a> Infection and Immunity. 74, 1907-1915 (2006).</li><li>Nguyen, D., Beeman, N., Lewis, M., Schaack, J., Neville, M. C., Ip, M. M., Asch, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Intraductal Injection into the Mouse Mammary Gland. Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer Research. , 259-270 (2000).</li><li>Lee, J. W., Paape, M. J., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+bovine+soluble+CD14+reduces+severity+of+experimental+Escherichia+coli+mastitis+in+mice.">Recombinant bovine soluble CD14 reduces severity of experimental Escherichia coli mastitis in mice.</a> Veterinary Research. 34, 307-316 (2003).</li><li>Elazar, S., Gonen, E., Livneh-Kol, A., Rosenshine, I., Shpigel, N. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+neutrophils+but+not+mammary+alveolar+macrophages+in+a+murine+model+of+acute+Escherichia+coli+mastitis.">Essential role of neutrophils but not mammary alveolar macrophages in a murine model of acute Escherichia coli mastitis.</a> Veterinary Research. 41, 53 (2010).</li><li>Bannerman, D. D., Paape, M. J., Hare, W. R., Sohn, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+levels+of+LPS-binding+protein+in+bovine+blood+and+milk+following+bacterial+lipopolysaccharide+challenge.">Increased levels of LPS-binding protein in bovine blood and milk following bacterial lipopolysaccharide challenge.</a> Journal of Dairy Science. 86, 3128-3137 (2003).</li><li>Gonen, E., Vallon-Eberhard, A., Elazar, S., Harmelin, A., Brenner, O., Rosenshine, I., Jung, S., Shpigel, N. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+4+is+needed+to+restrict+the+invasion+of+Escherichia+coli+P4+into+mammary+gland+epithelial+cells+in+a+murine+model+of+acute+mastitis.">Toll-like receptor 4 is needed to restrict the invasion of Escherichia coli P4 into mammary gland epithelial cells in a murine model of acute mastitis.</a> Cellular Microbiology. 9, 2826-2838 (2007).</li><li>Notebaert, S., Demon, D., Vanden Berghe, ., Vandenabeele, T., P, ., Meyer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+mediators+in+Escherichia+coli-induced+mastitis+in+mice.">Inflammatory mediators in Escherichia coli-induced mastitis in mice.</a> Comparative Immunology, Microbiology, and Infectious Diseases. 31, 551-565 (2008).</li><li>Osterman, K. L., Rahm, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactation+mastitis:+bacterial+cultivation+of+breast+milk+symptoms,+treatment,+and+outcome.">Lactation mastitis: bacterial cultivation of breast milk symptoms, treatment, and outcome.</a> Journal of Human Lactation. 16, 297-302 (2000).</li><li>Sordillo, L. M., Streicher, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+Gland+Immunity+and+Mastitis+Susceptibility.">Mammary Gland Immunity and Mastitis Susceptibility.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 7, 135-146 (2002).</li><li>Blackwell, T. S., Yull, F. E., Chen, C. L., Venkatakrishnan, A., Blackwell, T. R., Hicks, D. J., Lancaster, L. H., Christman, J. W., Kerr, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+genetically+altered+mice+to+investigate+the+role+of+nuclear+factor-kappa+B+activation+and+cytokine+gene+expression+in+sepsis-induced+ARDS.">Use of genetically altered mice to investigate the role of nuclear factor-kappa B activation and cytokine gene expression in sepsis-induced ARDS.</a> Chest. 116, 73S-74S (1999).</li><li>Stathopoulos, G. T., Sherrill, T. P., Cheng, D. S., Scoggins, R. M., Han, W., Polosukhin, V. V., Connelly, L., Yull, F. E., Fingleton, B., Blackwell, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+NF-kappaB+activation+promotes+urethane-induced+lung+carcinogenesis.">Epithelial NF-kappaB activation promotes urethane-induced lung carcinogenesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, 18514-18519 (2007).</li><li>Blackwell, T. S., Hipps, A. N., Yamamoto, Y., Han, W., Barham, W. J., Ostrowski, M. C., Yull, F. E., Prince, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NF-&#954;B+signaling+in+fetal+lung+macrophages+disrupts+airway+morphogenesis.">NF-&#954;B signaling in fetal lung macrophages disrupts airway morphogenesis.</a> The Journal of Immunology. 187, 2740-2747 (2011).</li><li>Chiang, S. H., Bazuine, M., Lumeng, C. N., Geletka, L. M., Mowers, J., White, N. M., Ma, J. T., Zhou, J., Qi, N., Westscott, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+protein+kinase+IKKepsilon+regulates+energy+balance+in+obese+mice.">The protein kinase IKKepsilon regulates energy balance in obese mice.</a> Cell. 138, 961-975 (2009).</li><li>Singh, M. V., Kapoun, A., Higgins, L., Kutschke, W., Thurman, J. M., Zhang, R., Singh, M., Yang, J., Guan, X., Lowe, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2+/calmodulin-dependent+kinase+II+triggers+cell+membrane+injury+by+inducing+complement+factor+B+gene+expression+in+the+mouse+heart.">Ca2+/calmodulin-dependent kinase II triggers cell membrane injury by inducing complement factor B gene expression in the mouse heart.</a> The Journal of Clinical Investigation. 119, 986-996 (2009).</li></ol>

