Name: intraductal injection of lps as a mouse model of mastitis: signaling visualized via an nf-&kappa;b reporter transgenic
Uploaded: 2012-09-04T12:00:00
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この作品は、F共に葬り去ると退役軍人局（TSブラックウェル）に授与NIHの助成金CA113734によって賄われていた。

全ての動物実験は、バンダービルト大学機関動物実験委員会によって承認された。 1。トランスジェニックマウスを準備<ol><li> NGL（N F-κBG FP-L uciferase）レポーター遺伝子（以前に1に記載）陽性雌マウスは、この手順のために使用されます。女性は年齢の少なくとも6週間である場合、FVB野生型の雄でそれらを交配。繁殖は（1男性とケージ内の最大4匹...

<ol>
	<li>Everhart, M. B., Han, W., Sherrill, T. P., Arutiunov, M., Polosukhin, V. V., Burke, J. R., Sadikot, R. T., Christman, J. W., Yull, F. E., Blackwell, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duration+and+intensity+of+NF-&#954;B+activity+determine+the+severity+of+endotoxin-induced+acute+lung+injury.">Duration and intensity of NF-&#954;B activity determine the severity of endotoxin-induced acute lung injury.</a> The Journal of Immunology. 176, 4995-5005 (2006).</li><li>Notebaert, S., Carlsen, H., Janssen, D., Vandenabeele, P., Blomhoff, R., Meyer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+NF-&#206;&#186;B+activity+during+Escherichia+coli-induced+mammary+gland+infection.">In vivo imaging of NF-&#206;&#186;B activity during Escherichia coli-induced mammary gland infection.</a> Cellular Microbiology. 10, 1249-1258 (2008).</li><li>Elazar, S., Gonen, E., Livneh-Kol, A., Rosenshine, I., Shpigel, N. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil+recruitment+in+endotoxin-induced+murine+mastitis+is+strictly+dependent+on+mammary+alveolar+macrophages.">Neutrophil recruitment in endotoxin-induced murine mastitis is strictly dependent on mammary alveolar macrophages.</a> Veterinary Research. 41, 10 (2010).</li><li>Connelly, L., Barham, W., Pigg, R., Sait-Jean, L., Sherrill, T., Cheng, D. S., Chodosh, L. A., Blackwell, T. S., Yull, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+nuclear+factor+kappaB+in+mammary+epithelium+promotes+milk+loss+during+mammary+development+and+infection.">Activation of nuclear factor kappaB in mammary epithelium promotes milk loss during mammary development and infection.</a> J. Cell. Physiol. 222, 73-81 (2010).</li><li>Yardeni, T., Eckhaus, M., Morris, H. D., Huizing, M., Hoogstraten-Miller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retro-orbital+injections+in+mice.">Retro-orbital injections in mice.</a> Lab Animal. 40, 155-160 (2011).</li><li>Plante, I., Stewart, M. K., Laird, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+mammary+gland+development+and+function+in+mouse+models.">Evaluation of mammary gland development and function in mouse models.</a> J. Vis. Exp. (21), e2828 (2011).</li><li>Behbod, F., Kittrell, F. S., LaMarca, H., Edwards, D., Kerbawy, S., Heestand, J. C., Young, E., Mukhopadhyay, P., Yeh, H., Allred, D. C., Hu, M., Polyak, K., Rosen, J. M., Medina, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intraductal+human-in-mouse+transplantation+model+mimics+the+subtypes+of+ductal+carcinoma+in+situ.">An intraductal human-in-mouse transplantation model mimics the subtypes of ductal carcinoma in situ.</a> Breast Cancer Research. 11, R66 (2009).</li><li>Zheng, J., Watson, A. D., Kerr, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+expression+analysis+of+lipopolysaccharide-induced+mastitis+in+a+mouse+model.">Genome-wide expression analysis of lipopolysaccharide-induced mastitis in a mouse model.</a> Infection and Immunity. 74, 1907-1915 (2006).</li><li>Nguyen, D., Beeman, N., Lewis, M., Schaack, J., Neville, M. C., Ip, M. M., Asch, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Intraductal Injection into the Mouse Mammary Gland. Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer Research. , 259-270 (2000).</li><li>Lee, J. W., Paape, M. J., Zhao, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+bovine+soluble+CD14+reduces+severity+of+experimental+Escherichia+coli+mastitis+in+mice.">Recombinant bovine soluble CD14 reduces severity of experimental Escherichia coli mastitis in mice.</a> Veterinary Research. 34, 307-316 (2003).</li><li>Elazar, S., Gonen, E., Livneh-Kol, A., Rosenshine, I., Shpigel, N. