Name: collection protocol for human pancreas
Uploaded: 2012-05-23T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Collection Protocol for Human Pancreas at JoVE.com

De auteurs danken de donateurs de familie en de Organ Procurement Organisaties die betrokken zijn bij dit onderzoek en Maria Martino en Irina Kusmartseva voor hun deskundige hulp. Dit werk werd gefinancierd door de Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA) ter ondersteuning van het netwerk voor Pancreatic Organ Donors met diabetes.

1. Set-up <ol><li> Label cassettes voor paraffine blokken handmatig met een potlood, of automatisch met een cassette printer. Neem de donor identifier (CaseID), monster type, aliquot-nummer, en eventuele aanvullende unieke identificatie (zaak werkblad, <a href="http://jove.com/files/ftp_upload/4039/4039appendix1.doc" target="_blank">bijlage 1</a> ). </li><li> Label oktober mallen als voor cassettes met een permanent marker. Knip 5-10 cm rechthoeken van aluminium folie. </li><li> Print of handmatig label met permanente...

<ol>
	<li>Brissova, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+human+pancreatic+islet+architecture+and+composition+by+laser+scanning+confocal+microscopy.">Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy.</a> J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).</li><li>Rahier, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pancreatic+polypeptide+cells+in+the+human+pancreas:+the+effects+of+age+and+diabetes.">The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).</li><li>Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+reconstruction+of+the+ventral+and+dorsal+pancreas:+a+new+insight+into+anatomy+and+embryonic+development.">Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development.</a> J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).</li><li>Wittingen, J., Frey, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Islet+concentration+in+the+head,+body,+tail+and+uncinate+process+of+the+pancreas.">Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas.</a> Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).</li><li>Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+composition+of+the+human+diabetic+pancreas.">Cellular composition of the human diabetic pancreas.</a> Diabetologia. 24, 366-371 (1983).</li><li>Vaught, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+NCI+perspective+on+creating+sustainable+biospecimen+resources.">An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources.</a> J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).</li><li>Gianani, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+results+of+screening+of+nondiabetic+organ+donors+for+expression+of+islet+autoantibodies.">Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies.</a> J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).</li><li>Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hy&#246;ty, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collecting+high-quality+pancreatic+tissue+for+experimental+study+from+organ+donors+with+signs+of+&#946;-cell+autoimmunity.">Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of &#946;-cell autoimmunity.</a> Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).</li><li>In't Veld, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+insulitis+in+adult+autoantibody-positive+organ+donors.">Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors.</a> Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).</li><li>T&#246;ns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+human+pancreata+in+perspective+of+the+isolation+of+the+islets+of+langerhans.">Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans.</a> Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).</li></ol>