Hier hebben we een transgene NF-kB reporter muis en een geoptimaliseerde injectie techniek om model mastitis gebruiken, ontsteking van het borstweefsel meestal veroorzaakt door een bacteriële infectie. De belangrijkste stap in deze procedure is de intraductal injectie zelf. In de praktijk is het meestal duidelijk of de intraductal injectie geslaagd is. De injectie van de middelen (LPS of PBS) moeten voelen vloeistof en er moeten weinig tot geen weerstand de spuit leeg is. De meest voorkomen...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Lipopolysaccharide van Escherichia coli (LPS) </td><td> Sigma </td><td> L 2880 </td><td> serotype 055: B5 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Mediatech, Inc </td><td> 46-013 CM- </td><td></td></tr><tr><td> 31 Gauge insulinespuit </td><td> Becton Dickinson </td><td> 328438 </td><td> Korte naald </td></tr><tr><td> Tang </td><td> Wereld Precisie-instrumenten </td><td> 15908 </td><td></td></tr><tr><td> Ontleden scope </td><td> Leica </td><td> M3Z </td><td></td></tr><tr><td> Terrell Isofluraan, USP </td><td> MINRAD INC voor Rx Elite </td><td> NDC 66794-011-25 </td><td></td></tr><tr><td> IVIS 200 imaging systeem &lt;/ Td&gt; <td> Caliper (voorheen Xenogen) </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Spuit voor luciferine injectie </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309597 </td><td> 1cc; 26G5 / 8 </td></tr><tr><td> D-Luciferin Firefly, natriumzout monohydraat (Luciferin substraat) </td><td> Biosynth Scheikunde en Biologie </td><td> L-8240 </td><td> Verdun tot 10 mg / ml </td></tr></tbody></table>

intraductal injection of lps as a mouse model of mastitis: signaling visualized via an nf-&kappa;b reporter transgenic