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Essential+role+of+neutrophils+but+not+mammary+alveolar+macrophages+in+a+murine+model+of+acute+Escherichia+coli+mastitis.">Essential role of neutrophils but not mammary alveolar macrophages in a murine model of acute Escherichia coli mastitis.</a> Veterinary Research. 41, 53 (2010).</li><li>Bannerman, D. D., Paape, M. J., Hare, W. R., Sohn, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+levels+of+LPS-binding+protein+in+bovine+blood+and+milk+following+bacterial+lipopolysaccharide+challenge.">Increased levels of LPS-binding protein in bovine blood and milk following bacterial lipopolysaccharide challenge.</a> Journal of Dairy Science. 86, 3128-3137 (2003).</li><li>Gonen, E., Vallon-Eberhard, A., Elazar, S., Harmelin, A., Brenner, O., Rosenshine, I., Jung, S., Shpigel, N. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+4+is+needed+to+restrict+the+invasion+of+Escherichia+coli+P4+into+mammary+gland+epithelial+cells+in+a+murine+model+of+acute+mastitis.">Toll-like receptor 4 is needed to restrict the invasion of Escherichia coli P4 into mammary gland epithelial cells in a murine model of acute mastitis.</a> Cellular Microbiology. 9, 2826-2838 (2007).</li><li>Notebaert, S., Demon, D., Vanden Berghe, ., Vandenabeele, T., P, ., Meyer, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+mediators+in+Escherichia+coli-induced+mastitis+in+mice.">Inflammatory mediators in Escherichia coli-induced mastitis in mice.</a> Comparative Immunology, Microbiology, and Infectious Diseases. 31, 551-565 (2008).</li><li>Osterman, K. L., Rahm, V. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactation+mastitis:+bacterial+cultivation+of+breast+milk+symptoms,+treatment,+and+outcome.">Lactation mastitis: bacterial cultivation of breast milk symptoms, treatment, and outcome.</a> Journal of Human Lactation. 16, 297-302 (2000).</li><li>Sordillo, L. M., Streicher, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+Gland+Immunity+and+Mastitis+Susceptibility.">Mammary Gland Immunity and Mastitis Susceptibility.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 7, 135-146 (2002).</li><li>Blackwell, T. S., Yull, F. E., Chen, C. L., Venkatakrishnan, A., Blackwell, T. R., Hicks, D. J., Lancaster, L. H., Christman, J. W., Kerr, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+genetically+altered+mice+to+investigate+the+role+of+nuclear+factor-kappa+B+activation+and+cytokine+gene+expression+in+sepsis-induced+ARDS.">Use of genetically altered mice to investigate the role of nuclear factor-kappa B activation and cytokine gene expression in sepsis-induced ARDS.</a> Chest. 116, 73S-74S (1999).</li><li>Stathopoulos, G. T., Sherrill, T. P., Cheng, D. S., Scoggins, R. M., Han, W., Polosukhin, V. V., Connelly, L., Yull, F. E., Fingleton, B., Blackwell, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+NF-kappaB+activation+promotes+urethane-induced+lung+carcinogenesis.">Epithelial NF-kappaB activation promotes urethane-induced lung carcinogenesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 104, 18514-18519 (2007).</li><li>Blackwell, T. S., Hipps, A. N., Yamamoto, Y., Han, W., Barham, W. J., Ostrowski, M. C., Yull, F. E., Prince, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NF-&#954;B+signaling+in+fetal+lung+macrophages+disrupts+airway+morphogenesis.">NF-&#954;B signaling in fetal lung macrophages disrupts airway morphogenesis.</a> The Journal of Immunology. 187, 2740-2747 (2011).</li><li>Chiang, S. H., Bazuine, M., Lumeng, C. N., Geletka, L. M., Mowers, J., White, N. M., Ma, J. T., Zhou, J., Qi, N., Westscott, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+protein+kinase+IKKepsilon+regulates+energy+balance+in+obese+mice.">The protein kinase IKKepsilon regulates energy balance in obese mice.</a> Cell. 138, 961-975 (2009).</li><li>Singh, M. V., Kapoun, A., Higgins, L., Kutschke, W., Thurman, J. M., Zhang, R., Singh, M., Yang, J., Guan, X., Lowe, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2+/calmodulin-dependent+kinase+II+triggers+cell+membrane+injury+by+inducing+complement+factor+B+gene+expression+in+the+mouse+heart.">Ca2+/calmodulin-dependent kinase II triggers cell membrane injury by inducing complement factor B gene expression in the mouse heart.</a> The Journal of Clinical Investigation. 119, 986-996 (2009).</li></ol>