Het doel van deze procedure is om een ​​standaard alvleesklier verwerking die kunnen worden geharmoniseerd over meerdere inzamelpunten dus definiëren en vergelijkingen van de resultaten verkregen door verschillende groepen mogelijk te maken. De dissectie methode is gebaseerd op standaard chirurgische pathologie praktijken met extra stappen voor annotatie van de grote pancreas regio&#39;s, gevolgd door de intra-regionale onderverdelingen. Standaardisatie van biospecimen verwerkingsmethoden is nodig om collectie van ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Dissection instrumenten, waaronder de scalpels met 22 messen </td><td> Diverse </td><td> Diverse </td><td></td></tr><tr><td> Centrifugeerbuizen (15 en 50 ml) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 05-539-5, 430828 </td><td> Steriel </td></tr><tr><td> Cryotubes (1,8 ml) </td><td> VWR Noord-Amerika </td><td> 89004-300 </td><td> Steriel, barcodes optionele </td></tr><tr><td> RNAlater </td><td> Ambion </td><td> AM7021 </td><td></td></tr><tr><td> Chirurgische Pathologie Ink </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cassettes </td><td> Mercedes Medische </td><td> CAS ECO109 </td><td></td></tr><tr><td> 10% neutraal gebufferde formaline </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-245-685 </td><td></td></tr><tr><td> Oktober Invriezen Media </td><td> TissueTek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Matrijzen </td><td> ThermoScientific </td><td> 58952 </td><td> Diverse maten </td></tr><tr><td> Isopentaan </td><td> Fisher Scientific </td><td> O3551-4 </td><td> Oktober koelen bad </td></tr><tr><td> Droogijs </td><td></td><td></td><td> Oktober koelen bad </td></tr><tr><td> Vloeibare stikstof in dewarvat </td><td></td><td></td><td> Snap bevriezing cryovials </td></tr><tr><td> Celcultuur schotel (100mm) </td><td> Corning </td><td> 430167 </td><td> Steriel </td></tr><tr><td> Hyclone DMEF </td><td> ThermoScientific </td><td> SH30023.01 </td><td> Steriel, de koelkast bewaren, glutamine opgenomen </td></tr><tr> &lt;td&gt; Foetaal runderserum </td><td> Cellgro </td><td> 35 tot 010-CV </td><td> Steriel, op te slaan bevroren aliquots </td></tr><tr><td> Penicilline / streptomycine / Antischimmel </td><td> GIBCO </td><td> 15240-062 </td><td> Steriel, op te slaan bevroren aliquots </td></tr><tr><td> Type 9 Paraffine </td><td> Richard-Allan Wetenschappelijk </td><td> 8337 </td><td></td></tr><tr><td> 1X D-PBS </td><td> GIBCO </td><td> 14190-144 </td><td> Steriel </td></tr><tr><td> 16% paraformaldehyde </td><td> EM Sciences </td><td> 15710 </td><td> Maak verse, gekoeld bewaren </td></tr><tr><td> 8% glutaaraldehyde </td><td> EM Sciences </td><td> 16019 </td><td> Maak verse, gekoeld bewaren </td></tr><tr><td> Biosafety Level 2 kap </td><td> Diverse </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ultra-low vriezer </td><td> Diverse </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sakura Cassette Printer </td><td> Sakura </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sakura VIP300 </td><td> Sakura </td><td></td><td> Automatische paraffine-processor </td></tr><tr><td> Paraffine Embedding Station </td><td> ThermoFisher </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabel 1. Specifieke reagentia en materialen.

collection protocol for human pancreas

Deze dissectie en bemonsteringsprocedure is ontwikkeld voor het netwerk voor Pancreatic Organ Donors met diabetes (nPOD) programma om de voorbereiding van de alvleesklier hersteld van postmortale orgaandonoren te standaardiseren. De alvleesklier is verdeeld in 3 grote regio&#39;s (hoofd, lichaam, staart), gevolgd door seriële dwarsprofielen in de mediale naar laterale as. Afwisselend secties worden gebruikt voor vaste paraffine en vers bevroren blokken en resterende monsters worden versneden voor snap bevroren monster preparaten, met of zonder RNAse inhibitoren DNA, RNA of eiwit isolatie. Het algemene doel van de alvleesklier dissectie procedure is om de hele alvleesklier te proeven met behoud van anatomische oriëntatie. Endocriene cellen heterogeniteit op het vlak van eilandje samenstelling, grootte, en getallen wordt gerapporteerd voor de menselijke eilandjes ten opzichte van knaagdieren eilandjes 1. De meerderheid van de menselijke eilandjes uit de alvleesklier hoofd, lichaam en staart regio&#39;s bestaat uit insuline-containing β-cellen gevolgd door lagere aantal glucagon bevattende α-cellen en somatostatine bevattende δ-cellen. Alvleesklier polypeptide bevattende PP cellen en ghreline-bevattende epsilon-cellen zijn ook aanwezig, maar in kleine aantallen. In tegenstelling, de uncinate gebied bevat eilandjes die hoofdzakelijk bestaan ​​uit pancreas polypeptide bevatten PP cellen 2. Deze regionale eilandje verschillen komen voort uit verschillen in ontwikkeling. De alvleesklier ontwikkelt zich uit de ventrale en dorsale alvleesklier knoppen in de voordarm en na rotatie van de maag en de twaalfvingerige darm, de ventrale lob beweegt en zekeringen met de dorsale 3. De ventrale lob vormt het achterste deel van de kop met de uncinate proces terwijl de dorsale nok geeft aanleiding tot de rest van het orgel. Regionale pancreas variatie wordt ook gemeld met de staart gebied met hogere dichtheid eilandje in vergelijking met andere regio&#39;s en de dorsale lob-afgeleide componenten die een selectief atrofie bij type 1 diabetes <sup&gt; 4,5. Extra organen en weefsels worden vaak hersteld van de orgaandonoren en zijn lymfklieren, milt en niet-lymfklieren. Deze monsters worden teruggewonnen met soortgelijke formaten de pancreas met de toevoeging van isolatie van cryogeconserveerde cellen. Wanneer de proximale twaalfvingerige darm wordt meegeleverd met de alvleesklier, de twaalfvingerige darm slijmvlies kan worden verzameld voor paraffine en bevroren blokken en gehakt snap bevroren bereidingen.