Diermodellen van menselijke ziekte nodig zijn strikt bestuderen stadia van ziekteprogressie en geassocieerde mechanismen en uiteindelijk als pre-klinische modellen interventies te testen. In deze methoden beschrijven we een techniek waarbij lipopolysaccharide (LPS) wordt in de zogende muis uier geïnjecteerd via de tepel, effectief modelleren mastitis, of ontsteking van de klier. Deze gesimuleerde infectie resulteert in verhoogde nucleaire factor kappa B (NF-kB) signalering, zoals gevisualiseerd door bioluminescent afbeelding van een NF-KB luciferase reporter muis 1. Ons uiteindelijke doel bij de ontwikkeling van deze methoden was om de ontsteking geassocieerd met mastitis bij de lacterende klier, die vaak ook roodheid, zwelling, en het immuunsysteem cel infiltratie 2,3 bestuderen. Daarom waren we ons ervan bewust dat incisie of elk type verwonding van de huid, de tepel of de klier om de LPS zou introducerenniet worden gebruikt in onze werkwijze, aangezien de benadering waarschijnlijk de uitgelezen verwarren van ontsteking. We hebben ook gewenst een straight-forward methode waarvoor geen speciaal gemaakt handgetekende pipetten of het gebruik van micromanipulators om deze gespecialiseerde tools zijn plaats te houden. Zo hebben we vastgesteld dat een commercieel verkrijgbare insulinespuit gebruiken en de agent injecteren in de borstklier kanaal van een intact tepel. Deze methode is succesvol en konden we de ontsteking die door LPS injectie bestuderen zonder enig extra effect bedekt door het proces van injectie. Daarnaast is deze methode ook gebruik gemaakt van een NF-KB luciferase reporter transgene muis en bioluminescente beeldtechnologie om visueel en kwantitatief tonen toegenomen NF-kB signalering in de LPS-geïnjecteerde klier 4. Deze methoden zijn van belang voor onderzoekers van de vele disciplines die aan modelziekte wensen binnen de zogende borstklier, als uiteindelijk de techniekhier beschreven kan worden gebruikt voor injectie van een aantal stoffen, en is niet beperkt tot alleen LPS.

Watch this Scientific Journal Video about Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-ÃŽÂºB Reporter Transgenic at JoVE.com

Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-ÃƒÅ½Ã‚ÂºB Reporter Transgenic

Hier beschreven is een techniek waarbij lipopolysaccharide wordt in de zogende muis uier geïnjecteerd via de tepel mastitis simuleren, een aandoening meestal veroorzaakt door bacteriële infectie. Lipopolysaccharide injectie tot verhoogde nucleaire factor kappa B (NF-kB) signalering, gevisualiseerd door bioluminescent afbeelding van een NF-KB luciferase reporter muis.

Intraductale Injectie van LPS als een muismodel van Mastitis: Signalering gevisualiseerd via een NF-KB Reporter Transgene

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&kappa;B Reporter Transgenic

Mouse Bladder Wall Injection

Muis blaaswand Injection

Mouse bladder wall injection is a useful technique to orthotopically study bladder phenomena, including stem cell, smooth muscle, and cancer biology. ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Met behulp van kwantitatieve real-time PCR voor donorcel Engraftment bepalen in een concurrerende Murine beenmergtransplantatie Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxische Stimulatie van Hersenen Microslices als<em&gt; In vitro</em&gt; Model van een beroerte

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

Een mogelijke zebravis model van PKD: Knockdown van<em&gt; Wnt5a</em&gt; Oorzaken Cysten in zebravis Nieren

Polycystic kidney disease (PKD) is one of the most common causes of end-stage kidney disease, a devastating disease for which there is no cure. The ...

Development of an Alpha-synuclein Based Rat Model for Parkinson's Disease via Stereotactic Injection of a Recombinant Adeno-associated Viral Vector

Ontwikkeling van een Alpha-synucleïne Based ratmodel van de ziekte van Parkinson via stereotactische injectie van een recombinant adeno-geassocieerde virale vector

In order to study the molecular pathways of Parkinson&#39;s disease (PD) and to develop novel therapeutic strategies, scientific investigators rely on ...

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Inductie en Micro-CT beeldvorming van cerebrale Cavernous misvormingen in Mouse Model

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

Punctie-geïnduceerde Iris Neovascularization als een muismodel van Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

Oleic Acid-Injection in Pigs As a Model for Acute Respiratory Distress Syndrome

Oliezuur-injectie bij varkens als een Model voor Acute Respiratory Distress Syndrome

The acute respiratory distress syndrome is a relevant intensive care disease with an incidence ranging between 2.2% and 19% of intensive care unit ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Isometrische Contractility meting van de muis mesenterische slagader met behulp van draad Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Precision-Cut Liver Slices as an Ex Vivo Model of Liver Biology

Murine Precision-Cut Lever Plakjes als een Ex Vivo Model van leverbiologie

Understanding the mechanisms of liver injury, hepatic fibrosis, and cirrhosis that underlie chronic liver diseases (i.e., viral hepatitis, non-alcoholic ...