ここでは、トランスジェニック、NF-κBレポーターマウスとモデル乳腺炎に最適化された注入技術を利用し、乳房組織の炎症は、最も一般的に細菌感染によって引き起こされる。この手順の中で最も重要なステップは、管内注射そのものです。 実際には、膵管内注入が成功したかどうか通常は明らかである。薬剤の注入（LPSまたはPBS）は、流体に感じるはずと注射器が空?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td> 大腸菌由来のリポ多糖 （LPS） </td><td>シグマ</td><td> L 2880 </td><td> 055血清型：B5 </td></tr><tr><td> PBS </td><td>メディアテック株式会社</td><td> 46から013-CM </td><td></td></tr><tr><td> 31ゲージインスリン注射器</td><td>ベクトン·ディッキンソン</td><td> 328438 </td><td>短い針</td></tr><tr><td>鉗子</td><td>ワールド·精密機器</td><td> 15908 </td><td></td></tr><tr><td>解剖スコープ</td><td>ライカ</td><td> M3Z </td><td></td></tr><tr><td>テレルイソフルラン、USP </td><td> RxのエリートのためにMINRAD INC。 </td><td> NDC 66794-011-25 </td><td></td></tr><tr><td> IVIS 200イメージングシステム&lt;/ TD&gt; <td>キャリパー（旧Xenogen） </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td>ルシフェリン注射用シリンジ</td><td>ベクトン·ディッキンソン</td><td> 309597 </td><td> 1cc; 26G5 / 8 </td></tr><tr><td> D-ルシフェリンホタル、ナトリウム塩一水和物 （ルシフェリン基質） </td><td> Biosynth化学と生物学</td><td> L-8240 </td><td> 10 mg / mlに希釈し</td></tr></tbody></table>

intraductal injection of lps as a mouse model of mastitis: signaling visualized via an nf-&kappa;b reporter transgenic

前臨床モデルでは介入をテストするようなヒト疾患の動物モデルは、究極的には厳密に病気の進行と関連機構のステージを勉強するために必要である、と。これらの方法では、リポ多糖が（LPS）は腺の乳頭、効果的にモデリング乳腺炎、または炎症を介して授乳マウス乳腺に注入する手法を説明します。増加核因子κB（NF-κB）シグナル伝達において、このシミュレートされた感染症の結果は、NF-κBルシフェラーゼレポーターマウス1の生物発光イメージングを通して可視化した。 これらの方法を開発する上で私たちの究極の目標は、しばしば赤みを含む乳腺における乳腺炎、腫れ、免疫細胞浸潤2,3に関連する炎症を勉強することでした。そこで我々は、LPSを切開または皮膚損傷の任意のタイプ、ニップル、またはグランドを導入するために、と痛感でしたでしたアプローチは、おそらく炎症の読み出しを混同するから我々の方法で利用することはありません。我々はまた、特別に作られた手描きのピペットまたは代わりにこれらの特殊なツールを保持するために、マイクロマニピュレーターを使用する必要はありませんでしたストレートフォワード方式を希望する。従って、我々は市販のインスリン注射器を使用するとそのまま乳首の乳管に薬剤を注入することを決定した。この方法は成功したと私たちは注射のプロセスによってオーバーレイの追加効果なしLPS注射に関連する炎症を勉強することができました。さらに、この方法はまた、視覚的かつ定量的NF-κB活性は、LPSを注射した腺4内シグナル伝達の増加表示し、NF-κBルシフェラーゼレポータートランスジェニックマウスおよび生物発光イメージング技術を利用した。 これらの方法は、最終的に、授乳中の乳腺内の疾患をモデル化したい多くの分野の研究者が関心を持つ技術であるここで説明する多くの物質を注入するために利用することができ、LPSのみに限定されない。

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Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-ÃƒÅ½Ã‚ÂºB Reporter Transgenic

ここで説明する乳腺炎をシミュレートするために、ニップルを介して、授乳中のマウス乳腺に注入されるリポ多糖体で技術は、一般的に細菌感染によって引き起こされる症状である。増加した核因子κB（NF-κB）シグナル伝達におけるリポ多糖注射の結果は、NF-κBルシフェラーゼレポーターマウスの生物発光イメージングを通して可視化した。

乳腺炎のモデルマウスとしてのLPS管内注入：シグナリングは、NF-κBレポータートランスジェニックを介して可視化

Animal models of human disease are necessary in order to rigorously study stages of disease progression and associated mechanisms, and ultimately, as ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Intraductal Injection of LPS as a Mouse Model of Mastitis: Signaling Visualized via an NF-&kappa;B Reporter Transgenic

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