Watch this Scientific Journal Video about Collection Protocol for Human Pancreas at JoVE.com

Collection Protocol for Human Pancreas

Deze video toont een dissectie procedure voor de verwerking van de menselijke pancreas in meerdere opslagformaten. Anatomische oriëntatie wordt gedurende de gehele pancreas regio&#39;s definitie van regionale eilandje samenstelling en dichtheid mogelijk te maken.

Collectie Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Improved Protocol For Laser Microdissection Of Human Pancreatic Islets From Surgical Specimens

Verbeterd protocol voor Laser Microdissection der humane pancreatische eilandjes Van Chirurgische Specimens

Laser microdissection (LMD) is a technique that allows the recovery of selected cells and tissues from minute amounts of parenchyma 1,2. The dissected ...

Collection, Isolation, and Flow Cytometric Analysis of Human Endocervical Samples

Collectie, Isolatie, en Flowcytometrische analyse van de menselijke Endocervicale Monsters

Despite the public health importance of mucosal pathogens (including HIV), relatively little is known about mucosal immunity, particularly at the female ...

A Detailed Protocol for Perspiration Monitoring Using a Novel, Small, Wireless Device

Een gedetailleerd protocol voor het Zweet Monitoring Met behulp van een roman, Kleine, draadloze apparaten

Perspiration monitoring can be utilized for the detection of certain diseases, such as thermoregulation and mental disorders, particularly when the ...

Mouse Model for Pancreas Transplantation Using a Modified Cuff Technique

Muismodel voor Pancreas transplantatie met behulp van een gemodificeerde manchet techniek

Mouse models have several advantages in transplantation research, including easy handling, a variety of genetically well-defined strains, and the ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

Dissectie van de alvleesklier muis voor histologisch analyse en metabole profilering

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Robotic Lateral Pancreaticojejunostomy for Chronic Pancreatitis

Robotische laterale Pancreaticojejunostomy voor chronische pancreatitis

Lateral pancreaticojejunostomy (LPJ) has shown good postoperative outcomes in patients with painful, morphine dependent, chronic pancreatitis (CP). The ...

Laparoscopic Radical Left Pancreatectomy for Pancreatic Cancer: Surgical Strategy and Technique Video

Laparoscopische Radicaal Links Pancreatectomie voor alvleesklierkanker: Chirurgische strategie en techniek Video

Radical resection margins, resection of Gerota&#8217;s (perirenal) fascia, and adequate lymph node dissection are crucial for an adequate oncological ...

Robot-Assisted Kidney Transplantation

Robot-geassisteerde niertransplantatie

This paper describes robot-assisted kidney transplantation (RAKT) from a living donor. The robot is docked between the parted legs of the patient, placed ...

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Stabilized Longitudinal In Vivo Cellular-Level Visualization of the Pancreas in a Murine Model with a Pancreatic Intravital Imaging Window

Gestabiliseerde longitudinale in vivo cellulaire visualisatie van de alvleesklier in een murien model met een pancreas intravital imaging venster

Direct in vivo cellular-resolution imaging of the pancreas in a live small animal model has been technically challenging. A recent intravital imaging ...

Collection, Expansion, and Differentiation of Primary Human Nasal Epithelial Cell Models for Quantification of Cilia Beat Frequency

Verzameling, uitbreiding en differentiatie van primaire menselijke nasale epitheelcelmodellen voor kwantificering van Cilia Beat Frequency

Measurements of cilia function (beat frequency, pattern) have been established as diagnostic tools for respiratory diseases such as primary ciliary ...